發(fā)布時(shí)間：2018-02-25 21:21

  本文關(guān)鍵詞： Tim-2基因 BALB/c小鼠 L929細(xì)胞 真核表達(dá) 鐵蛋白 Tim-2基因 昆明小鼠 單核苷酸多態(tài)性　出處：《華中科技大學(xué)》2007年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 第一部分小鼠Tim-2基因在L929細(xì)胞表達(dá)后促進(jìn)鐵蛋白的內(nèi)吞 目的:獲取BALB/c小鼠T細(xì)胞免疫球蛋白域粘蛋白域蛋白-(2T cell immunoglobulin and mucin domain containing molecules-2, Tim-2)基因,構(gòu)建真核表達(dá)載體在L929細(xì)胞中表達(dá)并研究其功能。 方法:RT-PCR獲取BALB/c小鼠Tim-2基因,T-A克隆后經(jīng)測(cè)序鑒定后酶切,插入pEGFP-N1真核表達(dá)載體,脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染L929細(xì)胞,熒光顯微鏡觀察外源基因的表達(dá),然后加入鐵蛋白與轉(zhuǎn)染細(xì)胞作用。 結(jié)果:外源基因在L929細(xì)胞中得到高效表達(dá),熒光顯微鏡的結(jié)果顯示,外源基因定位于細(xì)胞膜上,并能促進(jìn)細(xì)胞對(duì)鐵蛋白的內(nèi)吞。 結(jié)論:Tim-2基因在真核細(xì)胞中表達(dá)后定位于細(xì)胞膜上,并促進(jìn)細(xì)胞對(duì)鐵蛋白的內(nèi)吞。 第二部分昆明小鼠Tim-2基因的單個(gè)核苷酸變異的研究 目的:研究T細(xì)胞免疫球蛋白域粘蛋白域蛋白(T cell immunoglobulin-and mucin-domain-containing molecules, Tim)基因家族的成員之一  Tim-2基因在昆明鼠體內(nèi)的單核苷酸多態(tài)性,以提示昆明鼠在腫瘤學(xué)和免疫學(xué)的相關(guān)試驗(yàn)中有可能出現(xiàn)的與國(guó)際通用的其它品系小鼠(如BALB/c小鼠)不同的生物學(xué)特性。 方法:取不同來(lái)源的五只昆明小鼠的肝組織,提取總RNA后逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA,使用特異性引物通過(guò)PCR擴(kuò)增得到Tim-2基因,克隆后測(cè)序,然后比較測(cè)序圖譜。 結(jié)果:測(cè)序結(jié)果與Genebank中的Tim-2序列相比,451(TCC→GCC:絲氨酸→丙氨酸),502,504(CCA→TCT:脯氨酸→絲氨酸),586,587(GAT→TCT:天冬氨酸→絲氨酸)。其他變異位點(diǎn)無(wú)氨基酸改變。 結(jié)論:提示昆明小鼠與國(guó)際通用的其它品系小鼠(如BALB/c小鼠)Tim-2基因所編碼的蛋白質(zhì)序列有差異,在使用昆明小鼠進(jìn)行免疫學(xué)相關(guān)的試驗(yàn)研究的過(guò)程中應(yīng)該注意到由于這種不同所造成的對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。
[Abstract]:The first part of mouse Tim-2 gene expression in L929 cells promotes the endocytosis of ferritin. Aim: to construct the eukaryotic expression vector of BALB/c mouse T cell immunoglobulin domain mucin domain protein (-TX) -2T cell immunoglobulin and mucin domain containing (Tim-2) gene, and to study its function in L929 cells. Methods BALB/c mouse Tim-2 gene was cloned by RT-PCR and sequenced, then inserted into pEGFP-N1 eukaryotic expression vector. L929 cells were transfected with liposome. The expression of exogenous gene was observed by fluorescence microscope, then ferritin was added to the transfected cells. Results: the extraneous gene was highly expressed in L929 cells. Fluorescence microscopy showed that the exogenous gene was located on the cell membrane and could promote the uptake of ferritin in L929 cells. Conclusion the expression of the gene was located on the cell membrane and promoted the endocytosis of ferritin in the eukaryotic cells. Part II study on single nucleotide variation of Tim-2 gene in Kunming mice. Objective: to study the single nucleotide polymorphism of Tim-2 gene of T cell cell immunoglobulin-and mucin-domain-containing (Tims) gene in Kunming mice. These results suggest that Kunming mice may have different biological characteristics from other strains of mice (such as BALB/c mice) in oncology and immunology. Methods: the liver tissues of five Kunming mice from different sources were taken, the total RNA was extracted by reverse transcription, the Tim-2 gene was amplified by PCR with specific primers, cloned and sequenced, and then the sequence map was compared. Results: compared with the Tim-2 sequence in Genebank, the result of sequencing was 451 TCCs. 鈫扜CC: serine. 鈫扐lanine stoma 502CBA 504CCA. 鈫扨roline. 鈫扴erine 586 GAT. 鈫扐spartic acid. 鈫扴erine. No amino acid changes at other mutation sites. Conclusion: the results suggest that there are differences in protein sequences between Kunming mice and other strains of mice (such as BALB/c mice). The effect of this difference on the experimental results should be taken into account in the use of Kunming mice in immunological related experimental studies.
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：1535189