發(fā)布時間：2018-02-26 02:09

  本文關(guān)鍵詞： 骨髓間充質(zhì)干細胞 神經(jīng)元樣細胞 膽堿能神經(jīng)元樣細胞 分化　出處：《南昌大學(xué)》2007年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 目的探討人骨髓間充質(zhì)干細胞(BMMSCs)的體外分離、純化、擴增和向膽堿能神經(jīng)元樣細胞的定向分化潛能,以期為BMMSCs的神經(jīng)移植提供理論依據(jù)。 方法應(yīng)用密度梯度離心法體外分離出BMMSCs,在含10%FBS的DMEM/F12培養(yǎng)基(完全培養(yǎng)基)擴增和傳代,用流式細胞儀檢測BMMSCs的表面標志。利用擴增后的第二代BMMSCs進行誘導(dǎo)分化,分為實驗組和對照組。實驗組的細胞先用含40mg/L WHI-P131的完全培養(yǎng)基預(yù)處理48小時后,在含10ng/ml重組人堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)的完全培養(yǎng)基中預(yù)誘導(dǎo)24小時,最后以含1μmol/L全反式維甲酸(ATRA)和10ng/ml音速波狀蛋白(Shh)的完全培養(yǎng)基誘導(dǎo)5小時;對照組不加任何誘導(dǎo)劑。誘導(dǎo)過程中在相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)變化,然后進行神經(jīng)元特異烯醇化酶(NSE)、神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)和乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶(ChAT)等神經(jīng)細胞特異性標志的免疫細胞化學(xué)染色,并分別計算陽性細胞百分率。 結(jié)果分離擴增后的BMMSCs強表達CD29;較強表達CD44、CD166和CD105;不表達CD45、CD34和HLA-DR。實驗組BMMSCs經(jīng)誘導(dǎo)后均能分化為具有典型神經(jīng)元形態(tài)的細胞,并表達NSE(61.00±3.63)%、GFAP(14.42±2.74)%;且相當部分神經(jīng)元樣細胞表達ChAT(9.92±1.29)%。對照組BMMSCs細胞形態(tài)無明顯變化,且上述特異性標志物表達均為陰性。 結(jié)論BMMSCs可跨胚層分化為神經(jīng)元樣細胞和膽堿能神經(jīng)元樣細胞。
[Abstract]:Objective to investigate the potential of human bone marrow mesenchymal stem cells (BMMSCs) in isolation, purification, expansion and differentiation potential to cholinergic neuron like cells in vitro, so as to provide a theoretical basis for BMMSCs neural transplantation.
Methods using density gradient centrifugation in vitro isolated BMMSCs culture medium containing 10%FBS DMEM/F12 (complete medium) amplification and passages, with the surface markers of BMMSCs by flow cytometry. The differentiation of the amplification of the second generation of BMMSCs, divided into experimental group and control group. The experimental group cells with 40mg/L WHI-P131 complete medium pretreatment after 48 hours in 10ng/ml containing recombinant human basic fibroblast growth factor (bFGF) in complete medium pre induced for 24 hours, finally with 1 mol/L of all trans retinoic acid (ATRA) and 10ng/ml protein (Shh) of the sonic wave induced by complete medium 5 h; the control group without any inducer. Induction of cell morphological changes were observed under phase contrast microscope and neuron specific enolase (NSE), glial fibrillary acidic protein (GFAP) and choline acetyltransferase (ChAT) nerve Immunocytochemical staining of cell specific markers, and the percentage of positive cells were calculated respectively.
The separation of amplified BMMSCs strong expression of CD29; strong expression of CD44, CD166 and CD105; the expression of CD45 CD34 and HLA-DR. BMMSCs in the experimental group after induction can differentiate into typical neuronal morphology of cells, and the expression of NSE (61 + 3.63)%, GFAP (14.42 + 2.74)%; and a considerable part of neurons the expression of ChAT like cells (9.92 + 1.29)%. The control group of BMMSCs cells had no significant morphological changes, and the specific markers were negative.
Conclusion BMMSCs can differentiate into neuron like and cholinergic neuron like cells.

【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R329

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本文編號：1536076