發(fā)布時間：2018-09-11 11:26

【摘要】：衛(wèi)生部統(tǒng)計信息顯示，我國腎癌發(fā)病率位居男性惡性腫瘤發(fā)病率前十位，且呈現(xiàn)逐年上升趨勢。在泌尿生殖系統(tǒng)腫瘤中，腎癌發(fā)病率僅次于膀胱癌。早期或中期腎癌的治療與其他腫瘤相同，均以外科手術(shù)治療為主。晚期腎癌的治療則明顯區(qū)別于其他腫瘤。由于腎癌對順鉑等傳統(tǒng)化療藥物普遍耐藥，，所以晚期腎癌的治療無法像其他腫瘤一樣以化療為主，只能以免疫治療和靶向治療為主，這也使得晚期腎癌治療效果欠佳。 與腎癌不同，睪丸癌的化療效果非常好。以順鉑為基礎(chǔ)的化療方案對睪丸癌的治愈率可達90%以上。睪丸癌對順鉑的高度敏感性與其DNA修復(fù)蛋白XPF表達水平較低密切相關(guān)。XPF是一種重要的DNA修復(fù)蛋白，主要參與核苷酸切除修復(fù)途徑。XPF表達水平降低能夠?qū)е录毎鸇NA修復(fù)能力降低，從而使其對DNA損傷類化療藥物的敏感性提高。低表達XPF的睪丸癌對順鉑高度敏感，該現(xiàn)象提示腎癌對順鉑等化療藥物耐藥可能與其XPF表達水平較高有關(guān)。如果這種假設(shè)成立，那么可以通過降低腎癌XPF表達水平來提高其順鉑敏感性，使順鉑應(yīng)用于腎癌治療成為可能。 運用免疫組織化學染色法檢測癌組織及癌旁組織中XPF表達水平發(fā)現(xiàn)，在癌組織中，腎癌XPF陽性表達率最高，膀胱癌次之，睪丸癌最低；在癌旁組織中，腎癌癌旁組織XPF陽性表達率最高，膀胱癌癌旁次之，睪丸癌癌旁最低。利用蛋白印跡實驗檢測多種腎癌細胞和膀胱癌細胞中XPF表達水平發(fā)現(xiàn)，腎癌細胞的XPF表達水平高于膀胱癌細胞。采用克隆形成實驗檢測癌細胞的順鉑敏感性發(fā)現(xiàn)，腎癌細胞的順鉑敏感性低于膀胱癌細胞。通過shRNA干擾技術(shù)成功構(gòu)建穩(wěn)定低表達XPF的腎癌細胞株ACHN-shXPF，其順鉑敏感性顯著提高。選用裸鼠皮下移植瘤模型檢測ACHN-shXPF細胞在體順鉑敏感性發(fā)現(xiàn)，其在體順鉑敏感性提高。借助宿主反應(yīng)實驗、細胞周期檢測實驗和細胞凋亡檢測實驗分別對ACHN-shXPF細胞的DNA修復(fù)能力、順鉑誘導細胞周期阻滯情況和順鉑誘導凋亡情況進行檢測，結(jié)果示ACHN-shXPF細胞DNA修復(fù)能力降低，順鉑誘導細胞周期阻滯異常，順鉑誘導凋亡增加。另外，細胞衰老染色實驗發(fā)現(xiàn)，ACHN-shXPF衰老細胞比例增高。 綜合以上結(jié)果，腫瘤組織和腫瘤細胞的XPF表達水平越高，其順鉑敏感性越低，即XPF表達水平與順鉑敏感性負相關(guān)。體外實驗和在體實驗均證實降低XPF表達水平可顯著提高腎癌細胞的順鉑敏感性。通過降低XPF表達水平使順鉑敏感性提高的分子機制包括細胞DNA修復(fù)能力降低、細胞周期在順鉑誘導下異常阻滯和順鉑誘導凋亡增加。衰老細胞比例增加可能也是造成順鉑敏感性升高的機制之一。本研究提示，通過設(shè)計小分子藥物干擾腎癌細胞XPF表達可提高其順鉑敏感性，使順鉑成功應(yīng)用于腎癌治療。
[Abstract]:Statistics from the Ministry of Health show that the incidence of renal cell carcinoma in China ranks among the top ten male malignant tumors and is on the rise year by year.Among the tumors of the urogenital system, the incidence of renal cell carcinoma is second only to that of bladder cancer.The treatment of early or middle stage renal cell carcinoma is the same as that of other tumors, and surgical treatment is the main treatment.The treatment of advanced renal cell carcinoma is obvious. Different from other tumors, renal cell carcinoma is generally resistant to cisplatin and other traditional chemotherapy drugs, so the treatment of advanced renal cell carcinoma can not be as chemotherapy-based as other tumors, only immunotherapy and targeted therapy, which makes the treatment of advanced renal cell carcinoma poor.
Unlike renal cell carcinoma, testicular cancer is very effective in chemotherapy. The cure rate of testicular cancer can reach more than 90% with cisplatin-based chemotherapy. The high sensitivity of testicular cancer to cisplatin is closely related to the low expression of DNA repair protein XPF. XPF is an important DNA repair protein, mainly involved in nucleotide excision repair pathway. XPF table Low expression of XPF in testicular cancer is highly susceptible to cisplatin, suggesting that resistance to chemotherapy drugs such as cisplatin in renal cancer may be associated with a higher level of XPF expression. The expression level of XPF in renal cell carcinoma can enhance the sensitivity of cisplatin and make cisplatin possible for the treatment of renal cell carcinoma.
The expression of XPF was detected by immunohistochemical staining in cancer tissues and adjacent tissues. It was found that the expression of XPF was the highest in renal carcinoma, followed by bladder cancer and testicular cancer, and the highest in adjacent tissues, followed by bladder cancer and testicular cancer. The expression of XPF in renal cell carcinoma and bladder cancer cells was higher than that in bladder cancer cells. The cisplatin sensitivity of renal cell carcinoma cells was lower than that of bladder cancer cells by clone formation assay. The sensitivity of ACHN-shXPF cell line to cisplatin was significantly increased. The sensitivity of ACHN-shXPF cells to cisplatin in vivo was detected by subcutaneous transplantation tumor model in nude mice. Cell cycle arrest and cisplatin-induced apoptosis were detected. The results showed that the DNA repair ability of ACHN-shXPF cells decreased, the cell cycle arrest induced by cisplatin was abnormal, and the apoptosis induced by cisplatin was increased.
In conclusion, the higher the expression level of XPF in tumor tissue and tumor cells, the lower the sensitivity to cisplatin, that is, the negative correlation between the expression level of XPF and the sensitivity to cisplatin. Molecular mechanisms include decreased DNA repair, abnormal cell cycle arrest induced by cisplatin, and increased apoptosis induced by cisplatin. Increasing the proportion of senescent cells may also be one of the mechanisms responsible for the increased sensitivity to cisplatin. This study suggests that interfering with the expression of XPF in renal cancer cells by designing small molecule drugs may enhance the sensitivity to cisplatin. Platinum is successfully applied to the treatment of renal cell carcinoma.
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R737.11

【共引文獻】

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本文編號：2236567