發(fā)布時(shí)間：2018-09-13 08:13

【摘要】：第一部分Sirt3在糖尿病大鼠腎組織及高糖環(huán)境下腎小管上皮細(xì)胞的表達(dá)目的:國際糖尿病聯(lián)盟發(fā)布的數(shù)據(jù)顯示,截至到2013年,全球范圍內(nèi)的糖尿病患者已經(jīng)達(dá)到3.82億,預(yù)計(jì)到2035年糖尿病患者將高達(dá)4.71億。2013年末,已有510萬人死于糖尿病,用于治療糖尿病的醫(yī)療支出高達(dá)5480億美元,而近幾年糖尿病的發(fā)病率并沒有明顯下降的趨勢,糖尿病已成為嚴(yán)重威脅人類健康的公共衛(wèi)生問題之一,它給整個(gè)人類及社會帶來了沉重的負(fù)擔(dān)。糖尿病腎病是糖尿病最常見的微血管并發(fā)癥,并且是引起終末期腎疾病(end-stage renal disease,ESRD)的主要原因之一。據(jù)報(bào)道,40%—50%的1型糖尿病患者伴有腎臟損傷,在2型糖尿病患者中這一數(shù)字達(dá)到了30%。因此預(yù)防糖尿病腎病的發(fā)生,闡明糖尿病腎病的發(fā)病機(jī)制,尋找治療糖尿病腎病的有效治療方法已經(jīng)成為全人類面臨的重大課題。糖尿病腎病的發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜,高糖、炎癥、缺氧等細(xì)胞外刺激導(dǎo)致的糖代謝異常、腎臟血流動(dòng)力學(xué)改變、氧化應(yīng)激、細(xì)胞因子的作用、線粒體功能失調(diào)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激等病理過程都參與了糖尿病腎病的發(fā)生與發(fā)展。糖尿病腎病的病理特點(diǎn)包括腎小球硬化、腎小管間質(zhì)纖維化、腎小管萎縮等,同腎小球一樣,腎小管在糖尿病腎病的發(fā)病過程中發(fā)揮著非常重要的作用,腎小管形態(tài)和功能的改變加速了糖尿病早期蛋白尿的發(fā)生。線粒體是細(xì)胞呼吸和產(chǎn)能的主要場所,它在調(diào)節(jié)細(xì)胞的生存?代謝平衡及死亡方面扮演著非常重要的角色,近些年的研究發(fā)現(xiàn),線粒體結(jié)構(gòu)、功能損傷導(dǎo)致的活性氧(reactive oxygen species,ROS)過量產(chǎn)生在糖尿病腎病的發(fā)病過程中發(fā)揮著起始與關(guān)鍵性作用。過量的ROS可激活細(xì)胞內(nèi)多條信號通路,觸發(fā)氧化應(yīng)激、細(xì)胞凋亡、纖維化、炎癥等反應(yīng),加重糖尿病的腎臟損傷。因此,認(rèn)識線粒體ROS的產(chǎn)生和清除機(jī)制,尋找能夠減輕線粒體氧化應(yīng)激的物質(zhì)對認(rèn)識和治療糖尿病腎病具有重要意義。Sirt3是沉默信息調(diào)節(jié)因子2(silent information regulator 2,Sir2)的蛋白同源家族Sirtuins中的一員,它主要定位于細(xì)胞中的線粒體,是線粒體內(nèi)主要的蛋白去乙�；�酶,Sirt3通過調(diào)節(jié)關(guān)鍵蛋白的乙�；癄顟B(tài)與活性來維持線粒體的正常生理功能,研究表明Sirt3參與線粒體呼吸鏈反應(yīng)、三羧酸循環(huán)、脂肪酸的β氧化、抗氧化通路等多種反應(yīng)的調(diào)控,它對維持線粒體內(nèi)氧化狀態(tài)的平衡具有重要作用。同樣,Sirt3在調(diào)節(jié)細(xì)胞能量代謝、氧化應(yīng)激、細(xì)胞凋亡等方面也發(fā)揮著重要作用,它可以對抗多種因氧化應(yīng)激負(fù)荷引起的疾病,如:心肌肥大、衰老、腫瘤、心力衰竭、神經(jīng)退行性疾病、急性腎損傷等等�；�于Sirt3對線粒體結(jié)構(gòu)和功能的保護(hù)作用,我們推測線粒體Sirt3在糖尿病腎病的發(fā)病過程中同樣發(fā)揮著重要作用,而目前,關(guān)于Sirt3與糖尿病腎病之間的研究又非常有限,本部分研究的主要目的是觀察Sirt3在糖尿病大鼠腎組織及高糖培養(yǎng)條件下腎小管上皮細(xì)胞的表達(dá)、分布及改變,初步研究Sirt3與糖尿病腎臟損傷之間的關(guān)系。方法:1動(dòng)物模型的制備及動(dòng)物標(biāo)本的收集:將購買自河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心的40只清潔級健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為兩組:一組為對照組(normal control group,NC),一組為糖尿病模型組(diabetes mellitus group,DM),每組20只。