Notch3表達異常影響胎盤滋養(yǎng)細胞分化的檢測分析與調(diào)控機制研究
發(fā)布時間：2020-12-04 11:41
合體滋養(yǎng)細胞作為母胎屏障的重要組成部分,承擔(dān)母胎間營養(yǎng)、氣體交換和激素分泌等生物學(xué)功能,在維持正常妊娠的過程中扮演重要角色。Notch信號在人干細胞生態(tài)位的自我更新和分化,決定細胞命運發(fā)揮重要作用。Notch3作為Notch信號通路受體蛋白,亦可決定人胎盤滋養(yǎng)細胞命運,但其在人胎盤合體滋養(yǎng)細胞分化中的作用,以及此生物過程調(diào)控異常是否參與子癇前期的發(fā)生,目前均不明確。本研究利用人早孕絨毛、足月胎盤組織、原代滋養(yǎng)細胞（Primary Human Trophoblast,PHT）及BeWo細胞合體化模型,采用IFC、IHC、Western blot及qRT-PCR等檢測技術(shù),驗證Notch3在人胎盤滋養(yǎng)細胞中的表達模式,明確Notch3在滋養(yǎng)細胞合體化過程中的作用;采用血清饑餓法阻滯BeWo細胞周期驗證細胞周期阻滯對滋養(yǎng)細胞合體化過程的影響;利用缺氧培養(yǎng)BeWo細胞模型驗證缺氧對滋養(yǎng)細胞合體化過程的影響;最后利用Ad-N3ICD腺病毒構(gòu)建體內(nèi)Notch3過表達孕鼠模型,明確Notch3對孕鼠的影響以及探究Notch3在子癇前期發(fā)病中的作用�，F(xiàn)研究結(jié)果如下:一、Notch3在人胎盤滋養(yǎng)細胞中的...
【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市
【文章頁數(shù)】：75 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
Notch家族在人原代滋養(yǎng)細胞合體化中的檢測
重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文29養(yǎng)細胞，模擬滋養(yǎng)細胞合體化過程。IHC檢測Notch3的表達，結(jié)果顯示，早孕絨毛外層的合體滋養(yǎng)細胞被成功的破壞并重新誘導(dǎo)生成合體滋養(yǎng)細胞；Notch3表達于細胞滋養(yǎng)細胞中，并在新生的合體滋養(yǎng)細胞中基本不表達（圖2C）。這進一步驗證了Notch3主要表達于細胞滋養(yǎng)細胞中，并在滋養(yǎng)細胞合體化中下調(diào)表達。圖2Notch3在人早孕絨毛及足月胎盤組織中檢測分析A.IF檢測人早孕絨毛中Notch3和CK7的表達。細胞核使用DAPI染色。箭頭指示CK7標(biāo)記絨毛中單核的細胞滋養(yǎng)細胞，比例尺：20μm。B.IHC檢測人早孕絨毛及足月胎盤中Notch3的表達。細胞核使用蘇木精染色。箭頭指示CK7標(biāo)記絨毛中單核的細胞滋養(yǎng)細胞，比例尺：20μm。C.IHC檢測人早孕絨毛合體滋養(yǎng)細胞重建模型中Notch3的表達，(a、b)為絨毛合體滋養(yǎng)細胞消化組織；(c、d)為FSK誘導(dǎo)絨毛合體滋養(yǎng)細胞重建組織。細胞核使用蘇木精染色。箭頭指示CK7標(biāo)記絨毛中單核的細胞滋養(yǎng)細胞，比例尺：20μm。Figure2TheexpressionpatternofNotch3inhumanearlypregnancyvillousandtermplacentaA.ImmunofluorescencestainingofNotch3andCK7inthehumanplacentavillousfromthefirsttrimester.NuclearwerestainedwithDAPI.CK7-labeledmonocyteCTBcellsinthevillous(indicatedbyarrows);Scalebarrepresents20μm.B.ImmunohistochemicalstainingofNotch3,
重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文31圖3Notch3對BeWo細胞合體化的影響A.IFC檢測BeWo細胞合體化中Notch3和E-Cad的表達。細胞核使用DAPI染色。比例尺：20μm。B.Westernblot檢測BeWo細胞合體化中Notch3,Syn2,GCM1及β-hCG的表達。C.qRT-PCR檢測BeWo細胞合體化中Notch3,Hey1,Syn2,GCM1和β-hCG的mRNA水平。結(jié)果表示為平均值±樣本標(biāo)準(zhǔn)差；*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。D.Westernblot檢測DAPT
