發(fā)布時間：2018-09-08 18:12

【摘要】：目的： （1）建立氨基核苷嘌呤霉素足細(xì)胞損傷模型，觀察氨基核苷嘌呤霉素（PAN）對小鼠腎臟足細(xì)胞p38、Bax蛋白表達的影響。 （2）通過觀察環(huán)孢素A（CsA）對PAN損傷足細(xì)胞p38、Bax蛋白表達的影響，來探討環(huán)孢素A對足細(xì)胞凋亡p38MAPK信號通路影響以及其對腎臟的保護作用及其可能機制。 方法: 本實驗分兩部分進行: （1）首先將同步化的足細(xì)胞分為11組，對照組用無血清1640培養(yǎng)基；后10組加入50μg/ml的PAN進行培養(yǎng)，其中前6組分別于培養(yǎng)10min、30min、1h、2h、4h、6h收集細(xì)胞，Westernblot法檢測p-p38蛋白表達；后4組分別于培養(yǎng)12h、24h、36h、48h收集細(xì)胞，Western blot法檢測Bax蛋白表達。 （2）其次將足細(xì)胞分為：(a)對照組：無血清1640培養(yǎng)基；(b)PAN組：50μg/ml（c）CsA組：50μg/ml PAN+0.1μmol/L CsA；（d）SB203580組：10μmol/L SB203580預(yù)處理細(xì)胞1h后加入50μg/ml PAN。培養(yǎng)24h及48h后收集細(xì)胞觀察細(xì)胞凋亡率，培養(yǎng)2h后Western blot法檢測p38、p-p38蛋白表達，48h后Bax蛋白表達。 結(jié)果： （1）PAN作用足細(xì)胞10分鐘后p38表達開始增加，并隨著時間的延長而逐步增加，2小時后活化最為顯著，6小時接近基礎(chǔ)水平。 （2）PAN作用足細(xì)胞后，Bax蛋白的表達隨時間持續(xù)增強，且與對照組相比，24小時后其表達有統(tǒng)計學(xué)意義。 （3）24小時及48小時PAN組細(xì)胞凋亡率較對照組明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。CsA組細(xì)胞凋亡率較PAN組均顯著減少，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。 （4）與對照組相比，PAN組細(xì)胞p-p38、Bax蛋白表達明顯增加；而環(huán)孢素A組及SB203580組表達量較PAN組明顯下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。 結(jié)論： CsA可減少PAN誘導(dǎo)的足細(xì)胞凋亡，起到腎臟保護作用，其機制可能是通過部分抑制p38MAPK活化，降低Bax的表達。
[Abstract]:Objective: (1) to establish the injury model of aminonucleoside purine mycin podocyte. To observe the effect of aminoglycoside purine mycin (PAN) on the expression of p38 (PAN) protein in mouse renal podocytes. (2) to observe the effect of cyclosporine A (CsA) on the expression of p38 Bax-Bax protein in podocytes injured by PAN. To investigate the effect of cyclosporine A on p38MAPK signaling pathway of podocyte apoptosis and its protective effect on kidney and its possible mechanism. Methods: the experiment was divided into two parts: (1) the synchronized podocytes were divided into 11 groups, the control group was cultured on serum-free 1640 medium, the latter 10 groups were cultured with 50 渭 g/ml PAN. In the first six groups, the expression of p-p38 protein was detected by Western blot at 10 min, 30 min, 1 h, 2 h and 4 h, respectively, and the last 4 groups were cultured for 12 h, 24 h, 36 h and 48 h, respectively. (2) podocytes were divided into: (a) control group (serum-free culture medium) and control group (: (a) control group). (b) PAN group: 50 渭 g/ml (c) CsA group: 0: 50 渭 g/ml PAN 0. 1 渭 mol/L CsA; (d) SB203580 group: 10 渭 mol/L SB203580 preconditioning cells for 1 h, then adding 50 渭 g/ml PAN. The apoptotic rate was observed at 24 h and 48 h after culture, and the expression of p38 p-p38 protein was detected by Western blot assay after 2 h culture, and the expression of Bax protein was detected after 48 h culture. Results: (1) the expression of p38 in podocytes began to increase after PAN treatment for 10 minutes. With the time prolonging, the activation reached the basic level at 6 hours after activation for 2 hours. (2) the expression of Bax protein in podocytes increased continuously with time after PAN treatment. (3) the apoptotic rate of PAN group was significantly higher than that of control group (P0.05). The apoptosis rate of CSA group was significantly lower than that of PAN group. The difference was statistically significant (P0.05). (4) compared with the control group, the expression of p-p38 Bax-Bax protein was significantly increased in the pan group, while the expression of p-p38 Bax protein in the cyclosporine A group and the SB203580 group was significantly lower than that in the PAN group (P0.05). Conclusion: CsA can reduce the apoptosis of podocyte induced by PAN and protect the kidney. The mechanism of CsA may be partly inhibiting the activation of p38MAPK and decreasing the expression of Bax.
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R692

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本文編號：2231298