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vMIP-Ⅱ在大腸桿菌表達(dá)、純化的條件優(yōu)化及活性鑒定

發(fā)布時間:2020-12-10 13:38
  目的:本研究主要對病毒基因來源的人趨化因子同源物vMIP-Ⅱ在原核細(xì)胞的表達(dá)及純化條件進(jìn)行優(yōu)化,并對其活性進(jìn)行鑒定,為大量獲取單鏈vMIP-Ⅱ和將其用于趨化因子受體封閉因子的臨床應(yīng)用打下基礎(chǔ)。 方法:本實驗對已克隆轉(zhuǎn)化的菌株進(jìn)行誘導(dǎo),并用Amylose resin親和純化目的蛋白,再經(jīng)SDS-PAGE和Western blot分析純化結(jié)果,以Transwell趨化小室和FN包被的96孔板對vMIP-Ⅱ的生物學(xué)活性進(jìn)行鑒定。用MTT法檢測vMIP-Ⅱ?qū)ν庵苎獑蝹核細(xì)胞的毒性及對細(xì)胞增殖的影響。 結(jié)果:vMIP-Ⅱ/MBP融合蛋白在大腸桿菌中呈高效分泌型表達(dá),SDS-PAEG可見在54KD位置有一明顯的誘導(dǎo)表達(dá)條帶。最佳誘導(dǎo)條件為:TB培養(yǎng)基、0.3mmol/L IPTG、28℃誘導(dǎo)4h。免疫印記結(jié)果顯示在54KD位置有一明顯的藍(lán)染條帶。該菌的最佳純化條件為:30%的P2緩沖液,MgSO4用量為50ml/g濕菌,濃度為5mmol/L。該法獲得的融合蛋白酶切后得到的單體活性較高,對PBMC趨化、黏附特性的抑制率達(dá)50%以上。vMIP-Ⅱ... 

【文章來源】:暨南大學(xué)廣東省 211工程院校

【文章頁數(shù)】:63 頁

【學(xué)位級別】:碩士

【部分圖文】:

MBP融合蛋白親和層析

免疫印記


圖5vMIP一11免疫印記和純化條件的優(yōu)化gSO;對細(xì)胞破碎及純化的影響6所示,隨著所用MgS04體積的增加mUg濕菌Mgso;破碎體積水平濃度圖7),故上清雜蛋白濃度較高可能與,親和層析所得融合蛋白的量較低,有關(guān)。表1不同體積MgSO;不同體積Mgso

吉姆薩染色


PBMC吉姆薩染色形態(tài)觀察

【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]分子伴侶的多重功能[J]. 俞峻,馬康濤.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 1998(02)
[2]外源基因在大腸桿菌中表達(dá)的研究進(jìn)展[J]. 龍建銀,王會信.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 1997(02)



本文編號:2908789

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