發(fā)布時(shí)間：2020-12-03 22:50

　　目的:利用噬菌體展示技術(shù)體內(nèi)篩選法獲得人髓樣乳腺癌細(xì)胞Bcap-37特異性結(jié)合肽,為乳腺癌早期診斷提供分子靶向探針。方法:制備人髓樣乳腺癌Bcap-37細(xì)胞荷瘤裸鼠模型,采用噬菌體環(huán)七肽庫(kù)進(jìn)行3輪體內(nèi)篩選。免疫組化檢測(cè)篩選過(guò)程中噬菌體在腫瘤及正常組織中的分布情況。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）鑒定單克隆噬菌體對(duì)Bcap-37細(xì)胞的親和力。提取陽(yáng)性單克隆噬菌體DNA并測(cè)序,選取重復(fù)率高的序列合成多肽,制備光學(xué)分子探針。MTT法檢測(cè)多肽及光學(xué)分子探針對(duì)Bcap-37細(xì)胞的毒性。用熒光倒置顯微鏡術(shù)和流式細(xì)胞術(shù)鑒定光學(xué)分子探針與Bcap-37細(xì)胞的特異性。最后在荷瘤裸鼠模型體內(nèi)驗(yàn)證其對(duì)乳腺移植瘤的特異性和靶向性。結(jié)果:1經(jīng)過(guò)三輪體內(nèi)篩選,獲得了特異性結(jié)合Bcap-37細(xì)胞異體移植瘤的噬菌體。隨著每輪篩選,噬菌體的回收率不斷提高,第三輪的回收率是第一輪的107.2倍。2免疫組化結(jié)果顯示,隨著篩選輪數(shù)的增加,腫瘤組織中結(jié)合的噬菌體數(shù)依次增加,腫瘤組織中噬菌體結(jié)合數(shù)明顯高于正常組織。腫瘤組織切片掃描圖像的吸光度（A）值均較正常組織高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05）。3經(jīng)ELISA鑒定,隨... 

【文章來(lái)源】： 郭超 山西醫(yī)科大學(xué)

【文章頁(yè)數(shù)】：47 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

人髓樣乳腺癌Bcap-37細(xì)胞荷瘤裸鼠模型

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文132結(jié)果2.1荷瘤裸鼠模型的建立接種人髓樣乳腺癌Bcap-37細(xì)胞與Matrigel基底膜基質(zhì)膠混懸液的裸鼠，2周內(nèi)注射部位無(wú)明顯變化。3周后，前肢腋窩部逐漸隆起長(zhǎng)徑約0.3～0.5cm的腫瘤。4～5周后瘤體長(zhǎng)徑可達(dá)2～2.5cm，形狀規(guī)則近似球形，觸之質(zhì)地均一，無(wú)化膿和破損。（圖2-1）圖2-1人髓樣乳腺癌Bcap-37細(xì)胞荷瘤裸鼠模型2.2腫瘤組織特異性結(jié)合噬菌體的富集經(jīng)過(guò)三輪體內(nèi)篩選，獲得了能特異性結(jié)合Bcap-37細(xì)胞異體移植瘤的噬菌體。每輪篩選前，通過(guò)調(diào)整保持所加入噬菌體數(shù)量基本相同，但篩選后，從重量接近的腫瘤組織中回收的噬菌體數(shù)量逐漸增加，即表明回收率在不斷提高。第三輪篩選中噬菌體的回收率是第一輪的107.2倍，富集效果明顯。（圖2-2,表2-1）圖2-2三輪篩選中腫瘤組織洗脫噬菌體滴度測(cè)試

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文14注：藍(lán)色斑點(diǎn)為噬菌斑，代表一個(gè)陽(yáng)性單克隆噬菌體。2A-2C分別為第一、二、三輪篩選后所回收噬菌的結(jié)果。表2-1每輪體內(nèi)篩選中的噬菌體回收率輪次腫瘤重量（g）投入噬菌體數(shù)(pfu)回收噬菌體數(shù)(pfu)回收率第1輪0.451.0×10101.0×1042.222×10-6第2輪0.411.0×10105.0×1041.220×10-5第3輪0.421.0×10101.0×1062.381×10-4注：回收率=回收噬菌體數(shù)/投入噬菌體數(shù)/腫瘤重量2.3篩選中噬菌體在不同組織的分布情況三輪篩選中所分離腫瘤組織的免疫組化結(jié)果顯示：隨著每一輪篩選，與Bcap-37細(xì)胞異體移植瘤結(jié)合的噬菌體逐漸增加。全自動(dòng)病理組織切片掃描儀輸出的結(jié)果顯示：三輪篩選中腫瘤組織切片掃描圖像的A值逐漸增高且均高于空白對(duì)照腫瘤組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05）。（圖2-3,表2-2）圖2-3免疫組化鑒定三輪篩選中與腫瘤組織結(jié)合的噬菌體注：3A.空白對(duì)照為未參與篩選的移植瘤組織，3B-3D.分別為一、二、三輪篩選中的腫瘤組織，3A-3D均為DAB染色，放大200倍。表2-2三輪篩選中腫瘤組織切片掃描圖像的吸光度(A)值(ｘ_±ｓ)腫瘤組織A值空白對(duì)照0.83±0.07第一輪4.46±0.68第二輪8.08±0.95第三輪12.28±1.79注：每輪篩選中腫瘤組織與空白對(duì)照相比，P<0.05；每輪篩選的腫瘤組織之間相比，P<0.05。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]光學(xué)分子影像學(xué)在腫瘤外科應(yīng)用的前景[J]. 楊曉峰.  腫瘤防治研究. 2018(06)
[3]中國(guó)女性乳腺癌篩查現(xiàn)狀及適宜模式探索[J]. 沈松杰,孫強(qiáng).  協(xié)和醫(yī)學(xué)雜志. 2018(04)
[4]腫瘤導(dǎo)向肽的研究進(jìn)展[J]. 苗婕,張瑞,楊曉峰.  生命的化學(xué). 2016(02)
[5]異硫氰酸熒光素在熒光標(biāo)記領(lǐng)域的應(yīng)用[J]. 張雪梅,胡志宇.  昆明學(xué)院學(xué)報(bào). 2015(06)
[6]異硫氰酸熒光素-CSNRDARRC分子探針的熒光特性及其在體標(biāo)記膀胱癌原位移植瘤的靶向性研究[J]. 閆三華,龐建智,楊曉峰,劉杰昊,張自強(qiáng),張帆,羅俊茜.  中華泌尿外科雜志. 2015 (09)
[7]肝癌特異性結(jié)合肽的篩選及鑒定[J]. 朱小華,吳華.  中華核醫(yī)學(xué)雜志. 2004(06)



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