兩組動(dòng)物均禁食12小時(shí),DM組大鼠腹腔單次注射1%鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ,65 mg/kg),NC組大鼠腹腔注射相應(yīng)體積的0.1mol/L的無菌檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液。注射后72小時(shí),尾靜脈采血檢測大鼠血糖,單次檢測血糖水平大于等于16.7 mmol/L且尿糖陽性者(+++~++++)即為糖尿病模型造模成功。NC組和DM組的大鼠隨機(jī)分為NC8周、NC12周、DM8周、DM12周四組,每組10只。于造模成功后的第8周、12周處死相應(yīng)組別的大鼠。處死前禁食6~8小時(shí),10%水合氯醛麻醉并稱重,股動(dòng)脈取血用于生化指標(biāo)的檢測:血糖(Blood glucose,BG)、血尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)、血清肌酐(Serum creatinine,Scr);迅速剝離腎臟,用生理鹽水將血液沖洗干凈,切取部分腎組織置于4%多聚甲醛溶液中,用于H.E、PAS染色及免疫組化染色;切取部分腎皮質(zhì)經(jīng)液氮速凍處理后凍存于-80℃冰箱,用于提取腎組織蛋白及RNA,并運(yùn)用Western blot和Real-time PCR檢測Sirt3的蛋白及m RNA表達(dá)。2細(xì)胞培養(yǎng)及標(biāo)本收集:永生化人腎小管上皮細(xì)胞(human kidney 2,HK-2)購買自美國模式培養(yǎng)物集存庫,細(xì)胞培養(yǎng)液為含有10%胎牛血清、100 U/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基,并置于5%CO2、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),兩天進(jìn)行一次換液,待細(xì)胞生長至80%左右時(shí)進(jìn)行傳代。實(shí)驗(yàn)組HK-2細(xì)胞經(jīng)同步化處理后,分別給予正常糖濃度培養(yǎng)基(normal control group,5.5 mmol/L D-glucose,NG),高滲培養(yǎng)基(mannital control group,5.5 mmol/L glucose+24.5 mmol/L mannitol,M),高糖培養(yǎng)基(high glucose,30 mmol/L D-glucose,HG)6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí),并于相應(yīng)的時(shí)間收取細(xì)胞用于提取細(xì)胞蛋白及RNA,并運(yùn)用Western blot和Real-time PCR檢測Sirt3的蛋白及m RNA表達(dá),細(xì)胞免疫熒光染色法檢測Sirt3在HK-2細(xì)胞的分布及表達(dá)。結(jié)果:1 H.E和PAS實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,正常對照組大鼠腎臟組織結(jié)構(gòu)未見明顯改變,12周DM組大鼠腎組織可見腎小球體積增大,系膜基質(zhì)增多,腎小管代償性肥大;2與正常對照組大鼠相比,8周和12周DM大鼠的血糖、尿素氮、肌酐值均明顯增高(P0.01);3與正常對照組大鼠相比,12周DM大鼠腎臟SOD2的蛋白表達(dá)明顯下降,Bax/Bcl-2的比值顯著升高(P0.01);4與正常對照組大鼠相比,8周糖尿病大鼠腎臟Sirt3的蛋白和m RNA表達(dá)顯著升高,12周糖尿病大鼠腎臟Sirt3的蛋白和m RNA表達(dá)顯著下降(P0.01)。大鼠腎臟免疫組化染色結(jié)果顯示,與對照組相比,12周糖尿病大鼠腎臟Sirt3的表達(dá)明顯下降,且Sirt3主要分布于遠(yuǎn)曲腎小管細(xì)胞,腎小球和腎間質(zhì)未見明顯的表達(dá);5在HK-2細(xì)胞,Sirt3的蛋白和m RNA表達(dá)于高糖刺激12h時(shí)顯著增高,當(dāng)高糖刺激達(dá)到48h時(shí),Sirt3的蛋白和m RNA表達(dá)顯著降低(P0.01),高糖對Sirt3的改變呈時(shí)間依賴性。Sirt3主要分布于細(xì)胞質(zhì),少量存在于細(xì)胞核。