發(fā)布時間：2018-01-16 12:02

  本文關(guān)鍵詞：梔子水提液及梔子苷對OGD-Rep損傷的SH-SY5Y細胞保護作用及機制研究　出處：《北京中醫(yī)藥大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：缺血性中風(fēng)是指突然發(fā)生的腦血流供應(yīng)障礙引起缺血缺氧,導(dǎo)致局限性腦組織缺血性壞死或腦軟化的疾病。如果缺血性中風(fēng)在最佳治療時間窗內(nèi)得不到有效治療,嚴重者會留下視力障礙、語言喪失、癱瘓和意識錯亂等不同程度的功能障礙,甚至導(dǎo)致死亡,嚴重危害人類的健康。中醫(yī)藥防治缺血性中風(fēng)有獨特優(yōu)勢,且醫(yī)學(xué)界已公認缺血性中風(fēng)是中醫(yī)學(xué)防治的優(yōu)勢病種。課題組在研究缺血性中風(fēng)方面已積累了經(jīng)驗,發(fā)現(xiàn)清開靈、精制清開靈對缺血性中風(fēng)模型大鼠有很好的療效,其中梔子、梔子苷作為主要成分發(fā)揮了重要作用。缺血性中風(fēng)的發(fā)病過程中,除了炎癥、局部淤血刺激以外,神經(jīng)細胞損傷、凋亡是非常重要的發(fā)病環(huán)節(jié)。并且在腦缺血后由于能量障礙引起的神經(jīng)細胞損傷、凋亡的機制研究中,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、自噬所扮演的角色越來越受到重視。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與自噬在缺血性中風(fēng)的病理機制中各自獨立卻又密切聯(lián)系,目前多數(shù)研究認為,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可以促進自噬流,反過來,自噬可以減弱內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。這可能與自噬清除多余的廢棄蛋白從而減弱內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有關(guān)。目前有一種假說認為自噬通過減弱過度的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激從而對抗神經(jīng)元凋亡。本課題主要從細胞水平研究梔子及其代表性成份梔子苷對能量障礙損傷的神經(jīng)細胞的保護作用,并初步探討梔子苷對細胞凋亡、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、自噬的調(diào)節(jié)機制,希望為梔子、梔子苷的神經(jīng)保護作用提供更多的科學(xué)依據(jù)。1目的1.1摸索梔子水提液、h斪榆斬許H-SY5Y細胞毒性及其給藥劑量范圍1.2觀察梔子水提液、梔子苷對正常及OGD-Rep損傷的SH-SY5Y細胞的保護作用。1.3探討梔子苷的神經(jīng)保護作用是否與抗凋亡、干預(yù)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、自噬相關(guān)。2方法2.1利用人神經(jīng)母細胞瘤細胞SH-SY5Y建立OGD-Rep模型2.2運用CCK-8法檢測細胞存活率2.3 JC-1染色檢測細胞凋亡情況。Western blot法檢測caspase12蛋白表達。2.4 Western blot 法檢測 Bip/GRP78、CHOP 蛋白表達。2.5 吖啶橙(Acridine Orange,AO)、MDC(Dansylcadaverine)熒光染色法檢測細胞內(nèi)自噬水平。間接免疫熒光法檢測各組細胞LC3Ⅱ、P62蛋白表達,Western blot法檢測LC3Ⅱ、P62蛋白表達。3結(jié)果3.1梔子水提液、梔子苷的細胞毒性檢測3.1.1 CCK8法檢測細胞活力結(jié)果顯示,0.1 μ g/mL、1 μ g/mL低濃度的梔子水提液可提高正常細胞的活性,促進其生長(P0.05);而2000 μg/mL梔子水提液對正常細胞表現(xiàn)出抑制作用(P0.001)。3.1.2 CCK-8檢測結(jié)果顯示,梔子苷各濃度組細胞活力與正常組比較無顯著差異。3.2對糖氧剝奪-復(fù)糖復(fù)氧(OGD-Rep)細胞模型的活力影響3.2.1梔子水提液、梔子苷對OGD12h-Rep2h細胞模型的活力影響① 10μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、500μg/mL、1000μg/mL 梔子水提液組細胞活力較模型組細胞活力顯著增強(P0.05),并且細胞活力的增強與藥物的濃度有劑量依賴性關(guān)系,梔子水提液的濃度越高,細胞活力增強越明顯。②1μg/mL梔子苷、10μg/mL梔子昔組細胞活力與模型組無顯著差異,100μg/mL、500μg/mL、1000μg/mL梔子苷組細胞活力較模型組增強,有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。3.2.2h斪榆斬圓煌�时间OGD-Rep誘導(dǎo)損傷的細胞活力影響。①OGD6h-Rep2h,細胞損傷程度非常輕,1μg/mL、10μg/mL、100μg/mL的梔子苷組與模型組比較細胞活力顯著增強(P0.05),500 μ g/mL梔子苷組、1000 μ g/mL梔子苷組及陽性藥依達拉奉組細胞活力與模型組比較沒有顯著增強。②OGD9h-Rep2h,損傷程度較6h重,此時陽性藥依達拉奉依然沒有表現(xiàn)出保護作用,1μg/mL梔子苷的保護作用消失,10μg/mL梔子苷組、100μg/mL梔子苷組、500μg/mL梔子苷組、1000 μg/mL梔子苷組與模型組比較細胞活力顯著增強P0.05),且隨著梔子苷濃度的增高,對SH-SY5Y保護作用越明顯。③OGD11h-Rep2h,損傷程度較9h更重,陽性藥依達拉奉組細胞活力高于模型組,1 μ g/mLh斪榆盞謀；ぷ饔孟�剩�

本文編號：1433004