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脾切除治療小鼠自身免疫性肝炎肝纖維化的作用和機(jī)制探討

發(fā)布時(shí)間:2018-02-24 02:35

  本文關(guān)鍵詞: 刀豆蛋白A 肝損傷 肝纖維化 脾切除 預(yù)防治療 Th2細(xì)胞因子 出處:《天津醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文 論文類型:學(xué)位論文


【摘要】:一、脾切除對AIH小鼠肝纖維化的預(yù)防和治療作用 目的: 通過少量多次小鼠尾靜脈注射刀豆蛋白A(Concanavalin A, ConA),建立小鼠自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)肝纖維化模型。在造模前行脾切除術(shù),觀察脾切除能否延緩小鼠AIH肝纖維化的進(jìn)展。在造模后行脾切除術(shù),觀察單純脾切除以及脾切除聯(lián)合硫唑嘌呤(azathioprine, AZA)對AIH肝纖維化小鼠的治療作用。 方法: (1)將Balb/c小鼠隨機(jī)分為4組,A組、B組、C組分別經(jīng)尾靜脈注射10mg/kg、12.5mg/kg.15mg/kg劑量的ConA, D組為對照組注射PBS,每周一次。于注射ConA的3、5、7、9周分批處死小鼠測血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanine transaminase, ALT),天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Aspartate aminotransferase, AST),取肝臟組織作HE及Masson染色。(2)將小鼠隨機(jī)分為4組,脾切除+ConA組在造模前行脾切除術(shù),假手術(shù)+ConA組在造模前行假手術(shù),ConA組在造模前未處理,正常對照組。分別于注射ConA的第1、4、7周分批處死小鼠測血清ALT、AST,肝組織作HE及Masson染色。(3)將小鼠隨機(jī)分為5組,脾切除治療組在造模后予脾切除術(shù)治療,假手術(shù)治療組在造模后予假手術(shù)治療,脾切除+AZA治療組在造模后予脾切除術(shù)和AZA灌胃治療,假手術(shù)+AZA治療組在造模后予假手術(shù)和AZA灌胃治療,對照組在造模后未處理。分別于治療后第1、4、8周測血常規(guī),肝組織作HE及Masson染色。 結(jié)果: (1)每次注射ConA后,小鼠的ALT、AST均高于對照組(P0.05),且隨著注射劑量的增加,小鼠ALT、AST的升高越明顯(P0.05)。病理結(jié)果顯示A組第9周開始出現(xiàn)肝纖維化,但不明顯;B組第7周有明顯的肝纖維化;C組第5周出現(xiàn)明顯肝纖維化,但該組小鼠致死率高。(2)脾切除+ConA組小鼠的ALT、AST較對照組有所升高(P0.05),但低于假手術(shù)+ConA組和ConA組(P0.05)。病理結(jié)果顯示脾切除+ConA組第1、4周肝臟炎癥和淋巴細(xì)胞浸潤程度較假手術(shù)和對照組輕;脾切除+ConA組第7周未見肝纖維化,而假手術(shù)+ConA組和ConA組均有明顯肝纖維化。(3)脾切除治療組和脾切除+AZA治療組小鼠的WB、PLT水平在第1周較低,于治療后第4周達(dá)高峰,隨后下降。對照組、假手術(shù)治療組和假手術(shù)+AZA治療組小鼠的WBC、PLT水平逐漸下降。與對照組相比,脾切除治療組、假手術(shù)+AZA治療組和脾切除+AZA治療組在治療后,肝纖維化逐漸減輕,而脾切除+AZA治療組減輕程度最明顯,且假手術(shù)+AZA治療組小鼠死亡率高。假手術(shù)治療組的肝臟病理表現(xiàn)與對照組相似,肝纖維化明顯。 結(jié)論: (1) Balb/c小鼠每周一次經(jīng)尾靜脈注射12.5mg/kg劑量的ConA,注射7周可以建立肝纖維化動(dòng)物模型。(2)脾切除能夠延緩小鼠AIH肝纖維化的進(jìn)展,預(yù)防肝纖維化的發(fā)生。(3)脾切除不僅對AIH小鼠的肝纖維化具有治療作用,而且提高了硫唑嘌呤的耐受性和治療效果。 二、脾切除對AIH肝纖維化小鼠肝臟Th2細(xì)胞因子的影響 目的: 探討Th2細(xì)胞因子在ConA誘導(dǎo)的急性模型中的變化及Th2細(xì)胞因子在ConA誘導(dǎo)的肝纖維化模型中的變化以及脾切除對ConA誘導(dǎo)的肝纖維化模型Th2細(xì)胞因子的影響。 方法: (1)取36只Balb/c小鼠以15mg/kg劑量的ConA經(jīng)尾靜脈注射,對照組注射PBS,于注射ConA的1h、2h、4h、6h、12h、24h隨機(jī)處死六只小鼠取肝臟,用RT-PCR方法檢測肝臟中IL-4、IL-5和IL-13的mRNA表達(dá)水平。(2)將小鼠隨機(jī)分為4組,脾切除+ConA組在造模前行脾切除術(shù),假手術(shù)+ConA組在造模前行假手術(shù),ConA組在造模前未處理,正常對照組。分別于注射ConA的第1、4、7周分批處死小鼠取肝臟,用RT-PCR方法檢測肝臟中IL-4、IL-5和IL-13的mRNA表達(dá)水平。 結(jié)果: (1) ConA誘導(dǎo)的急性模型中,小鼠肝臟中IL-4、IL-5和IL-13的mRNA表達(dá)水平于注射ConA后1h開始增加,IL-4水平于6h達(dá)高峰,IL5和IL-13于2h達(dá)高峰。(2) ConA誘導(dǎo)的肝纖維化模型中,小鼠肝臟中IL-4、IL-5和IL-13的mRNA表達(dá)水平隨注射次數(shù)的增加而升高,均于ConA注射第7周達(dá)峰。脾切除+ConA組小鼠在注射ConA后肝臟IL-4、IL-5和IL-13的表達(dá)量均高于對照組,但I(xiàn)L-4和IL-13的表達(dá)量明顯低于ConA組(P0.05),而IL-5的表達(dá)量也低于ConA組,但兩組統(tǒng)計(jì)無明顯差異。 結(jié)論: (1)在ConA誘導(dǎo)的急慢性模型中,Th2細(xì)胞因子IL-4、IL-5和IL-13的表達(dá)量增加。(2)脾切除可以抑制AIH肝纖維化小鼠肝臟中Th2細(xì)胞因子的分泌,脾臟在AIH肝纖維化模型中起免疫調(diào)節(jié)作用。
[Abstract]:The effect of splenectomy on the prevention and treatment of liver fibrosis in AIH mice
Objective:
A small number of times through the tail vein injection of concanavalin A (Concanavalin A ConA), the establishment of experimental autoimmune hepatitis (autoimmune, hepatitis, AIH). The rats in the model of hepatic fibrosis before splenectomy, observe the progress of splenectomy can delay liver fibrosis in AIH mice. In the rats after splenectomy, observation of splenectomy and splenectomy combined with azathioprine (azathioprine, AZA) AIH therapeutic effect on liver fibrosis in mice.
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本文編號:1528552

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