第二部分Sirt3對高糖環(huán)境下腎小管上皮細(xì)胞氧化損傷的影響及分子機(jī)制目的:Sirt3是一種核DNA編碼的NAD依賴的去乙酰化酶,它是Sirtuins家族中的一員。作為線粒體內(nèi)主要的去乙�；�酶,Sirt3調(diào)控線粒體內(nèi)多種蛋白的乙�；�水平與活性,影響著線粒體內(nèi)的多種生物學(xué)作用,如呼吸鏈反應(yīng)?三羧酸循環(huán)?脂肪酸的β氧化、抗氧化通路等,進(jìn)而影響了細(xì)胞的代謝反應(yīng)、氧化應(yīng)激以及細(xì)胞凋亡等。Sirt3可調(diào)控線粒體電子轉(zhuǎn)移鏈中復(fù)合體Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的活性,從而影響線粒體ROS和ATP的產(chǎn)生。Sirt3通過調(diào)控細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶SOD2的表達(dá)和活性,與三羧酸循環(huán)中的異檸檬酸脫氫酶(isocitrate dehydrogenase 2,IDH2)相互作用等方式,加快ROS的清除,降低ROS的毒性作用。Sirt3不僅可以影響線粒體的功能還對線粒體的結(jié)構(gòu)具有調(diào)控作用。Sirt3可調(diào)節(jié)線粒體動(dòng)力學(xué)相關(guān)蛋白——?jiǎng)恿ο嚓P(guān)蛋白1(dynamin related protein 1,Drp1)、視神經(jīng)萎縮蛋白1(optic atrophy1,Opa1)的乙�；�水平和活性,影響線粒體的動(dòng)力學(xué)穩(wěn)態(tài)。在心肌細(xì)胞內(nèi),Sirt3可去乙�；�親環(huán)素(cyclophilin D,Cyp D)并阻止線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔(mitochondrial permeablity transition pore,m PTP)的開放,保持線粒體的內(nèi)穩(wěn)態(tài),抑制了細(xì)胞的凋亡。近來,研究發(fā)現(xiàn)Sirt3還可去乙酰并激活糖原合成酶激酶-3β(Glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β),阻斷TGF-β信號通路,抑制組織纖維化的發(fā)生。Sirt3可通過其抗氧化應(yīng)激、抗凋亡等特性抑制多種疾病的發(fā)生與發(fā)展。第一部分實(shí)驗(yàn)提示我們,Sirt3很可能參與了糖尿病腎病的發(fā)病,在本部分的實(shí)驗(yàn)中,我們將運(yùn)用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù),在體外培養(yǎng)的人腎小管上皮細(xì)胞中過表達(dá)Sirt3,觀察它對高糖環(huán)境下腎小管上皮細(xì)胞氧化應(yīng)激及凋亡的影響,并進(jìn)一步探索可能的分子機(jī)制。方法:1檢測高糖對HK-2細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白及Akt/Fox O信號通路的影響:將正常培養(yǎng)的HK-2細(xì)胞經(jīng)同步化處理后,分別給予正常糖濃度培養(yǎng)基(normal control group,5.5 mmol/L D-glucose,NG),高糖培養(yǎng)基(high glucose,30 mmol/L D-glucose,HG)6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí),并于相應(yīng)的時(shí)間收取細(xì)胞用于提取細(xì)胞蛋白及RNA,并運(yùn)用Western blot檢測Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3、Akt、p-Akt、Fox O1、p-Fox O1、Fox O3a、p-Fox O3a的蛋白表達(dá)。2轉(zhuǎn)染質(zhì)粒,在HK-2細(xì)胞過表達(dá)Sirt3:運(yùn)用不同比例的Fu Gene HD轉(zhuǎn)染試劑與Sirt3質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HK-2細(xì)胞找出轉(zhuǎn)染的最佳條件。