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微管相關(guān)蛋白tau轉(zhuǎn)基因細(xì)胞和動(dòng)物模型的建立及tau蛋白病變表征

發(fā)布時(shí)間:2020-12-23 00:50
  目的構(gòu)建并表征tau及突變tau蛋白細(xì)胞和動(dòng)物模型,檢測(cè)模型tau蛋白及磷酸化tau蛋白表達(dá)情況及微管的形態(tài),為tau蛋白及相關(guān)疾病的研究提供疾病模型。方法將不同的質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染到HEK293細(xì)胞中,構(gòu)建過表達(dá)野生型tau以及P301L/P301S突變tau的細(xì)胞模型。引進(jìn)并繁育rTg4510小鼠(P301L突變tau轉(zhuǎn)基因小鼠)以及PS19小鼠(P301S突變tau轉(zhuǎn)基因小鼠)。通過Western blotting法檢測(cè)總tau及磷酸化tau蛋白的表達(dá),應(yīng)用免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)磷酸化tau蛋白的表達(dá)情況,應(yīng)用免疫熒光的方法檢測(cè)HEK293細(xì)胞微管形態(tài)的變化。結(jié)果本研究成功構(gòu)建過表達(dá)tau蛋白的細(xì)胞模型,繁育了兩種tau轉(zhuǎn)基因小鼠,在這些模型中tau蛋白表達(dá)及tau蛋白的磷酸化水平顯著高于對(duì)照組。在不同突變類型的細(xì)胞和動(dòng)物模型中,tau蛋白不同位點(diǎn)的磷酸化水平變化以及微管形態(tài)變化略有差異。結(jié)論本研究成功構(gòu)建了P301L/P301S突變tau蛋白的細(xì)胞和動(dòng)物模型,這些模型均表現(xiàn)了顯著的tau蛋白過度磷酸化的病變,并引起了細(xì)胞微管形態(tài)或tau蛋白病理的變化,進(jìn)而為包括AD在內(nèi)... 

【文章來源】:首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2019年04期 北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】:6 頁(yè)

【文章目錄】:
1 材料與方法
    1.1 模型的構(gòu)建
        1.1.1 P301S/L質(zhì)粒的構(gòu)建
        1.1.2 P301L轉(zhuǎn)基因小鼠的繁育
        1.1.3 P301S轉(zhuǎn)基因小鼠的繁育
    1.2 動(dòng)物飼養(yǎng)
    1.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
    1.4 實(shí)驗(yàn)分組
    1.5 動(dòng)物組織的取材
        1.5.1 新鮮組織裂解
        1.5.2 固定組織取材及冰凍切片
    1.6 Western blotting法檢測(cè)蛋白表達(dá)
    1.7 免疫組織化學(xué)及免疫熒光法
    1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 過表達(dá)tau40、P301L和P301S細(xì)胞模型中tau蛋白表達(dá)
    2.2 過表達(dá)tau40、P301L和P301S對(duì)HEK293細(xì)胞骨架形態(tài)的影響
    2.3 P301L和P301S轉(zhuǎn)基因小鼠中tau蛋白及磷酸化tau蛋白的表達(dá)
    2.4 P301L和P301S轉(zhuǎn)基因小鼠中磷酸化tau蛋白免疫組織化學(xué)染色
3 討論


【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]P301L突變tau蛋白轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型及其應(yīng)用[J]. 馬登磊,張如意,李林.  中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志. 2018(01)
[2]P301S突變tau轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型及其應(yīng)用[J]. 馬登磊,張?zhí)m.  實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與比較醫(yī)學(xué). 2017(06)
[3]馬錢苷通過抑制蛋白磷酸酶2A催化亞基C磷酸化降低tau蛋白過度磷酸化[J]. 楊翠翠,李林,張麗,李雅莉,張?zhí)m.  首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2016(06)
[4]Tau蛋白過度磷酸化機(jī)制及其在阿爾茨海默病神經(jīng)元變性中的作用[J]. 王建枝,田青.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2012(08)
[5]連鎖于17號(hào)染色體伴帕金森病的額顳葉癡呆[J]. 米東華,張本恕,馬愛軍.  國(guó)際遺傳學(xué)雜志. 2007 (01)



本文編號(hào):2932753

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