發(fā)布時間：2018-01-21 12:46

  本文關(guān)鍵詞： 食管癌 放化療敏感性 MGMT Survivin　出處：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的比較KYSE-450、KYSE-70、TE-1食管鱗癌細胞株對放射線和化療藥物(氟尿嘧啶和順鉑)的敏感性,并檢測O^6-甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(MGMT)和生存蛋白(Survivin)在其中的表達情況。方法1.MTT實驗檢測KYSE-450、KYSE-70、TE-1食管鱗癌細胞株在不同濃度順鉑和氟尿嘧啶藥物中的存活分數(shù),并利用半數(shù)抑制濃度(IC50)值評估細胞株對化療藥物的耐受性;2.克隆形成實驗檢測KYSE-450、KYSE-70、TE-1食管鱗癌細胞株在不同劑量照射后的存活分數(shù),并利用單擊多靶模型擬合劑量存活曲線計算放射生物學(xué)參數(shù)D0、Dq、N、SF2以評價3株細胞系對放射線的敏感性;3.Western blot和q RT-PCR檢測KYSE-450、KYSE-70、TE-1食管鱗癌細胞株中MGMT和Survivin的表達情況。結(jié)果1.KYSE-450、KYSE-70、TE-1細胞照射劑量存活曲線及其生物學(xué)參數(shù):采用Graph Pad Prism 5.0進行細胞生存曲線的擬合,結(jié)果顯示,隨著照射劑量的增加,KYSE-450、KYSE-70、TE-1食管鱗癌細胞株的細胞存活分數(shù)都相應(yīng)減少。上述結(jié)果表明,KYSE-70對放射線較為敏感,TE-1和KYSE-450對放射線均較為耐受。2.KYSE-450、KYSE-70、TE-1細胞在不同濃度DDP和5-FU中的劑量存活曲線及其IC50值:DDP和5-FU作用48 h,食管鱗癌細胞株KYSE-450、KYSE-70、TE-1在不同濃度化療藥物中細胞存活率具有明顯差異,說明其對不同濃度化療藥物的耐受能力具有明顯不同,而根據(jù)IC50計算軟件計算出不同細胞株相對不同化療藥物的IC50值,也證實了食管鱗癌細胞株TE-1對化療藥物DDP(TE-1細胞對DDP的IC50值約是KYSE-70的9倍)和5-FU(TE-1細胞對5-FU的IC50值約是KYSE-70的133倍)較為耐受。與TE-1細胞的IC50值比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(F=199.9、157.9,P0.05)。3.MGMT和Survivin蛋白在KYSE-450、KYSE-70、TE-1細胞系中的表達:TE-1細胞MGMT蛋白和Survivin蛋白表達最高,其次是KYSE-70、KYSE-450。與TE-1細胞MGMT蛋白和Survivin蛋白表達水平比較,差異均統(tǒng)計學(xué)意義(F=367.7、213.5,P0.05)。4.實時熒光定量PCR驗證:針對MGMT和Survivin在TE-1(耐受細胞株)和KYSE-70(敏感細胞株)中的表達情況,β-actin作為內(nèi)參對照,使用實時熒光定量PCR對其表達差異進行驗證。MGMT在TE-1細胞中,與KYSE-70相比表達高(5.47±0.32)倍;Survivin在TE-1細胞中,與KYSE-70相比表達高(2.73±0.26)倍,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=24.63、6.84,P0.05)。MGMT和Survivin的表達在TE-1中均高于KYSE-70,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1.在用MTT實驗檢測TE-1和KYSE-70化療敏感性的實驗中,TE-1在順鉑和氟尿嘧啶中的IC50值高于KYSE-70(P0.05),表明在化療藥物順鉑和氟尿嘧啶中,KYSE-70對其較為敏感,TE-1則較為耐受。2.在用克隆形成實驗比較TE-1和KYSE-70對放射線的敏感性實驗中,細胞生存曲線及各項參數(shù)均顯示TE-1較KYSE-70對放射線耐受(P0.05)。3.在用蛋白質(zhì)免疫印記(Western blot)檢測MGMT和Survivin在TE-1和KYSE-70的表達水平,結(jié)果顯示TE-1細胞MGMT蛋白和Survivin蛋白表達最高,其次是KYSE-70、KYSE-450。4.在用實時熒光定量PCR檢測MGMT和Survivin在TE-1(耐受細胞株)和KYSE-70(敏感細胞株)中的表達情況,結(jié)果顯示MGMT在TE-1細胞中,與KYSE-70相比表達高;Survivin在TE-1細胞中,與KYSE-70相比表達高。5.MGMT和Survivin在對化療藥物和放射線耐受的細胞株中表達水平較高,在對化療藥物和放射線敏感的細胞株中表達較低,這為更好地研究食管癌放化療耐受機制提供了實驗依據(jù)。
[Abstract]:The survival fraction of KYSE - 450 , KYSE - 70 , TE - 1 esophageal squamous cell carcinoma cell line in different concentrations of DDP and 5 - FU was measured by MTT assay . Compared with KYSE - 70 , the expression of MGMT and Survivin in TE - 1 cells was higher than that of KYSE - 70 .

【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R735.1

【參考文獻】

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本文編號：1451519