發(fā)布時間：2018-01-16 12:02

  本文關(guān)鍵詞：梔子水提液及梔子苷對OGD-Rep損傷的SH-SY5Y細(xì)胞保護(hù)作用及機(jī)制研究　出處：《北京中醫(yī)藥大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：缺血性中風(fēng)是指突然發(fā)生的腦血流供應(yīng)障礙引起缺血缺氧,導(dǎo)致局限性腦組織缺血性壞死或腦軟化的疾病。如果缺血性中風(fēng)在最佳治療時間窗內(nèi)得不到有效治療,嚴(yán)重者會留下視力障礙、語言喪失、癱瘓和意識錯亂等不同程度的功能障礙,甚至導(dǎo)致死亡,嚴(yán)重危害人類的健康。中醫(yī)藥防治缺血性中風(fēng)有獨特優(yōu)勢,且醫(yī)學(xué)界已公認(rèn)缺血性中風(fēng)是中醫(yī)學(xué)防治的優(yōu)勢病種。課題組在研究缺血性中風(fēng)方面已積累了經(jīng)驗,發(fā)現(xiàn)清開靈、精制清開靈對缺血性中風(fēng)模型大鼠有很好的療效,其中梔子、梔子苷作為主要成分發(fā)揮了重要作用。缺血性中風(fēng)的發(fā)病過程中,除了炎癥、局部淤血刺激以外,神經(jīng)細(xì)胞損傷、凋亡是非常重要的發(fā)病環(huán)節(jié)。并且在腦缺血后由于能量障礙引起的神經(jīng)細(xì)胞損傷、凋亡的機(jī)制研究中,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、自噬所扮演的角色越來越受到重視。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與自噬在缺血性中風(fēng)的病理機(jī)制中各自獨立卻又密切聯(lián)系,目前多數(shù)研究認(rèn)為,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可以促進(jìn)自噬流,反過來,自噬可以減弱內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。這可能與自噬清除多余的廢棄蛋白從而減弱內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有關(guān)。目前有一種假說認(rèn)為自噬通過減弱過度的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激從而對抗神經(jīng)元凋亡。本課題主要從細(xì)胞水平研究梔子及其代表性成份梔子苷對能量障礙損傷的神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用,并初步探討梔子苷對細(xì)胞凋亡、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、自噬的調(diào)節(jié)機(jī)制,希望為梔子、梔子苷的神經(jīng)保護(hù)作用提供更多的科學(xué)依據(jù)。1目的1.1摸索梔子水提液、h斪榆斬許H-SY5Y細(xì)胞毒性及其給藥劑量范圍1.2觀察梔子水提液、梔子苷對正常及OGD-Rep損傷的SH-SY5Y細(xì)胞的保護(hù)作用。1.3探討梔子苷的神經(jīng)保護(hù)作用是否與抗凋亡、干預(yù)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、自噬相關(guān)。2方法2.1利用人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SH-SY5Y建立OGD-Rep模型2.2運用CCK-8法檢測細(xì)胞存活率2.3 JC-1染色檢測細(xì)胞凋亡情況。Western blot法檢測caspase12蛋白表達(dá)。2.4 Western blot 法檢測 Bip/GRP78、CHOP 蛋白表達(dá)。2.5 吖啶橙(Acridine Orange,AO)、MDC(Dansylcadaverine)熒光染色法檢測細(xì)胞內(nèi)自噬水平。間接免疫熒光法檢測各組細(xì)胞LC3Ⅱ、P62蛋白表達(dá),Western blot法檢測LC3Ⅱ、P62蛋白表達(dá)。3結(jié)果3.1梔子水提液、梔子苷的細(xì)胞毒性檢測3.1.1 CCK8法檢測細(xì)胞活力結(jié)果顯示,0.1 μ g/mL、1 μ g/mL低濃度的梔子水提液可提高正常細(xì)胞的活性,促進(jìn)其生長(P0.05);而2000 μg/mL梔子水提液對正常細(xì)胞表現(xiàn)出抑制作用(P0.001)。3.1.2 CCK-8檢測結(jié)果顯示,梔子苷各濃度組細(xì)胞活力與正常組比較無顯著差異。3.2對糖氧剝奪-復(fù)糖復(fù)氧(OGD-Rep)細(xì)胞模型的活力影響3.2.1梔子水提液、梔子苷對OGD12h-Rep2h細(xì)胞模型的活力影響① 10μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、500μg/mL、1000μg/mL 梔子水提液組細(xì)胞活力較模型組細(xì)胞活力顯著增強(P0.05),并且細(xì)胞活力的增強與藥物的濃度有劑量依賴性關(guān)系,梔子水提液的濃度越高,細(xì)胞活力增強越明顯。②1μg/mL梔子苷、10μg/mL梔子昔組細(xì)胞活力與模型組無顯著差異,100μg/mL、500μg/mL、1000μg/mL梔子苷組細(xì)胞活力較模型組增強,有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。3.2.2h斪榆斬圓煌�时间OGD-Rep誘導(dǎo)損傷的細(xì)胞活力影響。①OGD6h-Rep2h,細(xì)胞損傷程度非常輕,1μg/mL、10μg/mL、100μg/mL的梔子苷組與模型組比較細(xì)胞活力顯著增強(P0.05),500 μ g/mL梔子苷組、1000 μ g/mL梔子苷組及陽性藥依達(dá)拉奉組細(xì)胞活力與模型組比較沒有顯著增強。②OGD9h-Rep2h,損傷程度較6h重,此時陽性藥依達(dá)拉奉依然沒有表現(xiàn)出保護(hù)作用,1μg/mL梔子苷的保護(hù)作用消失,10μg/mL梔子苷組、100μg/mL梔子苷組、500μg/mL梔子苷組、1000 μg/mL梔子苷組與模型組比較細(xì)胞活力顯著增強P0.05),且隨著梔子苷濃度的增高,對SH-SY5Y保護(hù)作用越明顯。③OGD11h-Rep2h,損傷程度較9h更重,陽性藥依達(dá)拉奉組細(xì)胞活力高于模型組,1 μ g/mLh斪榆盞謀；ぷ饔孟��，

本文編號：1433004