運(yùn)用最佳轉(zhuǎn)染條件向HK-2細(xì)胞轉(zhuǎn)染Sirt3質(zhì)粒,并運(yùn)用Western blot和Real-time PCR檢測Flag的蛋白及Sirt3的m RNA表達(dá),驗(yàn)證轉(zhuǎn)染是否成功。3為檢測過表達(dá)Sirt3對細(xì)胞生物學(xué)作用和信號通路的影響,將正常條件培養(yǎng)的HK-2細(xì)胞分為4組:空載質(zhì)粒p CMV-vector轉(zhuǎn)染對照組(control)、p CMV-Sirt3質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組(Sirt3)、高糖+空載質(zhì)粒p CMV-vector對照組(HG+control)、高糖+p CMV-Sirt3質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組(HG+Sirt3)。所有高糖刺激的組別應(yīng)使用高糖培養(yǎng)基刺激48h。刺激完成后,收集細(xì)胞的總蛋白,運(yùn)用Western blot檢測SOD2、catalase、Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3、Bim、Fas L、Akt、p-Akt、Fox O1、p-Fox O1、Fox O3a、p-Fox O3a的蛋白;運(yùn)用Mito SOX進(jìn)行細(xì)胞染色、電子顯微鏡攝像技術(shù)觀察線粒體內(nèi)ROS水平;運(yùn)用細(xì)胞流式實(shí)驗(yàn)技術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)ROS的水平;運(yùn)用TUNEL法檢測細(xì)胞內(nèi)的凋亡水平;分別提取細(xì)胞的核蛋白與質(zhì)蛋白,運(yùn)用Western blot檢測細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)內(nèi)Fox O1和Fox O3a的蛋白表達(dá),運(yùn)用細(xì)胞免疫熒光檢測Fox O1和Fox O3a在細(xì)胞的表達(dá)和分布。4為檢測抗氧化劑與細(xì)胞凋亡及Akt/Fox O信號通路之間的關(guān)系,將細(xì)胞分為5組:正常糖對照組(NG,5.5 mmol/L D-glucose),滲透壓對照組(M,5.5 mmol/L D-glucose+24.5 mmol/L mannitol),高糖組(HG,30mmol/L D-glucose)、NAC對照組(N,5 mmol/L NAC),高糖+NAC組(HG+N,30 mmol/L D-glucose+5 mmol/L NAC)。提取細(xì)胞總蛋白,運(yùn)用Western blot檢測Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3、Akt、p-Akt、Fox O1、p-Fox O1、Fox O3a、p-Fox O3a的蛋白;細(xì)胞流式實(shí)驗(yàn)技術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)ROS的水平。結(jié)果:1 HK-2細(xì)胞以Fugene HD 4μl和p CMV6-Sirt3 2μg為比例混合轉(zhuǎn)染時(shí)可取得最佳的轉(zhuǎn)染效率;2 Western blot結(jié)果顯示,與control組相比,高糖干預(yù)48 h時(shí),SOD2和catalase在HK-2細(xì)胞的蛋白表達(dá)量顯著下降,Sirt3過表達(dá)可以減弱高糖對SOD2和catalase的抑制作用,結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。Mito SOX染色結(jié)果顯示,與control組相比,Sirt3過表達(dá)降低了高糖刺激導(dǎo)致的線粒體ROS聚集,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。細(xì)胞流式實(shí)驗(yàn)表明,與control組相比,高糖組細(xì)胞內(nèi)的ROS增加了3倍,而Sirt3的過表達(dá)和抗氧化劑NAC明顯的減弱了高糖對細(xì)胞內(nèi)ROS的聚集作用,結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);3在HK-2細(xì)胞中,與NG組相比,高糖刺激48h時(shí),Bax與Bcl-2的比值以及Cleaved caspase-3的蛋白表達(dá)顯著增高。