發(fā)布時間：2024-06-07 04:07

　　目的探討腸道病毒71型(enterovirus 71,EV71)和柯薩奇病毒A組16型(coxsakievirus A 16,CA16)VP1蛋白在人支氣管上皮細胞中對天然免疫相關(guān)信號分子的表達及T細胞免疫反應(yīng)的影響。方法經(jīng)RT-PCR法擴增EV71和CA16的VP1序列,插入至載體pcDNA3. 1(+),構(gòu)建重組真核表達質(zhì)粒pcDNA-EV71-VP1和pcDNA-CA16-VP1。分別轉(zhuǎn)染人支氣管上皮細胞16HBE,于轉(zhuǎn)染后24、48和72 h收集樣本,進行細胞內(nèi)天然免疫相關(guān)信號分子表達的檢測和刺激T細胞增殖的檢測。結(jié)果經(jīng)雙酶切及測序鑒定,重組真核表達質(zhì)粒pcDNA-EV71-VP1和pcDNA-CA16-VP1構(gòu)建正確。與陰性對照組比較,EV71-VP1組IFNγ、OX40L、RANKL、TNF-α和IL-2的水平上調(diào),而CA16-VP1組的上調(diào)幅度較小。EV71-VP1及CA16-VP1組16HBE細胞的胞內(nèi)外提取物均可明顯刺激分泌IFNγ的T細胞增殖(P <0. 05)。結(jié)論 EV71和CA16 VP1蛋白在人上皮細胞16HBE中表達后,可差異性誘導(dǎo)細胞中天然免疫信號...

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 毒株、質(zhì)粒及細胞
    1.2 血液
    1.3 主要試劑
    1.4 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
    1.5 細胞轉(zhuǎn)染
    1.6 轉(zhuǎn)染細胞中VP1基因的m RNA轉(zhuǎn)錄水平檢測
    1.7 轉(zhuǎn)染細胞中VP1蛋白水平的檢測
    1.8 轉(zhuǎn)染細胞中天然免疫反應(yīng)相關(guān)信號分子表達趨勢的動力學(xué)檢測
    1.9 人T細胞流式分選
    1.1 0 轉(zhuǎn)染細胞內(nèi)外產(chǎn)物對T細胞非特異性增殖刺激效應(yīng)的檢測
    1.1 1 統(tǒng)計學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 目的基因PCR產(chǎn)物的鑒定
    2.2 重組質(zhì)粒的鑒定
    2.3 轉(zhuǎn)染細胞中VP1基因m RNA的轉(zhuǎn)錄水平
    2.4 轉(zhuǎn)染細胞中VP1蛋白的水平
    2.5 EV71和CA16 VP1蛋白對16HBE細胞內(nèi)天然免疫相關(guān)信號分子反應(yīng)的動力學(xué)作用
    2.6 轉(zhuǎn)染細胞內(nèi)外產(chǎn)物對T細胞非特異性增殖的刺激效應(yīng)
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