發(fā)布時(shí)間：2020-11-11 20:58

　　 目的研究葛根素對(duì)順鉑誘導(dǎo)小鼠耳毒性的防護(hù)作用及其機(jī)制,為臨床防治順鉑所致耳聾提供新思路。方法1、在體實(shí)驗(yàn)100只成年BALB/c小鼠隨機(jī)分為四組:對(duì)照組、順鉑組、順鉑+葛根素組和葛根素組(n=25只)。順鉑組腹腔注射順鉑4.5mg/kg/d,連續(xù)5d;葛根素組腹腔注射葛根素200mg/kg/d,連續(xù)14d;順鉑+葛根素組先提前腹腔注射葛根素200mg/kg/d,連續(xù)9d,在第10d同時(shí)腹腔注射順鉑4.5mg/kg/d,連續(xù)5d;對(duì)照組則腹腔注射等量生理鹽水。應(yīng)用聽(tīng)腦干反應(yīng)(auditory brainstem response,ABR)測(cè)試和耳蝸毛細(xì)胞計(jì)數(shù),觀察小鼠用藥前后的聽(tīng)力變化和毛細(xì)胞損傷情況;應(yīng)用免疫熒光染色、蛋白免疫印跡(Western blot)和實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time PCR)等技術(shù)檢測(cè)耳蝸內(nèi)基質(zhì)交感分子1(stromal interaction molecule 1,STIM1)、Orai1、瞬時(shí)感受器電位香草酸受體1(transient receptor potential vanilloid receptor 1,TRPV1)、鈣蛋白酶2(calpain2)的表達(dá)。2、離體實(shí)驗(yàn)取新生3d BALB/c小鼠耳蝸基底膜,于無(wú)血清的新鮮培養(yǎng)基中常規(guī)培養(yǎng)24h后,棄去原培養(yǎng)基。將基底膜隨機(jī)分為4組,對(duì)照組給予新鮮無(wú)血清培養(yǎng)基2ml;順鉑組給予含有順鉑(16μg/ml)的新鮮無(wú)血清培養(yǎng)基2ml;順鉑+葛根素組提前給予10~(-6)M葛根素?zé)o血清新鮮培養(yǎng)基培養(yǎng)30min后,加入順鉑(16μg/ml)至2ml;葛根素組給予10~(-6)M葛根素?zé)o血清新鮮培養(yǎng)基2ml;各組在同等條件下繼續(xù)培養(yǎng)24h。利用異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)和羅丹明(tetramethylrhodamineisothiocyanate,TRITC)標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽熒光染色方法,觀察耳蝸毛細(xì)胞形態(tài)變化,并統(tǒng)計(jì)各組毛細(xì)胞數(shù)量。應(yīng)用Western blot技術(shù)檢測(cè)耳蝸毛細(xì)胞內(nèi)STIM1和Orai1蛋白的表達(dá);采用Ca~(2+)熒光探針Fluo-4 AM負(fù)載入毛細(xì)胞,激光共聚焦顯微鏡來(lái)觀察各組耳蝸毛細(xì)胞內(nèi)游離Ca~(2+)水平。結(jié)果1.連續(xù)給藥后,順鉑組ABR閾移與對(duì)照組相比明顯增大(P0.01);順鉑+葛根素組ABR閾移與順鉑組相比明顯減小(P0.01);葛根素組ABR閾移與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異(P0.05)。2.在體小鼠耳蝸和離體培養(yǎng)基底膜的毛細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果均顯示,順鉑組外毛細(xì)胞缺失率與對(duì)照組相比顯著增大(P0.01);與順鉑組相比,在體實(shí)驗(yàn)中順鉑+葛根素組耳蝸基底膜的底回和中回的外毛細(xì)胞缺失率明顯減少(P0.01);離體實(shí)驗(yàn)中順鉑+葛根素組與順鉑組相比,外毛細(xì)胞和內(nèi)毛細(xì)胞缺失均顯著減少(P0.01);對(duì)照組與葛根素組相比,差異不顯著(P0.05)。3.細(xì)胞內(nèi)Ca~(2+)水平檢測(cè)結(jié)果顯示,順鉑組耳蝸毛細(xì)胞內(nèi)的Ca~(2+)水平明顯高于對(duì)照組(P0.01);而順鉑+葛根素組耳蝸毛細(xì)胞內(nèi)Ca~(2+)水平與順鉑組相比顯著減弱(P0.01);對(duì)照組與葛根素組相比熒光強(qiáng)度無(wú)明顯差異(P0.05)。4.Real-time PCR結(jié)果顯示,順鉑組STIM1和Orai1的mRNA水平明顯高于對(duì)照組(P0.01);而順鉑+葛根素組STIM1和Orai1的mRNA水平與順鉑組相比明顯降低(P0.05,P0.01);葛根素組的STIM1和Orai1的mRNA表達(dá)與對(duì)照組相比無(wú)明顯變化(P0.05)。5.免疫熒光鋪片結(jié)果表明,順鉑組STIM1、Orai1的陽(yáng)性反應(yīng)與對(duì)照組相比顯著增強(qiáng)(P0.01);順鉑+葛根素組STIM1、Orai1的陽(yáng)性反應(yīng)與順鉑組相比明顯減弱(P0.01);對(duì)照組與葛根素組相比無(wú)顯著性差異(P0.05)。6.在體與離體實(shí)驗(yàn)的Western blot檢測(cè)結(jié)果均表明,順鉑組的STIM1、Orai1表達(dá)與對(duì)照組相比均明顯增強(qiáng)(P0.01);順鉑+葛根素組的蛋白表達(dá)與順鉑組相比明顯減弱(P0.05);葛根素組與對(duì)照組相比蛋白表達(dá)并無(wú)明顯變化(P0.05)。7.免疫熒光檢測(cè)結(jié)果顯示,順鉑組TRPV1和calpain2蛋白陽(yáng)性表達(dá)明顯強(qiáng)于對(duì)照組(P0.01);順鉑+葛根素組與順鉑組相比陽(yáng)性表達(dá)明顯減弱(P0.01);而對(duì)照組與葛根素組的熒光強(qiáng)度相比無(wú)明顯變化(P0.05)。結(jié)論葛根素可通過(guò)減少STIM1、Orai1、TRPV1和calpain2蛋白表達(dá),抑制耳蝸細(xì)胞發(fā)生鈣超載,從而有效防護(hù)順鉑所致小鼠聽(tīng)功能受損。
【學(xué)位單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R979.1;R764.43
【部分圖文】：