與HG組相比,在HG+Sirt3組,Bax/Bcl-2的比值及Cleaved caspase-3、Bim、Fas L的表達(dá)顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。TUNEL細(xì)胞染色實(shí)驗(yàn)說明Sirt3過表達(dá)顯著降低了高糖導(dǎo)致的HK-2細(xì)胞凋亡;4 Western blot結(jié)果顯示,與NG組相比,p-Akt(Ser 473)、p-Fox O1(Ser 256)和p-Fox O3a(Ser 253)的表達(dá)在高糖刺激48h后明顯降低(P0.01)。與HG+control組相比,Sirt3過表達(dá)可以顯著增高p-Akt、p-Fox O1和p-Fox O3a的蛋白表達(dá)(P0.05)。與HG+control組相比,Sirt3過表達(dá)可顯著降低細(xì)胞核內(nèi)Fox O1和Fox O3a的表達(dá)(P0.01)。細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)說明,與HG+control組相比,HG+Sirt3組Fox O1和Fox O3a在細(xì)胞核的表達(dá)顯著降低;5 Western blot結(jié)果顯示,與HG組相比,NAC可以顯著降低Bax/Bcl-2的比值和Cleaved caspase-3的蛋白表達(dá),并顯著增加Akt、Fox O1和Fox O3a的磷酸化水平,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。第三部分山奈酚對高糖刺激下腎小管上皮細(xì)胞的保護(hù)作用及其機(jī)制目的:山奈酚(3,4',5,7-四羥基黃酮)是一種廣泛存在于植物中的多酚類非甾體成分,它是一種天然存在的植物雌激素,具有抗氧化應(yīng)激、抗凋亡、抗炎等生物學(xué)作用。山奈酚廣泛存在于茶、花椰菜、豆類、番茄、草莓、葡萄等多種蔬菜與水果中,另外,它也存在于一些傳統(tǒng)中醫(yī)藥植物中,如銀杏、辣木等。近年的研究發(fā)現(xiàn),山奈酚對氧化應(yīng)激相關(guān)疾病具有保護(hù)和治療作用,如:心血管疾病、糖尿病、骨質(zhì)疏松癥、肥胖等。山奈酚的生物學(xué)作用受到了廣泛關(guān)注,但是關(guān)于山奈酚與糖尿病腎病之間關(guān)系的研究還非常少,我們推測山奈酚對糖尿病腎病的發(fā)生與發(fā)展有保護(hù)作用,并將在本課題中初步檢測山奈酚對高糖刺激下腎小管上皮細(xì)胞氧化應(yīng)激和凋亡的影響。目前,山奈酚發(fā)揮生物學(xué)作用的分子機(jī)制也并不是很清楚,有研究報(bào)道山奈酚可以增加Sirt3的表達(dá),本部分研究檢測了山奈酚與Sirt3表達(dá)之間的關(guān)系,并對山奈酚發(fā)揮生物學(xué)作用的可能分子機(jī)制做了初步探討。1為尋找山奈酚對HK-2細(xì)胞的安全、有效濃度,運(yùn)用MTS實(shí)驗(yàn)檢測在正常糖濃度和高糖濃度下,不同濃度山奈酚(0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L、20μmol/L、50μmol/L)對HK-2細(xì)胞的活力影響。2將正常條件下培養(yǎng)的HK-2細(xì)胞分為5組:正常糖對照組(NG,5.5mmol/L D-glucose),滲透壓對照組(M,5.5 mmol/L D-glucose+24.5mmol/L mannitol),高糖組(HG,30 mmol/L D-glucose)、山奈酚對照組(KMP,10μmol/L kaempferol)、高糖+KMP組(HG+KMP,30 mmol/L D-glucose+10μmol/L kaempferol)。收集細(xì)胞總蛋白和RNA,運(yùn)用Western blot和Real-time PCR檢測Sirt3、SOD2、catalase的蛋白和m RNA表達(dá);運(yùn)用Western blot方法檢測細(xì)胞內(nèi)Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3、Akt、p-Akt、Fox O3a、p-Fox O3a的蛋白表達(dá);運(yùn)用TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡;運(yùn)用細(xì)胞流式實(shí)驗(yàn)技術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)ROS的水平;運(yùn)用SOD酶活性檢測試劑盒檢測HK-2細(xì)胞SOD的活性。