發(fā)布時(shí)間：2020-11-20 11:21

　　 本論文分為兩部分。第一部分是對(duì)熒光探針YZP1在體外和體內(nèi)的生物活性進(jìn)行探究,第二部分為化合物AA13的神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用及其相關(guān)機(jī)理的探究。在炎癥和腫瘤環(huán)境中,COX-2的表達(dá)會(huì)明顯升高,并且腫瘤微環(huán)境中常常伴有局部乏氧的現(xiàn)象,針對(duì)上述兩個(gè)特性,我們?cè)O(shè)計(jì)了雙靶向探針YZP1,旨在探索新的針對(duì)腫瘤及炎癥的示蹤方法。首先對(duì)探針進(jìn)行體外生物活性檢測(cè),將探針YZP1與Hela細(xì)胞共培養(yǎng),利用MTT法檢測(cè)細(xì)胞的存活率,利用共聚焦顯微鏡采集熒光,結(jié)果顯示YZP1對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)不產(chǎn)生顯著性影響,并且探針的熒光強(qiáng)度與氧濃度呈負(fù)相關(guān),與COX-2活性呈正相關(guān),氧濃度越低,COX-2活性越高,探針的熒光強(qiáng)度越強(qiáng)。共定位實(shí)驗(yàn)中,利用細(xì)胞器定位探針與YZP1共定位,發(fā)現(xiàn)探針的熒光與高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位探針的熒光重合度較高,表明探針主要在這兩個(gè)細(xì)胞器上發(fā)揮作用,這與COX-2主要的分布位置相吻合�；铙w成像實(shí)驗(yàn)中,在足腫脹炎癥小鼠的尾靜脈注射探針;對(duì)乳腺腫瘤裸鼠的腫瘤周圍區(qū)域進(jìn)行皮下注射,分別在活體成像系統(tǒng)下成像,發(fā)現(xiàn)探針可以準(zhǔn)確定位到炎癥和腫瘤部位,并發(fā)出強(qiáng)烈的熒光信號(hào)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,小鼠均可以進(jìn)行正常的生命活動(dòng)。體外器官和腫瘤組織成像結(jié)果以及HE染色結(jié)果說(shuō)明,探針在體內(nèi)的代謝時(shí)間較短,對(duì)小鼠的主要器官?zèng)]有明顯的損傷,沒(méi)有新的炎癥產(chǎn)生。探針YZP1在體內(nèi)和體外均有良好的靶向性,沒(méi)有毒副作用,本研究為臨床上腫瘤的早期診斷和手術(shù)過(guò)程中的精準(zhǔn)切除提供了參考。第二部分中,主要對(duì)化合物AA13的神經(jīng)保護(hù)作用的可能的機(jī)理進(jìn)行探究。我們之前的研究表明AA13具有潛在的抗炎和神經(jīng)保護(hù)活性。氧化應(yīng)激是AD的主要病因之一,靶向自噬的治療正在成為包括AD在內(nèi)的許多疾病的有希望的策略。實(shí)驗(yàn)采用H202誘導(dǎo)SHSY5Y細(xì)胞損傷,通過(guò)CCK法對(duì)細(xì)胞的活力進(jìn)行檢測(cè),通過(guò)Western Blotting評(píng)估擬AD環(huán)境中的氧化應(yīng)激相關(guān)通路Akt和p38MAPK的蛋白水平以及自噬蛋白LC3的水平。結(jié)果顯示:暴露于H202的SH-SY5Y細(xì)胞的細(xì)胞活力降低,AA13預(yù)處理后,細(xì)胞活力恢復(fù);與僅暴露于H202的細(xì)胞相比,AA13預(yù)處理后,細(xì)胞中p38和Akt的磷酸化均降低。同時(shí),AA13亦可以將細(xì)胞中自噬相關(guān)蛋白LC311和LC31的比值恢復(fù)到正常水平。該研究表明AA13可以提高H202誘導(dǎo)的氧化損傷的細(xì)胞的存活率,具有潛在的神經(jīng)保護(hù)活性,其抑制p38MAPK途徑的激活的作用可能有助于AA13的神經(jīng)保護(hù)作用。同時(shí),自噬可能參與AA13的保護(hù)作用。我們的研究結(jié)果不僅為AA13的神經(jīng)保護(hù)作用提供了新的視角,而且為預(yù)防和治療神經(jīng)退行性疾病提供了一種新的候選化合物。
【學(xué)位單位】：華東理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R96
【部分圖文】：

