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選擇性Cox-2抑制劑在放射性腦損傷中的保護(hù)作用及機(jī)制研究

發(fā)布時(shí)間:2020-10-26 13:23
   第一部分大鼠放射性腦損傷模型中Cox-2mRNA及蛋白的動(dòng)態(tài)變化研究目的建立大鼠放射性腦損傷模型,并探究大鼠放射性腦損傷模型中Cox-2 mRNA及蛋白的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律。方法1.健康大鼠112只,按隨機(jī)數(shù)字法分為健康對(duì)照組(只麻醉不照射,56只)和單純照射組[20Gy電子線(5MeV)單次全腦照射構(gòu)建放射性腦損傷模型,56只],于照后3h、12h、1d、3d、7d、15d、30d處死,取全腦組織。2.HE法檢測(cè)大鼠放射性腦損傷模型的病理變化。3.QRT-PCR法檢測(cè)大鼠放射性腦損傷模型中腦組織的Cox-2 mRNA的表達(dá)趨勢(shì)。4.Western-Blot法檢測(cè)大鼠放射性腦損傷模型的腦組織中Cox-2總蛋白的變化趨勢(shì)。5.免疫組織化學(xué)法檢測(cè)大鼠放射性腦損傷模型中腦內(nèi)海馬區(qū)的Cox-2蛋白表達(dá)量及位置。結(jié)果1.HE染色法示:健康對(duì)照組大鼠腦組織未見(jiàn)明顯異常變化。單純照射組腦組織在照后3h可見(jiàn)細(xì)胞水腫。第12h、1d、3d可見(jiàn)大量胞核固縮、胞漿空泡化,毛細(xì)血管間隙增寬,第7d可見(jiàn)微血栓形成,第15d至30d可見(jiàn)血栓機(jī)化再通及組織結(jié)構(gòu)紊亂等改變。2.QRT-PCR示:大鼠放射性腦損傷模型中Cox-2mRNA表達(dá)量在電離輻射后先逐漸增高,達(dá)到峰值后開(kāi)始減少,與空白組對(duì)比,照后3h、12h、1d、3d、7d的表達(dá)量有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.Western-Blot示空白組Cox-2蛋白幾乎不表達(dá),電離輻射后其表達(dá)量開(kāi)始增多,至第3d達(dá)到峰值,隨后減少,至照后30d接近正常。4.免疫組化示照射組大鼠放射性腦損傷模型海馬區(qū)cox-2蛋白表達(dá)變化趨勢(shì)與western-blot結(jié)果相一致。結(jié)論大鼠腦組織經(jīng)大劑量電離輻射后隨著時(shí)間的變化,腦組織內(nèi)cox-2mrna及蛋白表達(dá)量的變化趨勢(shì),與腦組織及血管損傷的變化相一致,可能與腦組織的炎癥反應(yīng)、血管損傷等事件的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。第二部分選擇性cox-2抑制劑減輕放射性腦損傷的機(jī)制研究目的探究選擇性cox-2抑制劑塞來(lái)昔布在放射性腦損傷中的保護(hù)作用及其機(jī)制。方法1.健康sd大鼠240只,采用隨機(jī)數(shù)字表法分為健康組(80只,只麻醉不照射),單純照射組[80只,20gy電子線(5mev)單次全腦照射構(gòu)建放射性腦損傷模型]和照射加藥組(80只,麻醉同時(shí)予20gy電子線(5mev)單次全腦照射,照射前一天,照射當(dāng)天,照射后一天予30mg/kg塞來(lái)昔布灌胃處理)。于照后3h、12h、1d、3d、7d、15d、30d處死,取全腦組織。2.he染色法觀察并比較塞來(lái)昔布干預(yù)后大鼠放射性腦損傷模型病理結(jié)構(gòu)改變。3.腦組織干濕稱重法(bwc)觀察塞來(lái)昔布干預(yù)后大鼠放射性腦損傷模型含水量的變化。4.依文思藍(lán)(eb)法檢測(cè)塞來(lái)昔布干預(yù)后大鼠放射性腦損傷模型血腦屏障的損傷程度。5.qrt-pcr法檢測(cè)塞來(lái)昔布干預(yù)后大鼠放射性腦損傷模型中nf-κb和vegfmrna的表達(dá)變化趨勢(shì)。6.western-blot和免疫組化法檢測(cè)塞來(lái)昔布干預(yù)后大鼠放射性腦損傷模型中nf-κb和vegf總蛋白的變化趨勢(shì)。結(jié)果1.he染色結(jié)果顯示:照射加藥組和單純照射組與健康對(duì)照組相比,均可見(jiàn)大鼠腦組織在照后3h出現(xiàn)細(xì)胞水腫,第12h、1d、3d可見(jiàn)細(xì)胞水腫,胞核固縮。照后第7d有微血栓形成,照后第15d,30d可見(jiàn)腦組織結(jié)構(gòu)破壞,但照射加藥組損傷程度明顯減輕。2.eb法結(jié)果顯示:在單純照射組,大鼠腦組織中eb含量從電離輻射后第3h即開(kāi)始升高,至照后第1d達(dá)到峰值,隨后開(kāi)始減少,至照射后30d,腦組織內(nèi)eb含量接近健康對(duì)照組,與健康對(duì)照組相比,第3h,12h,1d,3d,7d,15d腦組織內(nèi)eb含量有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。在照射加藥組中,電離輻射后腦組織內(nèi)eb含量變化趨勢(shì)與單純照射組相似,但各時(shí)間點(diǎn)的含量均低于單純照射組,其中第3h,12h,1d測(cè)得的eb含量具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。