方法:結(jié)果:1 MTS結(jié)果顯示,山奈酚的工作濃度為0.01、0.1、1、5、10、15、20μmol/L時(shí),對HK-2細(xì)胞的活性沒有明顯的影響。當(dāng)山奈酚的工作濃度為50μmol/L時(shí),它會對HK-2細(xì)胞的活性產(chǎn)生明顯的抑制作用,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。與NG組相比,HG組HK-2細(xì)胞的活性顯著降低。與HG組相比,當(dāng)10μmol/L的山奈酚與高糖共同作用于HK-2細(xì)胞時(shí),HK-2細(xì)胞的活性明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。綜合以上的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,我們選用10μmol/L的山奈酚作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的使用濃度;2 Western blot結(jié)果顯示,與NG組比,高糖顯著降低了抗氧化蛋白SOD2和catalase的蛋白和m RNA表達(dá)(P0.05)。與HG組相比,在HG+KMP組,SOD2和catalase的蛋白和m RNA表達(dá)顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。SOD活性測試實(shí)驗(yàn)表明,與HG組相比,10μM山奈酚可以顯著增加SOD的活性,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。細(xì)胞流式實(shí)驗(yàn)表明,與高糖組相比,山奈酚可以顯著降低HK-2細(xì)胞中的ROS水平,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);3 Western blot結(jié)果顯示,在HK-2細(xì)胞,與NG組相比,高糖顯著增加了Bax/Bcl-2的比值及Cleaved caspase-3的表達(dá)。而在KMP+HG組,山奈酚顯著抑制了高糖對Bax/Bcl-2及Cleaved caspase-3的增加作用,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。TUNEL實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,山奈酚可以顯著降低高糖環(huán)境下HK-2細(xì)胞的凋亡;4 Western blot和Real-time PCR的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,在HK-2細(xì)胞,與HG組相比,山奈酚可以顯著抑制高糖對Sirt3的降低作用,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。HK-2細(xì)胞的免疫熒光染色結(jié)果表明,與高糖組相比,山奈酚可以顯著增加Sirt3在HK-2細(xì)胞的表達(dá);5 Western blot的結(jié)果顯示,在HK-2細(xì)胞,與NG組相比,高糖顯著降低了Akt和Fox O3a的磷酸化水平。與HG組相比,在HG+KMP組,山奈酚顯著增加了p-Akt/Akt和p-Fox O3a/Fox O3a的比值,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1在糖尿病大鼠腎組織及高糖培養(yǎng)的HK-2細(xì)胞中Sirt3的表達(dá)下降,且與SOD2、Bax/Bcl-2的變化趨勢相一致,提示Sirt3可能參與了糖尿病腎損傷的過程。2 Sirt3過表達(dá)可以顯著降低高糖刺激下HK-2細(xì)胞的氧化應(yīng)激和凋亡。3 Sirt3可通過ROS敏感的Akt/Fox O信號通路發(fā)揮其抗凋亡作用。4山奈酚干預(yù)可降低高糖刺激下HK-2細(xì)胞的氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡。5山奈酚可通過增加Sirt3的表達(dá)以及調(diào)控ROS敏感的Akt/Fox O3a信號通路發(fā)揮其抗氧化及抗凋亡作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R587.2;R692.9

