發(fā)布時(shí)間：2018-06-02 01:28

  本文選題：慢加急性乙型肝炎肝衰竭 + 過(guò)氧化物酶體增殖激活受體γ　； 參考：《山東大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：研究背景與目的慢加急性乙型肝炎肝衰竭(acute-on-chronic hepatitis B liver failure, ACHBLF)病死率高,嚴(yán)重危害人類健康。最近的研究表明,促炎細(xì)胞因子在ACHBLF的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著十分重要的作用。有研究證明,過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體y(peroxisome proliferator-activated receptor gamma, PPAR-γ)參與抗炎反應(yīng),但其在ACHBLF中發(fā)揮的作用仍不明確。因此,本研究旨在通過(guò)檢測(cè)PPAR-γ基因啟動(dòng)子甲基化及表達(dá)水平,揭示PPAR-γ在ACHBLF發(fā)生發(fā)展中的作用及其預(yù)測(cè)ACHBLF短期預(yù)后的潛在臨床應(yīng)用價(jià)值。研究方法本研究共納入了161例受試者,包括81例ACHBLF患者,50例慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B, CHB)患者,以及30例健康對(duì)照者。用實(shí)時(shí)熒光定量PCR (quantitative real-time PCR)法檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)中PPAR-γ的mRNA水平；用甲基化特異性PCR(methylation specific PCR, MSP)檢測(cè)PPAR-γ基因啟動(dòng)子甲基化情況；用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)檢測(cè)血漿中TNF-α和IL-6的水平。應(yīng)用SPSS V17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)分析,兩組之間差異比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),Mann-Whitney U檢驗(yàn)或卡方檢驗(yàn),PPAR-γ表達(dá)水平與臨床資料的相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析。P0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1.ACHBLF患者PPAR-γ mRNA水平與CHB患者相比顯著升高(Z=-4.003,P0.001)。然而,ACHBLF患者PPAR-γ mRNA水平仍顯著低于健康對(duì)照組(Z=-4.632,P0.001)。同時(shí),CHB患者中PPAR-γ表達(dá)水平顯著低于健康對(duì)照組(Z=-6.037,P0.001)。2.對(duì)ACHBLF患者PPAR-γ mRNA水平與臨床指標(biāo)進(jìn)行線性相關(guān)分析結(jié)果顯示,PPAR-γ的表達(dá)水平與總膽紅素(total bilirubin, TBIL)(r=-0.280,P=0.011)及國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化比值(international normalized ratio,INR)(r=-0.230,P=0.039)呈顯著負(fù)相關(guān)。ACHBLF患者PPAR-γ mRNA水平與谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotranferase,ALT).血肌酐(creatinine,Cr)及乙型肝炎病毒DNA(hepatitis B virUs-DNA,HBV-DNA)載量之間未發(fā)現(xiàn)顯著相關(guān)關(guān)系。3.ACHBLF患者中PPAR-γ啟動(dòng)子的甲基化率比CHB患者顯著降低(CpG-1,x2=8.918,P=0.003；CpG-2,x2=9.268,P=0.002),而仍然高于健康對(duì)照組(CpG-1,x2=6.691,P=0.009；CpG.2,x2=5.050,P=0.025).同時(shí),CHB患者兩個(gè)CpG島的甲基化率均明顯高于健康對(duì)照組(CpG-1,X2= 21.333,P0.001；CpG-2,x2=19.448,P0.001).4.對(duì)所有受試者甲基化組與非甲基化組的PPAR-γ mRNA水平進(jìn)行比較。結(jié)果顯示,在CpG-1或CpG-2發(fā)生甲基化的情況下,PPAR-γ的相對(duì)表達(dá)量將顯著減少(CpG-1,Z=-6.613,P0.001；CpG-2,Z=-7.712, P0.001),并且當(dāng)CpG-1及CpG-2同時(shí)發(fā)生甲基化時(shí)對(duì)PPAR-γ的表達(dá)抑制效果增強(qiáng)(Z=-4.085,P0.001)。5.受試者的血漿TNF-α和IL-6水平通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定。ACHBLF患者中兩種細(xì)胞因子水平均顯著高于CHB患者(TNF-α, t=6.649,P0.001；IL一6,t=6.784,P0.001)和健康對(duì)照組(TNFα,t=5.582, P0.001；IL-6,t=5.961,P0.001).ACHBLF患者中甲基化組的血漿細(xì)胞因子水平顯著高于非甲基化組(TNF-α,t=2.312,P=0.023；IL-6,t=2.639, P=0.012).6.ACHBLF患者3個(gè)月的死亡率為54.32%(44/81),平均生存時(shí)間為53.47天(SE 4.057,95％CI 45.39-61.54).存活組的PPAR-γ mRNA水平顯著高于死亡組(Z=-3.489,P0.001)。ACHBLF患者甲基化組的預(yù)后顯著差于非甲基化組(χ2=11.140,P0.001)。ACHBLF存活組PPAR-γ表達(dá)水平隨時(shí)間延長(zhǎng)而顯著增加,而死亡組維持于較低水平。我們?cè)u(píng)估了PPAR-γ mRNA水平、PPAR-γ啟動(dòng)子甲基化對(duì)預(yù)測(cè)ACHBLF短期預(yù)后的價(jià)值。ROC曲線下面積分別為0.726(SE 0.059,95% CI 0.611-0.841), 0.657(SE 0.062,95％CI 0.535-1.778).結(jié)論ACHBLF患者與CHB患者相比PPAR-γ表達(dá)水平升高,啟動(dòng)子甲基化率降低。PPAR-γ的表達(dá)水平及啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)與ACHBLF的嚴(yán)重程度和預(yù)后密切相關(guān)。并且,PPAR-γ可能通過(guò)下調(diào)TNF-α和IL-6,對(duì)于改善ACHBLF預(yù)后具有潛在意義,PPAR-γ的啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)及表達(dá)水平對(duì)于預(yù)測(cè)ACHBLF的短期預(yù)后具有重要價(jià)值。
[Abstract]:Research background and objective acute-on-chronic hepatitis B liver failure (ACHBLF) has high mortality and serious harm to human health. Recent studies have shown that proinflammatory cytokines play a very important role in the development and development of ACHBLF. Studies have shown that peroxisome proliferation is stimulated. The active receptor y (peroxisome proliferator-activated receptor gamma, PPAR- gamma) is involved in anti-inflammatory reactions, but its role in ACHBLF is still not clear. Therefore, this study aims to reveal the role of PPAR- gamma in the development of ACHBLF and to predict the potential of ACHBLF and short-term prognosis by detecting the