克羅恩病患者接受第二次糞菌移植治療的時(shí)機(jī)研究
發(fā)布時(shí)間：2020-12-03 10:31
背景與目的:克羅恩�。–rohn’s disease,CD）是一種腸道慢性非特異性炎性疾病,屬于炎癥性腸病范疇。近年來(lái),腸道微生態(tài)成為治療的新靶點(diǎn)。越來(lái)越多的證據(jù)表明,糞菌移植（Fecal microbiota transplantation,FMT）已經(jīng)成為CD一種有前景的治療選擇。CD的疾病特征是臨床緩解和復(fù)發(fā)交替出現(xiàn),多次FMT治療有利于維持患者長(zhǎng)期臨床緩解。但是,FMT治療CD的有效頻率目前仍不明確。本研究旨在評(píng)估使用第二次FMT維持活動(dòng)期CD患者長(zhǎng)期臨床緩解的最佳時(shí)機(jī)。方法:本研究為隨機(jī)、開放、單中心臨床研究,納入1870周歲至少接受過(guò)兩次FMT治療的活動(dòng)期CD患者�；颊吆炇鹬橥鈺�,收集病史、人口學(xué)資料、體格檢查、實(shí)驗(yàn)室檢查等相關(guān)數(shù)據(jù)。經(jīng)入選標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)篩選合格的受試者將接受長(zhǎng)期隨訪,分別于FMT治療前、治療后第3天、第7天以及之后的每3個(gè)月的監(jiān)測(cè)點(diǎn)對(duì)患者進(jìn)行隨訪評(píng)估,同步對(duì)比患者在不同時(shí)間點(diǎn)的臨床緩解率、臨床有效率及安全性。使用16S rRNA基因測(cè)序技術(shù)分析9名患者及其各自供體的腸道菌群組成。使用核磁共振氫譜（nuclear magnetic...
【文章來(lái)源】：南京醫(yī)科大學(xué)江蘇省
【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
研究設(shè)計(jì)的流程圖
南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)離純化系統(tǒng)”（GenFMTer，法邁特公司,南京）來(lái)富集和純化新鮮糞菌，此法為微濾加離心富集法（MicrofiltrationplusCentrifugation,MPC）。自 2014 年以所有糞菌制備過(guò)程均在 GMP（Good Manufacturing Practice）級(jí)別的實(shí)驗(yàn)室2）完成。一般程序主要包括微濾，離心，清洗，丟棄和稀釋。我們提出了小時(shí) FMT 方案（one-hourFMTprotocol）”，即從供體完成排便到實(shí)驗(yàn)室分離新鮮糞菌，再到輸注到患者腸道的時(shí)間控制在一小時(shí)以內(nèi)[20]。
圖 3 經(jīng)內(nèi)鏡腸道植管術(shù)（Transendoscopic Enteral Tubing,TET）。（A）鼻空腸 TET 途徑概念圖[30]；（B）結(jié)腸 TET 途徑概念圖[29]。4. 標(biāo)本處理4.1 16S rRNA 基因測(cè)序和處理使用 QIAamp DNA Stool Mini 試劑盒從糞便樣品中提取細(xì)菌 DNA。通過(guò)具有 HF 緩沖液的 Phusion 高保真 PCR 主混合物（NewEnglandBiolabs，England），使用用于V4-V5高變區(qū)的條形碼引物對(duì)細(xì)菌16SrRNA基因序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增。來(lái)自每個(gè)樣品的產(chǎn)物以相等的摩爾比混合，然后使用 IlluminaMiSeq 平臺(tái)按照標(biāo)準(zhǔn) Illumina 測(cè)序方案進(jìn)行測(cè)序。 序列讀取通過(guò)使用 Trimmomatic（版本 0.35）和 FLASH 程序（版本 1.2.11）進(jìn)行質(zhì)量控制。使用軟件：mothur（版本 1.33.3），UPARSE（使用版本 v8.1.1756）和 R（版本 3.2.3）的組合分析 16S rRNA 基因序列。操作分類單位（OTU）聚類在 97％的相似性和使用 UPARSE 管道進(jìn)行過(guò)濾。使用 mothur 計(jì)算用于 -多樣性分析的
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]糞菌移植體系[J]. 張發(fā)明. 科技導(dǎo)報(bào). 2016(20)
[2]Serum and urine metabolomic fingerprinting in diagnostics of inflammatory bowel diseases[J]. Tomasz Dawiskiba,Stanislaw Deja,Agata Mulak,Adam Zabek,Ewa Jawień,Dorota Pawelka,Miroslaw Banasik,Agnieszka Mastalerz-Migas,Waldemar Balcerzak,Krzysztof Kaliszewski,Jan Skóra,Piotr Bar,Krzysztof Korta,Kornel Pormańczuk,Przemyslaw Szyber,Adam Litarski,Piotr Mlynarz. World Journal of Gastroenterology. 2014(01)
