發(fā)布時間：2021-01-18 08:11

　　目的:探討過氧化物酶體增殖物活化受體γ（PPARγ）激動劑吡格列酮（PIO）對高磷誘導大鼠血管平滑肌細胞（VSMC）鈣化的作用及其相關機制。方法:利用10 mmol/Lβ甘油磷酸（β-GP）誘導大鼠VSMC鈣化,建立鈣化模型（即鈣化組）;同時以完全培養(yǎng)基培養(yǎng)大鼠VSMC為正常對照組,并分別以不同濃度（5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L、20μmol/L）PIO干預,觀察培養(yǎng)12d,用茜素紅染色法檢測細胞鈣沉積并檢測細胞外基質鈣離子濃度來觀察VSMC鈣化程度。Western Blot檢測大鼠VSMC的α平滑肌動蛋白（α-SMA）、Runx2、BMP2、Wnt/β-catenin通路相關蛋白（β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β）及核蛋白cyclin-D1的表達情況。選擇合適的PIO濃度（20μmol/L）并以PPARγ拮抗劑GW9662（20μmol/L）干預,觀察以上指標的變化。結果:（1）鈣化組鈣離子濃度較正常對照組明顯增高（P<0.05）,而不同濃度PIO均可減輕VSMC細胞外基質的鈣離子濃度（P<0.05）,同時鈣化組茜素紅染色較正常對照... 

【文章來源】：腎臟病與透析腎移植雜志. 2016,25(04)北大核心

【文章頁數】：7 頁

【部分圖文】：

各組茜素紅染色結果

圖2各組細胞外基質鈣鹽含量的情況(分光光度法)PIO:吡格列酮;control:空白對照組;HP:鈣化組;control+PIO:空白對照+20μmol/LPIO組;HP+PIO:鈣化+20μmol/LPIO組;HP+PIO+GW9662:鈣化+20μmol/LPIO+20μmol/LGW9662組;*與空白對照組相比，P＜0.01;＊＊與鈣化組比較，P＜0.01;#與HP+PIO組相比，P＜0.01圖3不同濃度的吡格列酮對大鼠VSMCα-SMA、BMP-2、Ｒunx2及β-catenin蛋白表達的影響(WesternBlot)PIO:吡格列酮;VSMC:血管平滑肌細胞;A:空白對照組;B:鈣化組;C:鈣化組+5μmol/LPIO;D:鈣化組+10μmol/LPIO;E:鈣化組+15μmol/LPIO;F:鈣化組+20μmol/LPIO;*:與空白對照組相比，P＜0.05;＊＊:與鈣化組比較，P＜0.01PIO對大鼠VSMC核內蛋白cyclin-D1的影響cyclin-D1是Wnt/β-catenin通路的下游靶蛋白。β-actin是細胞骨架微絲蛋白的主要成分，主要在胞漿質中表達，胞核也有較少表達。與空白對照組比較，鈣化組核蛋白cyclin-D1表達顯著增高;與鈣化組比較，20μmol/LPIO處理組核蛋白cyclin-D1表達降低(圖4)。腎臟病與透析腎移植雜志第25卷第4期2016年08月·343·

果計量資料數據采用均數±標準差表示，組間差異用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義，P＜0.01為統(tǒng)計學差異顯著。結果各組鈣化情況茜素紅染色結果顯示，空白對照組細胞基質未著色，細胞呈褐色，可見細胞基質鈣鹽沉積染色不明顯;鈣化組細胞外基質呈暗紅色，可見明顯鈣化結節(jié)，細胞仍為褐色，細胞外基質鈣鹽沉積染色陽性。與鈣化組相比，鈣化+5μmol/LPIO組及鈣化+10μmol/LPIO組細胞外基質中有鈣鹽沉積，其程度較鈣化組輕;鈣化組+15μmol/LPIO及鈣化組+20μmol/LPIO細胞外基質鈣鹽幾乎無沉積，未見著色(圖1)。四種不同濃度的PIO均可顯著降低大鼠VSMC細胞外基質鈣鹽沉積染色，且DMSO對VSMC的鈣化無明顯影響。圖1各組茜素紅染色結果PIO:吡格列酮;VSMC:血管平滑肌細胞;DMSO:二甲基亞砜;A:空白對照組;B:空白對照組+25mg/mlDMSO;C:鈣化組;D:鈣化組+25mg/mlDMSO;E:鈣化組+5μmol/LPIO;F:鈣化組+10μmol/LPIO;G:鈣化組+15μmol/LPIO;H:鈣化組+20μmol/LPIO大鼠VSMC培養(yǎng)12d后，細胞外基質鈣鹽含量鈣化組(1.751±0.036mmol/g)較空白對照組(1.321±0.196mmol/g)增高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.001)。分別以5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L和20μmol/LPIO干預12d后，細胞外基質鈣鹽含量顯著低于鈣化組。四種不同濃度的PIO均可顯著降低大鼠VSMC外基質鈣鹽含量(P＜0.01)(圖2A)。不同濃度PIO對α-SMA、BMP2、Ｒunx2及β-catenin蛋白表達的影響與空白對照組相比，鈣化組細胞α-SMA表達量明顯降低［(2.33±0.42)vs(0.96±0.44)，P＜0.01］。與鈣化組相比，20μmol/LPIO干預組細胞α-SMA表達量(2.34±0.62)顯著增高(P＜0.01)。鈣化組BMP2、Ｒunx2及β-catenin蛋白的相對表達量，分別為(1.12±0.01)、(1.05±0.06)和(3.31±0.82)，顯著


本文編號：2984605