methylation and expression level of PPAR- gamma promoter. This study included 161 subjects including 81 ACHBLF patients, 50 patients with chronic hepatitis B (chronic hepatitis B, CHB), and 30 healthy controls. The detection of peripheral blood mononuclear cells by real-time fluorescent quantitative PCR (quantitative real-time PCR) (peripheral blood mononuclear) The mRNA level of PPAR- gamma in PBMCs; the methylation specific PCR (methylation specific PCR, MSP) was used to detect the methylation of the promoter of the PPAR- gamma gene; the enzyme linked immunosorbent assay (enzyme-linked immunosorbent assay) was used to detect the level of the plasma in the plasma. The two groups were used for statistical analysis. The difference was compared with two independent samples t test, Mann-Whitney U test or chi square test. The correlation analysis of PPAR- gamma expression level and clinical data was statistically significant by Spearman correlation analysis.P0.05. Results the level of PPAR- y mRNA in 1.ACHBLF patients was significantly higher than that of CHB patients (Z=-4.003, P0.001). The level of AR- gamma mRNA was still significantly lower than that in the healthy control group (Z=-4.632, P0.001). At the same time, the expression level of PPAR- gamma in CHB patients was significantly lower than that in the healthy control group (Z=-6.037, P0.001).2. (Z=-6.037, P0.001).2.. .280, P=0.011) and international standardized ratio (international normalized ratio, INR) (r=-0.230, P=0.039) showed a significant negative correlation with PPAR- gamma mRNA level and alanine transaminase (alanine). There was no significant phase between the serum creatinine and hepatitis B virus. The methylation rate of PPAR- gamma promoter in.3.ACHBLF patients was significantly lower than that of patients with CHB (CpG-1, x2=8.918, P=0.003, CpG-2, x2=9.268, P=0.002), but still higher than that of the healthy control group (CpG-1, x2=6.691, P=0.009. 333, P0.001, CpG-2, x2=19.448, P0.001).4. compared the PPAR- gamma mRNA levels between the methylation and the non methylation groups of all the subjects. The results showed that the relative expression of PPAR- gamma would be significantly reduced when CpG-1 or CpG-2 occurred methylation. The inhibitory effect of methylation on the expression of PPAR- gamma enhanced (Z=-4.085, P0.001).5. subjects' plasma TNF- alpha and IL-6 levels were significantly higher than those of CHB patients (TNF- alpha, t=6.649, P0.001, IL a 6,.5.) and healthy control group by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). The plasma cytokine levels in the methylation group of the patients with IL-6, t=5.961, P0.001) were significantly higher than those in the non methylation group (TNF-, t=2.312, P=0.023; IL-6, t=2.639, P=0.012), and the mortality of 3 months was 54.32% (44/81) and the average survival time was 53.47 days. The prognosis of the methylation group in the patients with higher than the death group (Z=-3.489, P0.001) was significantly worse than that in the non methylation group (x 2=11.140, P0.001).ACHBLF survival group PPAR- gamma expression level increased significantly with time, while the death group remained at a lower level. We evaluated PPAR- gamma mRNA level, PPAR- gamma promoter methylation for ACHBLF short-term PREPREDICTION. The area under the post value.ROC curve was 0.726 (SE 0.059,95% CI 0.611-0.841) and 0.657 (SE 0.062,95%CI 0.535-1.778). Conclusion ACHBLF patients were higher in PPAR- gamma expression compared with those of CHB patients. Starting Zi Jiaji rate decreased the expression level of.PPAR- gamma and the state of promoter methylation was closely related to the severity and prognosis of CHB. Moreover, PPAR- gamma may be of potential significance for improving the prognosis of ACHBLF by down regulation of TNF- alpha and IL-6. The methylation status and expression level of PPAR- gamma are of great value for predicting the short-term prognosis of ACHBLF.
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R575.3;R512.62

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本文編號(hào)：1966678