第一部分積雪草苷納米乳的處方前研究目的:建立高效液相(HPLC)測定積雪草苷(Asiaticoside,ASI)含量的方法;篩選對積雪草苷溶解度高的油、表面活性劑和助表面活性劑;建立積雪草苷納米乳(Asiaticoside nanoemulsions,ASI-NEs)包封率及溶解度的測定方法。方法:1.建立HPLC法測定ASI的含量,并進(jìn)行精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性等方法學(xué)考察。2.采用搖瓶-HPLC法測定ASI的各油水中分配比,并測定其在油、表面活性劑和助表面活性劑中的平衡溶解度。3.采用透析法測定了ASI-NEs的包封率(Entrapment efficiency,EE)。4.采用高速離心法測定ASI-NEs的溶解度。結(jié)果:1.建立了HPLC測定ASI含量的方法,方法學(xué)考察符合實(shí)驗(yàn)要求,可用于包封率的計(jì)算。2.初步篩選出對積雪草苷溶解性較高的油、表面活性劑和助表面活性劑,分別為:單亞油酸甘油酯、蓖麻油、OA;RH-40、Labrasol;Transcutol CG、Transcutol P、PEG-400。3.采用透析法可有效分離游離ASI和ASI-NEs,確定透析平衡時(shí)間為3 h,考察了ASI-NEs的包封率。4.采用高速離心法可準(zhǔn)確測定ASI-NEs的溶解度。小結(jié):采用HPLC測定ASI含量、透析法考察ASI-NEs包封率以及高速離心法測定ASI-NEs溶解度的方法均符合實(shí)驗(yàn)要求,為后期處方篩選和工藝研究奠定了基礎(chǔ)。第二部分積雪草苷納米乳及其凝膠的制備和納米乳理化性質(zhì)考察目的:確定ASI-NEs的最優(yōu)制備工藝與處方,確定積雪草苷納米乳凝膠(Asiaticoside nanoemulsions-based gels,ASI-NBGs)的制備方法,考察ASI-NEs的理化性質(zhì)。方法:1.采用相容性實(shí)驗(yàn),初步篩選油、表面活性劑和助表面活性劑。并通過繪制偽三元相圖,以成乳區(qū)域面積大小為標(biāo)準(zhǔn),對各相作進(jìn)一步篩選,以確定各相種類。2.采用單因素實(shí)驗(yàn),以包封率為評價(jià)指標(biāo),確定ASI-NEs的最佳制備工藝。3.通過單純性網(wǎng)格設(shè)計(jì)(Simplex lattice design,SLD)優(yōu)化處方,以溶解度和包封率為評價(jià)指標(biāo),分別做多元模型擬合,得出擬合方程,并根據(jù)擬合方程繪制等高線圖和效應(yīng)面圖,得到理論ASI-NEs的最優(yōu)處方,對其進(jìn)行驗(yàn)證,確定最優(yōu)處方。4.對ASI-NEs的最優(yōu)處方進(jìn)行理化性質(zhì)考察。選擇卡波姆940(P940)作凝膠基質(zhì),將P940置于ASI-NEs中溶脹24 h,三乙醇胺調(diào)節(jié)pH(7.0),制得ASI-NBGs。結(jié)果:1.通過相容性實(shí)驗(yàn)和偽三元相圖的繪制確定了ASI-NEs處方的油、表面活性劑和助表面活性劑成分,分別為單亞油酸甘油酯、聚氧乙烯氫化蓖麻油40(Cremophor RH 40,RH 40)、二乙二醇單乙醚。2.通過對ASI-NEs制備工藝的單因素考察,確定最佳制備工藝為:轉(zhuǎn)速700 rpm·min~(-1),溫度37°C,平衡時(shí)間50 min。3.采用SLD法優(yōu)化處方,得到最佳處方:單亞油酸甘油酯、RH40、二乙二醇單乙醚、水分別為5%、15%、26.3%、53.7%。溶解度和包封率實(shí)測值與預(yù)測值偏差分別為4.55%、3.69%。