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4 王秋月,劉國良;生活習(xí)慣與糖尿病[J];醫(yī)師進(jìn)修雜志;2000年09期

5 陳廣耀;抗糖尿病中藥開發(fā)前景展望[J];中國新藥雜志;2000年07期

6 太田康晴,莊祥云;糖尿病[J];日本醫(yī)學(xué)介紹;2000年08期

7 ;糖尿病[J];國外科技資料目錄.醫(yī)藥衛(wèi)生;2000年06期

8 ;糖尿病[J];國外科技資料目錄.醫(yī)藥衛(wèi)生;2000年08期

9 ;糖尿病[J];國外科技資料目錄.醫(yī)藥衛(wèi)生;2000年11期

10 林蘭;倪青;董彥敏;;糖尿病中西醫(yī)結(jié)合研究的思路與方法[J];醫(yī)學(xué)研究通訊;2001年09期

相關(guān)會議論文 前10條

1 吳東方;莊躍宏;陳秀芳;趙麗娜;楊曉東;唐茂林;;胰島素依賴型糖尿病對大鼠隨意皮瓣存活能力的影響[A];中國解剖學(xué)會2012年年會論文文摘匯編[C];2012年

2 崔瑾;韓姣姣;李鳳翱;李鳳翱;湯紹芳;劉萍;邱明才;張鵬;;1,25-二羥維生素D3對糖尿病大鼠肺臟病變的保護(hù)作用[A];中華醫(yī)學(xué)會第十二次全國內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2013年

3 鄭濱珠;袁鳳山;楊潤橋;;自體干細(xì)胞激活療法治療糖尿病大鼠過程中血細(xì)胞及生化改變[A];中華醫(yī)學(xué)會第十二次全國內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2013年

4 劉銅華;呂仁和;高彥彬;;中醫(yī)藥防治糖尿病及并發(fā)癥的作用途徑[A];糖尿�。ㄏ�渴病）中醫(yī)診治薈萃——全國第五次中醫(yī)糖尿病學(xué)術(shù)大會論文集[C];1999年

5 石鳳英;王堯;;靈芝對糖尿病大鼠腎臟形態(tài)學(xué)及微量白蛋白尿的作用[A];中國康復(fù)醫(yī)學(xué)會第三次康復(fù)治療學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2002年

6 陳名道;李榮英;邵莉;;糖尿病飲食治療的若干進(jìn)展[A];中國營養(yǎng)學(xué)會第九次全國營養(yǎng)學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2004年

7 仝小林;李洪皎;;糖絡(luò)并重治療2型糖尿病[A];第九次全國中醫(yī)糖尿病學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2006年

8 李筱榮;李艷;劉巨平;袁佳琴;;糖尿病大鼠血—視網(wǎng)膜屏障損傷的實(shí)驗(yàn)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十二屆全國眼科學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2007年

9 楊毅;陳江華;王晶晶;秦嶺;;雷帕霉素對糖尿病大鼠腎臟組織增殖和肥大的抑制作用[A];2007年浙滬兩地腎臟病學(xué)術(shù)年會資料匯編[C];2007年

10 祁少海;劉坡;舒斌;謝舉臨;徐盈斌;黃勇;毛任翔;劉旭盛;;不同深度糖尿病大鼠燙傷模型的制備[A];第八屆全國燒傷外科學(xué)年會論文匯編[C];2007年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 郭賽珊　梁曉春 潘明政;中西醫(yī)結(jié)合治療糖尿病慢性并發(fā)癥可顯著改善癥狀[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2007年

2 本報(bào)記者 王樂羊;中西醫(yī)結(jié)合防治糖尿病大有可為[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2002年

3 北京協(xié)和醫(yī)院 梁曉春;對中醫(yī)治糖尿病并發(fā)癥研究的思考[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2011年

