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人乳腺癌細(xì)胞cDNA 表達(dá)文庫構(gòu)建及特異性抗原基因篩選

發(fā)布時(shí)間:2020-12-22 10:06
  目的: 20世紀(jì)90年代以來,多種人類腫瘤抗原基因克隆的成功,大大推動(dòng)了腫瘤免疫學(xué)理論的發(fā)展,也促進(jìn)了腫瘤免疫診斷和免疫治療的應(yīng)用。由于腫瘤抗原在腫瘤診斷與治療中具有重要的靶向作用,以及在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展的基礎(chǔ)研究中的重要作用,因此尋找特異性強(qiáng)、基因功能和生化機(jī)理明確的靶分子成為腫瘤學(xué)、生物學(xué)的研究熱點(diǎn)。近年來,乳腺癌的發(fā)病率日趨增高,在乳腺癌特異抗原標(biāo)志的眾多研究中,除c-erbB-2的特異性較高外,一直未有新的特異性和靈敏度較高的乳腺癌抗原的報(bào)道。本研究針對(duì)我院前期制備的一株乳腺癌單克隆抗體(M4G3),利用cDNA文庫的構(gòu)建和篩選技術(shù),完成了此乳腺癌特異抗原基因的克隆與表達(dá),為此抗體的臨床應(yīng)用及進(jìn)一步闡明乳腺癌發(fā)生、發(fā)展機(jī)制提供了可靠的依據(jù)。 方法: 第一部分:復(fù)蘇M4G3雜交瘤細(xì)胞,體外培養(yǎng),小鼠腹腔注射,進(jìn)行單克隆抗體的大量制備;復(fù)蘇T47D等四種乳腺癌細(xì)胞,體外培養(yǎng),爬片,應(yīng)用M4G3進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn);四種細(xì)胞收集,應(yīng)用M4G3進(jìn)行Western-blot染色。 第二部分:以λgt11為載體構(gòu)建乳腺癌細(xì)胞T47D的cDNA表達(dá)文庫;對(duì)構(gòu)建的文庫進(jìn)... 

【文章來源】:天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】:74 頁

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【部分圖文】:

人乳腺癌細(xì)胞cDNA 表達(dá)文庫構(gòu)建及特異性抗原基因篩選


麗春紅染色結(jié)果圖l.llw匕stemBlot結(jié)果

電泳圖,電泳,電泳顯示,完整性


從右圖可見電泳顯示285、185兩條帶清晰、位置正確,RNA完整性好,未降解。(圖2.1)100圖2.1總RNA電泳二、mRNA的提取(見圖2.2)將上述高質(zhì)量RNA樣本合并后,采用磁珠法提取mRNA,瓊脂糖凝膠電泳34

電泳圖,電泳


cDNA電泳(圖2.4)

【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]乳腺癌單鏈抗體制備及其在荷人乳腺癌裸鼠中的放免顯像[J]. 牛瑞芳,?肆,朱殿清,龐雁.  中國腫瘤臨床. 2001(10)
[2]隱性乳腺癌的全乳腺次連續(xù)大切片檢查[J]. 牛昀,范宇,傅西林.  中華腫瘤雜志. 1995(04)



本文編號(hào):2931576

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