Ｆｉｇ．?１．１?Ｔｈｅ?ｍｅｃｈａｎｉｓｍ?ｏｆ?ｐｒｏｂｅ??Ｗａｎｇ等人報(bào)道了一種新型ＣＯＸ－２特異性熒光探針Ｎｉｂｌｕｅ－Ｃ６－ＩＭＣ，其中使用己胺接頭將吲哚美辛（ＩＭＣ）與尼羅藍(lán)染料連接。該探針具有ＮＩＲ吸收（６３０ｎｍ）和發(fā)（６７０ｎｍ）的光學(xué)性質(zhì)的優(yōu)點(diǎn)，并且可以通過(guò)熒光成像方法檢測(cè)癌細(xì)胞，用于可視化細(xì)胞和體內(nèi)的腫瘤部位。在ＣＯＸ－２陰性正常細(xì)胞中，Ｎｉｂｌｕｅ－Ｃ６－ＩＭＣ的熒光較弱，而熒光信號(hào)通過(guò)與癌細(xì)胞的高爾基體中積累的ＣＯＸ－２相互作用而選擇性地快速產(chǎn)生�！皢ⅰ睙晒庠鰪�(qiáng)是由于Ｎｉｂｌｕｅ－Ｃ６－ＩＭＣ與ＣＯＸ－２結(jié)合后抑制ＰＥＴ引起的。同時(shí)，探針可于使用流式細(xì)胞術(shù)以快速、靈敏和定量的方式篩選癌細(xì)胞。由于近紅外光學(xué)成像為體非侵入性檢測(cè)癌癥部位提供了巨大潛力，因此探針可能具有從準(zhǔn)確的癌癥診斷到指導(dǎo)術(shù)期間腫瘤切除的應(yīng)用［１（）１］。??Ｊ０）?ＮＨ?，＾０?＊Ｎ＾５〇Ｈ??＾Ｂｒ?ａ?ｈ?ｂ??

（ＡＮＱ）和識(shí)別基團(tuán)，吲哚美辛之間的光誘導(dǎo)電子轉(zhuǎn)移而猝滅（ＩＭＣ）。當(dāng)ＡＮＱ－ＩＭＣ－??６在癌細(xì)胞的高爾基體中與ＣＯＸ－２結(jié)合后被迫采用未折疊狀態(tài)時(shí)，通過(guò)抑制光誘導(dǎo)的電??子轉(zhuǎn)移來(lái)打開(kāi)熒光（圖１．１）。ＡＮＱ－ＩＭＣ－６提供高信號(hào)背景染色，并且已成功用于在使??用流式細(xì)胞術(shù)和單光子和雙光子熒光顯微成像時(shí)快速區(qū)分癌細(xì)胞與正常細(xì)胞。此外，??

ｃｏｎ?１０?１?０．１?０．０１?０．００１??ＹＺＰＩ（ｊｉＶＩ）??圖２．１探針ＹＺＰ１對(duì)Ｈｅｌａ細(xì)胞的增殖情況的影響??Ｆｉｇ．?２．１?Ｔｈｅ?ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｐｒｏｂｅ?ＹＺＰ１?ｏｎ?ｔｈｅ?ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｈｅｌａ?ｃｅｌｌｓ．??Ｔｈｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ，?ｓｅｒｕｍ－ｆｒｅｅ?ｃｕｌｔｕｒｅ?ｍｅｄｉｕｍ?ｏｆ?９０?＼ｉＬ?ｗａｓ?ａｄｄｅｄ?ｔｏ?ｅａｃｈ?ｐｏｒｅ，?ａｎｄ?ｔｈｅ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ??ｇｒｏｕｐ，?ｐｒｏｂｅ?ＹＺＰ１?ｏｆ?９０?ｊｉＬ?ｗｅｒｅ?ａｄｄｅｄ?ｔｏ?ｅａｃｈ?ｐｏｒｅ．?Ｈｅｌａ?ｃｅｌｌｓ?ｗｅｒｅ?ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ?ｏｎ?９６?ｗｅｌｌ?ｐｌａｔｅｓ?ａｔ?ａ??ｄｅｎｓｉｔｙ?ｏｆ?５?ｘ?１０４ａｎｄ?ｉｎｃｕｂａｔｅｄ?ｆｏｒ?２４?ｈｏｕｒｓ．?Ｃｅｌｌ?ｖｉａｂｉｌｉｔｙ?ｗａｓ?ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ?ｕｓｉｎｇ?ＭＴＴ?ａｓｓａｙ．?＊?ｐ?＜?０．０５，??ｃｏｍｐａｒｅｄ?ｗｉｔｈ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ．??１５０－．??１００－?ｍｉｒｉｊｕｊ?＊＊?＊＊??ｃｏｎ?１０?１?０．１?０．０１?０．００１??ＹＺＰ２（｜ＪＶＩ）??圖２．２探針ＹＺＰ２對(duì)Ｈｅｌａ細(xì)胞的增殖情況的影響??Ｆｉｇ．?２．２?Ｔｈｅ?ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｐｒｏｂｅ?ＹＺＰ２?ｏｎ?ｔｈｅ?ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｈｅｌａ?ｃｅｌｌｓ．??Ｔｈｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ
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本文編號(hào)：2891349