發(fā)布時(shí)間：2018-02-24 21:18

  本文關(guān)鍵詞： 酪酸梭菌 水通道蛋白 HT-細(xì)胞 JNK/p信號(hào)通路　出處：《中國(guó)藥物與臨床》2014年12期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的明確酪酸梭菌對(duì)人結(jié)腸腺癌細(xì)胞HT-29細(xì)胞水通道蛋白3(AQP3)m RNA和蛋白表達(dá)的影響以及c-Jun氨基末端激酶(JNK)和p38信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路對(duì)其表達(dá)的調(diào)控作用。方法用酪酸梭菌上清液作用于HT-29細(xì)胞后,應(yīng)用實(shí)時(shí)定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和蛋白印跡方法檢測(cè)AQP3 m RNA和蛋白表達(dá)水平。AQP3表達(dá)水平有差異后測(cè)定總JNK、p38以及磷酸化的JNK(P-JNK)和磷酸化的p38(P-p38)蛋白表達(dá)水平。后分別加用JNK抑制劑SP600125和p38抑制劑SB203580后測(cè)定AQP3蛋白表達(dá)量,觀察JNK和p38對(duì)AQP3表達(dá)的調(diào)控作用。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用單因素方差分析。結(jié)果實(shí)時(shí)定量RT-PCR和蛋白印跡法結(jié)果顯示酪酸梭菌上清液不同濃度(1∶4和1∶8組)作用HT-29細(xì)胞12 h以及同一濃度1∶4作用不同時(shí)間(24、12、6 h組)的AQP3 m RNA和蛋白表達(dá)水平均較無(wú)酪酸梭菌上清液作用組明顯上調(diào)(P均0.05)。蛋白印跡法結(jié)果顯示酪酸梭菌上清液組的Pp38/p38和P-JNK/JNK蛋白相對(duì)量較空白對(duì)照組表達(dá)水平明顯上調(diào)(F=26.065和65.034,P0.05)。蛋白印跡法結(jié)果顯示加入p38抑制劑SB203580 10μg/ml組和20μg/ml的AQP3蛋白表達(dá)相對(duì)量為(0.7±0.4)和(0.6±0.6)、加入JNK抑制劑SP600125 10μg/ml組和20μg/ml的AQP3蛋白表達(dá)相對(duì)量為(0.7±0.4)和(0.5±0.4)均較未加入抑制劑組(1.1±0.7)AQP3蛋白表達(dá)水平明顯下調(diào)(F=36.225,P0.05)。結(jié)論酪酸梭菌上清液能夠上調(diào)HT-29細(xì)胞的AQP3表達(dá)進(jìn)而調(diào)節(jié)腸道的水代謝。JNK和p38信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可能參與調(diào)控AQP3的表達(dá)。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of Clostridium caseinate on the expression of aquaporin 3AQP3M RNA and protein in human colon adenocarcinoma cell line HT-29 and the regulation of c-Jun amino-terminal kinase (c-Jun) and p38 signal transduction pathway on its expression. After the solution was treated with HT-29 cells, Real time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and Western blotting were used to detect the expression level of AQP3 m RNA and protein. AQP3 expression level was different. The expression levels of total JNKP 38, phosphorylated JNKN P P K NKK and phosphorylated p38 P P 38 protein were measured. JNK inhibitor SP600125 and p38 inhibitor SB2035 80 were not used to detect the expression of AQP3 protein. The effect of JNK and p38 on the expression of AQP3 was observed. Univariate ANOVA was used in statistical analysis. Results the results of real-time quantitative RT-PCR and Western blotting showed that the supernatants of Clostridium caseinate at different concentrations (1: 4 and 1: 8) treated HT-29 cells for 12 h. The expression levels of AQP3 m RNA and protein in the same concentration of 1: 4 at different time points were significantly higher than those in the control group without Clostridium butyricum supernatant. The results of Western blot showed that Pp38/p38 and P-JNK-JNK eggs in the supernatant group of Clostridium caseinate were significantly up-regulated than those in the control group without Clostridium caseate supernatant. Compared with the blank control group, the relative dose of white increased the expression level of FN 26.065 and 65.034% P0.050.The results of Western blot showed that the relative levels of AQP3 protein expression in the p38 inhibitor SB203580 10 渭 g / ml group and 20 渭 g / ml group were 0.7 鹵0.4) and 0.6 鹵0.6 渭 g / ml, respectively. The AQP3 protein expression in the 10 渭 g / ml and 20 渭 g / ml JNK inhibitor SP600125 group was 10 渭 g / ml and 20 渭 g / ml respectively. Compared with the control group, the expression level of AQP3 protein was significantly down-regulated. Conclusion the supernatant of Clostridium caseinate can upregulate the expression of AQP3 in HT-29 cells and regulate the water metabolism. JNK and p38 signal transduction pathway of intestinal tract. Participate in the regulation of AQP3 expression.
【作者單位】： 山西大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院;山西省人民醫(yī)院消化科;
【基金】：山西省衛(wèi)生廳科技攻關(guān)項(xiàng)目(201201054)
【分類號(hào)】：R329.2

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本文編號(hào)：1531746