發(fā)布時(shí)間：2020-12-24 05:40

　　目的:構(gòu)建vpa0961基因突變株及其回補(bǔ)株,并初步探究VPA0961對(duì)副溶血弧菌運(yùn)動(dòng)能力的調(diào)控作用。方法:以副溶血弧菌RIMD2210633野生株的基因組DNA為模板,PCR擴(kuò)增得到vpa0961的同源臂融合片段,并克隆至自殺質(zhì)粒pDS132多克隆位點(diǎn)。將pDS132重組質(zhì)粒通過(guò)結(jié)合轉(zhuǎn)移的方式轉(zhuǎn)入野生株,進(jìn)而通過(guò)同源重組方法替換原始vpa0961,制備vpa0961無(wú)痕突變株（Δvpa0961）。PCR擴(kuò)增vpa0961整個(gè)編碼區(qū)序列,并將其直接克隆入pBAD33質(zhì)粒,獲得重組回補(bǔ)質(zhì)粒。將回補(bǔ)質(zhì)粒結(jié)合轉(zhuǎn)移到Δvpa0961中,然后通過(guò)特異性引物PCR鑒定并外送測(cè)序以獲得回補(bǔ)株。將副溶血弧菌的預(yù)培養(yǎng)物接種于游動(dòng)（swimming）和爬動(dòng)（swarming）平板,37℃靜置培養(yǎng),比較不同菌株間菌苔直徑的差異。采用qRT-PCR分析鞭毛蛋白基因lafA、flaB和flaF的mRNA表達(dá)水平。結(jié)果:特異性擴(kuò)增及序列分析顯示,成功構(gòu)建vpa0961基因突變株和回補(bǔ)株;與野生株相比,Δvpa0961游動(dòng)能力和爬動(dòng)能力明顯減弱（t=14. 06,36. 37,P <0. 05）;與野生株相比... 

【文章來(lái)源】：江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2019年03期

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【部分圖文】：

副溶血弧菌的運(yùn)動(dòng)能力檢測(cè)2．4VPA0961正調(diào)控鞭毛基因的轉(zhuǎn)錄


本文編號(hào)：2935091