3.bwc法顯示:單純照射組中,大鼠腦組織含水量從照后3h開(kāi)始增加,第7d、15d達(dá)到峰值,隨后略微下降,第30d仍顯著高于健康對(duì)照組,其中各觀測(cè)時(shí)間點(diǎn)結(jié)果均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05);在照射加藥組,腦組織含水量在受照后的變化趨勢(shì)與單純照射組類似,但含水量要少于單純照射組,與健康對(duì)照組相比,第3h、12h、1d、7d、15d、30d結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05);與單純照射組相比,照射加藥組第12h、1d、3d、7d、15d結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。4.qrt-pcr結(jié)果示:在單純照射組中,nf-κbmrna表達(dá)量在照后3h、12h、1d略有增高,至3d達(dá)到高峰,隨后開(kāi)始下降,至照后第15d、30d,接近健康對(duì)照組。各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)量均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。照射加藥組中,第3h、12h,其表達(dá)量未見(jiàn)增高,第1d起,其表達(dá)量開(kāi)始增高,至第7d,達(dá)到高峰,隨后下降,至第30d,接近正常。其中第1d、3d、7d,照射加藥組nf-κbmrna表達(dá)量較健康對(duì)照組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。與單純照射組相比,第3h、12h、1d、3d、15d的nf-κbmrna達(dá)量有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。在單純照射組中,vegfmrna表達(dá)量在第3h,12h明顯增高,第1d略有下降,隨后再次升高,至第7d達(dá)到峰值,隨后減少,至第15d、30d稍高于健康對(duì)照組。其中各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)量變化均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。在照射加藥組中,與健康對(duì)照組相比,第3h,vegfmrna達(dá)量未見(jiàn)增高,第12h起開(kāi)始升高,至第7d達(dá)到最高,隨后下降,至第30d,接近健康對(duì)照組,其中第12h、1d、3d、7d、15d、30d有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05);與單純照射組相比,照后第3h、12h、3d、7d大鼠腦組織的vegfmrna表達(dá)量要明顯減少,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。5.免疫組化法和Western-Blot法顯示:健康對(duì)照組中NF-κB和VEGF蛋白表達(dá)量較低。在單純照射組中,NF-κB蛋白在照后第3 h增高不明顯,第12 h開(kāi)始增高,第3 d,7 d達(dá)到峰值,隨后開(kāi)始減少,至第15 d,30 d接近健康對(duì)照組。VEGF蛋白從照后第3 h,12 h即可見(jiàn)顯著增高,第1 d略有下降,隨后再次增高,至第7 d達(dá)到峰值,然后再次下降,第30 d接近健康對(duì)照組。而在照射加藥組中,NF-κB蛋白在照后第3 h,12 h表達(dá)量均接近健康對(duì)照組,第1 d其表達(dá)量開(kāi)始升高,至第7 d達(dá)到高峰,隨后開(kāi)始減少,第30 d接近正常,且第1 d,3 d,7 d的表達(dá)量低于單純照射組。VEGF蛋白在照后第3 h明顯高于健康對(duì)照組,第12 h,1 d略有下降,第3 d再次升高,隨后開(kāi)始減少,至第15 d,30 d接近正常,且第3 h,12 h,3 d,7 d的表達(dá)量均低于單純照射組。結(jié)論選擇性Cox-2抑制劑塞來(lái)昔布可延緩和減輕電離輻射后腦組織的腦水腫和血腦屏障的破壞,并通過(guò)抑制NF-κB和VEGF基因及蛋白的表達(dá),減輕了放射性炎癥和腦血管損傷的程度,達(dá)到保護(hù)RBI的目的。
【學(xué)位單位】:蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位年份】:2016
【中圖分類】:R730.55
【文章目錄】:
中文摘要
Abstract
引言
    參考文獻(xiàn)
第一部分 大鼠放射性腦損傷模型中Cox-2 mRNA及蛋白的動(dòng)態(tài)變化研究
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
第二部分 選擇性Cox-2 抑制劑減輕放射性腦損傷的機(jī)制研究
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
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