[3]Fecal microbiota transplantation for severe enterocolonic fistulizing Crohn’s disease[J]. Fa-Ming Zhang,Hong-Gang Wang,Min Wang,Bo-Ta Cui,Zhi-Ning Fan,Guo-Zhong Ji. World Journal of Gastroenterology. 2013(41)
[4]炎癥性腸病診斷與治療的共識(shí)意見(jiàn)(2012年·廣州)[J]. 胃腸病學(xué). 2012(12)
本文編號(hào)：2896291
【文章來(lái)源】：南京醫(yī)科大學(xué)江蘇省
【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
研究設(shè)計(jì)的流程圖
南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)離純化系統(tǒng)”（GenFMTer，法邁特公司,南京）來(lái)富集和純化新鮮糞菌，此法為微濾加離心富集法（MicrofiltrationplusCentrifugation,MPC）。自 2014 年以所有糞菌制備過(guò)程均在 GMP（Good Manufacturing Practice）級(jí)別的實(shí)驗(yàn)室2）完成。一般程序主要包括微濾，離心，清洗，丟棄和稀釋。我們提出了小時(shí) FMT 方案（one-hourFMTprotocol）”，即從供體完成排便到實(shí)驗(yàn)室分離新鮮糞菌，再到輸注到患者腸道的時(shí)間控制在一小時(shí)以內(nèi)[20]。
圖 3 經(jīng)內(nèi)鏡腸道植管術(shù)（Transendoscopic Enteral Tubing,TET）。（A）鼻空腸 TET 途徑概念圖[30]；（B）結(jié)腸 TET 途徑概念圖[29]。4. 標(biāo)本處理4.1 16S rRNA 基因測(cè)序和處理使用 QIAamp DNA Stool Mini 試劑盒從糞便樣品中提取細(xì)菌 DNA。通過(guò)具有 HF 緩沖液的 Phusion 高保真 PCR 主混合物（NewEnglandBiolabs，England），使用用于V4-V5高變區(qū)的條形碼引物對(duì)細(xì)菌16SrRNA基因序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增。來(lái)自每個(gè)樣品的產(chǎn)物以相等的摩爾比混合，然后使用 IlluminaMiSeq 平臺(tái)按照標(biāo)準(zhǔn) Illumina 測(cè)序方案進(jìn)行測(cè)序。 序列讀取通過(guò)使用 Trimmomatic（版本 0.35）和 FLASH 程序（版本 1.2.11）進(jìn)行質(zhì)量控制。使用軟件：mothur（版本 1.33.3），UPARSE（使用版本 v8.1.1756）和 R（版本 3.2.3）的組合分析 16S rRNA 基因序列。操作分類單位（OTU）聚類在 97％的相似性和使用 UPARSE 管道進(jìn)行過(guò)濾。使用 mothur 計(jì)算用于 -多樣性分析的
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]糞菌移植體系[J]. 張發(fā)明. 科技導(dǎo)報(bào). 2016(20)
[2]Serum and urine metabolomic fingerprinting in diagnostics of inflammatory bowel diseases[J]. Tomasz Dawiskiba,Stanislaw Deja,Agata Mulak,Adam Zabek,Ewa Jawień,Dorota Pawelka,Miroslaw Banasik,Agnieszka Mastalerz-Migas,Waldemar Balcerzak,Krzysztof Kaliszewski,Jan Skóra,Piotr Bar,Krzysztof Korta,Kornel Pormańczuk,Przemyslaw Szyber,Adam Litarski,Piotr Mlynarz. World Journal of Gastroenterology. 2014(01)
[3]Fecal microbiota transplantation for severe enterocolonic fistulizing Crohn’s disease[J]. Fa-Ming Zhang,Hong-Gang Wang,Min Wang,Bo-Ta Cui,Zhi-Ning Fan,Guo-Zhong Ji. World Journal of Gastroenterology. 2013(41)
[4]炎癥性腸病診斷與治療的共識(shí)意見(jiàn)(2012年·廣州)[J]. 胃腸病學(xué). 2012(12)
本文編號(hào)：2896291
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