發(fā)布時(shí)間：2020-11-03 04:50

　　 第一部分增齡對(duì)小鼠腎臟TXNIP表達(dá)及腎臟纖維化的影響目的:探討衰老與TXNIP表達(dá)及腎臟纖維化的關(guān)系。方法:實(shí)驗(yàn)選用C57BL/6J雄性小鼠并隨機(jī)均分為兩組:正常對(duì)照組(NC組n=18)和高脂高糖組(HFGD組n=18),兩組再分別留取3、9、18月齡腎臟組織和血液標(biāo)本,檢測(cè)各年齡段各組小鼠腎臟功能生化指標(biāo)及TXNIP、衰老相關(guān)蛋白P16、腎臟纖維化相關(guān)蛋白α-SMA及TGF-β1的表達(dá)水平,石蠟切片行HE、Masson及PAS染色觀察腎臟纖維化及病理變化。結(jié)果:隨著年齡增加,小鼠腎臟石蠟切片病理染色結(jié)果出現(xiàn)腎小球硬化、腎小管結(jié)構(gòu)模糊破壞及腎臟纖維化改變,血清血肌酐、尿素氮逐漸升高(P0.05),腎臟組織中TXNIP、P16、α-SMA及TGF-β1表達(dá)上調(diào)(P0.05);而同年齡段小鼠經(jīng)高脂高糖飼養(yǎng)后,腎臟病理染色結(jié)果中腎小球硬化、腎小管萎縮及腎臟纖維化表現(xiàn)加重,血清血肌酐、尿素氮明顯升高(P0.05),腎臟組織TXNIP、P16、α-SMA及TGF-β1表達(dá)也明顯上調(diào)(P0.05)。結(jié)論:隨著年齡增加,腎臟組織出現(xiàn)衰老及纖維化表現(xiàn),促進(jìn)了TXNIP在腎臟組織中表達(dá),而高脂高糖加重衰老導(dǎo)致的腎臟組織TXNIP表達(dá)上調(diào),同時(shí)加重衰老相關(guān)的腎臟纖維化表現(xiàn)及腎臟功能障礙。衰老促進(jìn)腎臟TXNIP表達(dá),而TXNIP表達(dá)上調(diào)是否加重腎臟衰老及纖維化仍需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)探討。第二部分TXNIP與腎臟衰老相關(guān)纖維化的關(guān)系目的:探討TXNIP介導(dǎo)小鼠腎臟衰老相關(guān)纖維化的作用方法:將C57BL/6J雄性小鼠(WT n=18)和TXNIP基因敲除雄性小鼠(TXNIP-/-n=18)普通飲食飼養(yǎng),留取3、9、18月齡腎臟組織和血液標(biāo)本,檢測(cè)兩組小鼠各年齡段腎臟功能,通過Western-blot和免疫熒光法檢測(cè)TXNIP、衰老相關(guān)蛋白P16、纖維化相關(guān)蛋白α-SMA及TGF-β1在腎臟的表達(dá)水平,石蠟切片行HE、Masson及PAS染色觀察腎臟纖維化及病理變化。結(jié)果:與同年齡段小鼠相比,敲除TXNIP基因可以明顯改善腎臟衰老及纖維化表現(xiàn),血清血肌酐、尿素氮明顯下降(P0.05),同時(shí)腎臟組織P16、α-SMA及TGF-β1表達(dá)也明顯減少(P0.05)。結(jié)論:TXNIP促進(jìn)腎臟衰老,加速腎臟纖維化進(jìn)程,敲除TXNIP可以改善衰老相關(guān)的腎臟纖維化,下調(diào)α-SMA及TGF-β1表達(dá)。第三部分TXNIP介導(dǎo)腎臟衰老相關(guān)纖維化的機(jī)制研究目的:探討TXNIP對(duì)腎小管上皮細(xì)胞促纖維化反應(yīng)的作用及相關(guān)機(jī)制方法:使用陰性對(duì)照病毒(LV-GFP)、TXNIP過表達(dá)病毒(LV-TXNIP)及TXNIP沉默病毒(LV-TXNIP-si RNA)分別轉(zhuǎn)染人腎小管上皮細(xì)胞(HK-2),分為三組,用Western-blot和免疫熒光法檢測(cè)TXNIP、衰老相關(guān)蛋白P16、纖維化相關(guān)蛋白在腎臟的表達(dá)情況。通過Western-blot檢測(cè)STAT3通路和TGF-β1/SMAD3信號(hào)通路磷酸化水平,并采用免疫共沉淀法檢驗(yàn)TXNIP與STAT3是否存在一定相互作用。結(jié)果:轉(zhuǎn)染TXNIP過表達(dá)病毒后,腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)衰老相關(guān)蛋白P16、纖維化蛋白TGF-β1較陰性對(duì)照組明顯上調(diào)(P0.05),STAT3信號(hào)通路及SAMD3通路磷酸化水平明顯上調(diào)(P0.05),下游纖維化蛋白α-SMA及CollagenⅠ蛋白明顯上調(diào)(P0.05)。而轉(zhuǎn)染TXNIP沉默病毒后,細(xì)胞內(nèi)衰老相關(guān)蛋白P16、腎臟纖維化蛋白TGF-β1較陰性對(duì)照組明顯減少(P0.05),STAT3信號(hào)通路及SAMD3通路磷酸化水平明顯下降(P0.05),其下游蛋白α-SMA及CollagenⅠ蛋白明顯下調(diào)(P0.05)。其次,STAT3特異性抑制劑作用于小管上皮細(xì)胞后,過表達(dá)組細(xì)胞內(nèi)的TGF-β1、α-SMA、CollagenⅠ蛋白及SAMD3磷酸化水平明顯下調(diào)(P0.05)。此外,免疫共沉淀結(jié)果顯示TXNIP與STAT3存在一定相互作用。結(jié)論:過表達(dá)TXNIP能促進(jìn)腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)衰老相關(guān)蛋白P16上調(diào),同時(shí)可能激活STAT3信號(hào)通路,上調(diào)TGF-β1表達(dá)水平,從而通過激活SMAD3信號(hào)通路,使腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)纖維化蛋白表達(dá)上調(diào),發(fā)生促纖維化改變。而敲低TXNIP可以抑制STAT3磷酸化,下調(diào)TGF-β1/SMAD3表達(dá),抑制腎小管上皮細(xì)胞促纖維化反應(yīng)。結(jié)合免疫共沉淀結(jié)果,說明TXNIP能夠促進(jìn)腎小管上皮細(xì)胞促纖維化反應(yīng),可能與激活STAT3信號(hào)通路,上調(diào)TGF-β1/SMAD3表達(dá)有關(guān)。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R692
【文章目錄】：
英漢縮略語名詞對(duì)照
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 增齡對(duì)小鼠腎臟TXNIP表達(dá)及腎臟纖維化的影響
    1 實(shí)驗(yàn)材料
    2 實(shí)驗(yàn)方法
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4 討論
第二部分 TXNIP與腎臟衰老相關(guān)纖維化的關(guān)系
    1 實(shí)驗(yàn)材料
    2 實(shí)驗(yàn)方法
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4 討論
第三部分 TXNIP介導(dǎo)腎臟衰老相關(guān)纖維化的機(jī)制研究
    1 實(shí)驗(yàn)材料
    2 實(shí)驗(yàn)方法
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4 討論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述：細(xì)胞衰老在腎臟疾病中的作用與機(jī)制
    參考文獻(xiàn)
致謝
碩士期間發(fā)表論文

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本文編號(hào)：2868117