組別外毛細(xì)胞缺失率（%）底回 中回 頂回對(duì)照組 3.00±1.10 3.30±1.00 2.40±2.80順鉑組 75.70±3.70**40.30±5.90**19.50±3.00*順鉑+葛根素組 36.20±4.20**△△24.00±5.10**△△16.40±2.80*葛根素組 4.30±1.00 4.00±2.70 3.10±1.80注：**與對(duì)照組比較，P＜0.01；△△與順鉑組比較，P＜0.01（三）離體耳蝸毛細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，順鉑組耳蝸毛細(xì)胞出現(xiàn)明顯的倒伏和缺失，且損傷數(shù)量明顯多照組（P＜0.01）；順鉑+葛根素組與對(duì)照組相比毛細(xì)胞仍有缺失（P01），但與順鉑組相比毛細(xì)胞損傷數(shù)量減少（P＜0.01）；對(duì)照組與葛根素較無(wú)明顯差異（P＞0.05）（圖 1-1，圖 1-2）。

注：**與對(duì)照組比較，P＜0.01；△△與順鉑組比較，P＜0.01素對(duì)順鉑致毒離體耳蝸毛細(xì)胞內(nèi) Ca2+水平的影示，TRITC-鬼筆環(huán)肽標(biāo)記的毛細(xì)胞纖毛呈紅色熒光，F(xiàn)lu Ca2+顯示為綠色熒光。順鉑組毛細(xì)胞內(nèi)的 Ca2+水平與對(duì)＜0.01）；順鉑+葛根素組毛細(xì)胞的 Ca2+水平與對(duì)照組相比與順鉑組相比明顯降低（P＜0.01）；對(duì)照組毛細(xì)胞的 C無(wú)明顯變化（P＞0.05）（圖 2-1，圖 2-2）。

離體耳蝸毛細(xì)胞內(nèi)Ca2+水平變化
【參考文獻(xiàn)】

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1 邸陽(yáng);于利;田原;林宇涵;王愛(ài)梅;;熊果酸對(duì)順鉑致毒小鼠耳蝸瞬時(shí)感受器電位香草酸受體1表達(dá)的影響[J];聽(tīng)力學(xué)及言語(yǔ)疾病雜志;2015年01期

2 李冰慧;;葛根素聯(lián)合利多卡因治療突發(fā)性耳聾49例(53耳)療效觀察[J];臨床合理用藥雜志;2014年22期

3 劉衛(wèi)紅;姚琦;王陳榮;王瑛;陳望燕;;葛根素注射液耳后注射聯(lián)合聲頻共振治療老年性聾療效觀察[J];新中醫(yī);2013年03期

4 黃綿慶;楊照新;姚茂忠;田樹(shù)紅;符健;;葛根素對(duì)中波紫外線損傷HaCaT細(xì)胞的抗氧化作用[J];重慶醫(yī)學(xué);2012年19期

5 許焱;史振偉;;葛根素致急性腎衰竭1例與發(fā)病機(jī)制探討[J];醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2012年04期

6 陳鑫;邱建華;;葛根素對(duì)噪聲性聾的防治作用[J];聽(tīng)力學(xué)及言語(yǔ)疾病雜志;2011年04期

7 劉斌;任基浩;葛益林;;葛根素對(duì)豚鼠耳蝸缺血再灌注損傷時(shí)聽(tīng)功能和IκBα的影響[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合耳鼻咽喉科雜志;2009年05期

8 董楊;王靜;施建蓉;韓志芬;郭瑞新;;葛根素對(duì)慶大霉素所致小鼠耳蝸毛細(xì)胞損傷的拮抗效應(yīng)[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合耳鼻咽喉科雜志;2008年06期

9 郭密;韋倩;張仲君;徐壽水;姜萍;;中藥葛根素抗缺氧及抗氧化的藥效學(xué)研究[J];解放軍保健醫(yī)學(xué)雜志;2007年02期

10 聞國(guó)華;錢茂華;趙松;陳平;管沛;馬莉;徐霞;黃志俊;汪曉雷;;丹參注射液預(yù)防順鉑耳毒性的臨床研究[J];交通醫(yī)學(xué);2006年06期

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