【參考文獻】：
期刊論文
[1]缺氧誘導(dǎo)因子1α和血管內(nèi)皮生長因子在子宮內(nèi)膜癌中的表達及臨床意義[J]. 孫文惠子,Dhruba Paudel,歐陽一芹,宋思蕊,童曉文,李懷芳,王建軍,初磊. 第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報. 2019(04)
[2]缺氧對胎盤滋養(yǎng)層細胞細胞周期和凋亡的影響[J]. 趙海君,張園,高玲玲,高超,崔毓桂,劉嘉茵. 江蘇醫(yī)藥. 2012(19)
本文編號：2897541
【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市
【文章頁數(shù)】：75 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
Notch家族在人原代滋養(yǎng)細胞合體化中的檢測
重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文29養(yǎng)細胞，模擬滋養(yǎng)細胞合體化過程。IHC檢測Notch3的表達，結(jié)果顯示，早孕絨毛外層的合體滋養(yǎng)細胞被成功的破壞并重新誘導(dǎo)生成合體滋養(yǎng)細胞；Notch3表達于細胞滋養(yǎng)細胞中，并在新生的合體滋養(yǎng)細胞中基本不表達（圖2C）。這進一步驗證了Notch3主要表達于細胞滋養(yǎng)細胞中，并在滋養(yǎng)細胞合體化中下調(diào)表達。圖2Notch3在人早孕絨毛及足月胎盤組織中檢測分析A.IF檢測人早孕絨毛中Notch3和CK7的表達。細胞核使用DAPI染色。箭頭指示CK7標(biāo)記絨毛中單核的細胞滋養(yǎng)細胞，比例尺：20μm。B.IHC檢測人早孕絨毛及足月胎盤中Notch3的表達。細胞核使用蘇木精染色。箭頭指示CK7標(biāo)記絨毛中單核的細胞滋養(yǎng)細胞，比例尺：20μm。C.IHC檢測人早孕絨毛合體滋養(yǎng)細胞重建模型中Notch3的表達，(a、b)為絨毛合體滋養(yǎng)細胞消化組織；(c、d)為FSK誘導(dǎo)絨毛合體滋養(yǎng)細胞重建組織。細胞核使用蘇木精染色。箭頭指示CK7標(biāo)記絨毛中單核的細胞滋養(yǎng)細胞，比例尺：20μm。Figure2TheexpressionpatternofNotch3inhumanearlypregnancyvillousandtermplacentaA.ImmunofluorescencestainingofNotch3andCK7inthehumanplacentavillousfromthefirsttrimester.NuclearwerestainedwithDAPI.CK7-labeledmonocyteCTBcellsinthevillous(indicatedbyarrows);Scalebarrepresents20μm.B.ImmunohistochemicalstainingofNotch3,
重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文31圖3Notch3對BeWo細胞合體化的影響A.IFC檢測BeWo細胞合體化中Notch3和E-Cad的表達。細胞核使用DAPI染色。比例尺：20μm。B.Westernblot檢測BeWo細胞合體化中Notch3,Syn2,GCM1及β-hCG的表達。C.qRT-PCR檢測BeWo細胞合體化中Notch3,Hey1,Syn2,GCM1和β-hCG的mRNA水平。結(jié)果表示為平均值±樣本標(biāo)準(zhǔn)差；*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。D.Westernblot檢測DAPT
【參考文獻】：
期刊論文
[1]缺氧誘導(dǎo)因子1α和血管內(nèi)皮生長因子在子宮內(nèi)膜癌中的表達及臨床意義[J]. 孫文惠子,Dhruba Paudel,歐陽一芹,宋思蕊,童曉文,李懷芳,王建軍,初磊. 第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報. 2019(04)
[2]缺氧對胎盤滋養(yǎng)層細胞細胞周期和凋亡的影響[J]. 趙海君,張園,高玲玲,高超,崔毓桂,劉嘉茵. 江蘇醫(yī)藥. 2012(19)
本文編號：2897541
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