4 劉燕玲;肥胖是糖尿病的源頭[N];健康報(bào);2006年

5 仝小林;糖尿病慢性并發(fā)癥論治[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2003年

6 汪敏;糖尿病皮膚易損元兇找到[N];衛(wèi)生與生活報(bào);2003年

7 林蘭;中西醫(yī)結(jié)合治療糖尿病的前景[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2007年

8 北京協(xié)和醫(yī)院中醫(yī)科主任 梁曉春;糖尿病周圍神經(jīng)病變的中西醫(yī)治療進(jìn)展[N];中國醫(yī)藥報(bào);2009年

9 本報(bào)記者 劉艷芳;糖尿病干預(yù)不能忽視抗氧化[N];中國食品報(bào);2012年

10 譚小月;糖尿病與腎病關(guān)系研究的新進(jìn)展[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 馮偉偉;蘋果酸鉻對2型糖尿病大鼠的降血糖活性、作用機(jī)制及安全性初探[D];江蘇大學(xué);2015年

2 劉宇;糖尿病來源的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療心肌梗死的相關(guān)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

3 李維辛;GLP-1受體激動(dòng)劑治療糖尿病的循證評價(jià)和對糖尿病大鼠胃動(dòng)力影響的機(jī)制研究[D];蘭州大學(xué);2012年

4 田麗;糖尿病周圍神經(jīng)病運(yùn)動(dòng)纖維的早期評價(jià)[D];天津醫(yī)科大學(xué);2014年

5 柳忠豪;糖尿病對口腔種植體骨整合影響的作用機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

6 李波;飽和富氫液對糖尿病神經(jīng)病變的保護(hù)作用及機(jī)制研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

7 米佳;Vaspin調(diào)控糖尿病炎癥通路及苦酸通調(diào)法的干預(yù)機(jī)制研究[D];長春中醫(yī)藥大學(xué);2015年

8 林宣佑;從SCAP/SREBP脂代謝信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑探討苦酸通調(diào)方調(diào)控2型糖尿病胰島素抵抗的作用機(jī)制[D];長春中醫(yī)藥大學(xué);2015年

9 齊月;木丹顆粒治療痛性糖尿病周圍神經(jīng)病變的實(shí)驗(yàn)研究[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2015年

10 王云;糖基化終末產(chǎn)物介導(dǎo)的平滑肌病變在糖尿病結(jié)腸動(dòng)力障礙中的作用研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 田寶明;低血糖指數(shù)掛面的研制及其對糖尿病大鼠糖脂代謝影響的研究[D];西南大學(xué);2015年

2 黃瓊;姜黃素對糖尿病大鼠肺組織損傷的保護(hù)作用及其可能機(jī)制[D];湖北科技學(xué)院;2015年

3 褚淑蕾;PI3k-Akt信號通路在2型糖尿病大鼠易發(fā)心房顫動(dòng)中的介導(dǎo)作用[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

4 石鷹;二膦酸鹽對糖尿病大鼠下頜骨骨折愈合影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

5 鄭嫦;CNP對Ach引起的糖尿病大鼠胃平滑肌收縮增強(qiáng)的影響及IGF-1的干預(yù)效應(yīng)[D];延邊大學(xué);2015年

6 李寧;益氣養(yǎng)陰活血方對糖尿病大鼠大血管NF-κB表達(dá)的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

7 王婉秋;辛伐他汀對2型糖尿病動(dòng)脈硬化大鼠血漿VEGF、TGF-β1及CTRP3水平的影響研究[D];石河子大學(xué);2015年

8 宋倩;2型糖尿病患者血清TLR-4水平與骨密度及影響因素關(guān)系研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

9 王麗霞;TLR4及相關(guān)炎癥因子在糖尿病大鼠心臟、肝臟和腎臟中的表達(dá)[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

10 孫雪培;極長鏈脂肪酸與2型糖尿病大鼠腦Aβ生成的關(guān)系研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

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本文編號：2240573