最優(yōu)處方的溶解度為13.97 mg·g~(-1),包封率為90.29%。4.ASI-NEs是O/W型納米乳,外觀澄清透明,pH值為6.8,平均粒徑為132±5.84 nm,多分散指數(shù)(PDI)為0.2211,具有較好的穩(wěn)定性,高速離心不分層。制得ASI-NBGs,其外觀透明,無結(jié)塊。小結(jié):成功制備了ASI-NEs和ASI-NBGs,該制劑均具有良好的外觀及理化性質(zhì)。第三部分積雪草苷納米乳及其凝膠的體外透皮特性研究目的:考察ASI-NEs和ASI-NBGs的體外透皮特性。方法:制備ASI-NEs和ASI-NBGs,采用改良的Franz擴(kuò)散池,對ASI-NEs、ASI-NBGs進(jìn)行透皮特性考察。并與市售軟膏、普通凝膠、添加促透劑凝膠進(jìn)行透皮比較,繪制累積釋放曲線,計(jì)算12 h皮下滯留量,采用滯留時(shí)間法評價(jià)各積雪草苷透皮制劑的體外透皮特性。結(jié)果:ASI-NEs、ASI-NBGs與添加促透劑凝膠相比,前兩者透皮速率更快,明顯強(qiáng)于促透劑組,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);經(jīng)皮給藥12 h后,ASI-NEs和ASI-NBGs單位面積累積滲透量分別是3504.30±180.93μg·cm~(-2)和1187.40±128.88μg·cm~(-2),是市售軟膏對照組的6.57和2.23倍,皮膚滯留量分別是159.48±7.47μg·cm~(-2)和120.53±5.71μg·cm~(-2),是市售軟膏對照組的5.93和4.48倍,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。小結(jié):制備的ASI-NEs和ASI-NBGs具有良好的體外透皮特性。第四部分積雪草苷納米乳及其凝膠的皮膚藥動(dòng)學(xué)研究目的:考察ASI-NEs和ASI-NBGs的皮膚藥動(dòng)學(xué)特性。方法:本研究采用在體給藥分時(shí)取樣法,以小鼠為研究對象,比較ASI-NEs、ASI-NBGs和市售軟膏的皮膚藥動(dòng)學(xué)行為。結(jié)果:使用ASI-NEs、ASI-NBGs后藥物達(dá)峰時(shí)間均為6 h,使用市售軟膏的達(dá)峰時(shí)間為8 h;ASI-NEs、ASI-NBGs、市售軟膏的藥時(shí)曲線下面積(AUC _(0-∞))分別為6227.85、4994.90、2321.36μg·h·g~(-1),即ASI-NEs和ASI-NBGs組分別是市售軟膏組的2.68倍和2.15倍。研究表明納米乳及納米乳凝膠作為積雪草苷透皮給藥載體,藥物在皮膚中能較快達(dá)到峰值,在較長時(shí)間內(nèi)保持穩(wěn)定釋放,使皮下藥物滯留增多且保持在一個(gè)相對恒定的水平,且具有較高的生物利用度。小結(jié):ASI-NEs和ASI-NBGs具有較高的生物利用度,適合開發(fā)成局部外用制劑。第五部分積雪草苷納米乳及其凝膠的皮膚刺激性和透皮機(jī)制研究目的:考察ASI-NEs、ASI-NBGs的皮膚刺激性和透皮機(jī)制。方法:1.采用新西蘭白兔為動(dòng)物模型,通過考察ASI-NEs、ASI-NBGs單次和多次給藥對其正常和破損皮膚的影響,研究ASI-NEs、ASI-NBGs的皮膚刺激性。2.通過HE染色法考察家兔局部給藥對皮膚微觀結(jié)構(gòu)的影響,激光掃描共聚焦顯微鏡(CLSM)可視化研究藥物的分布及滲透行為,進(jìn)而研究ASI-NEs、ASI-NBGs的透皮機(jī)制。結(jié)果:1.ASI-NEs、ASI-NBGs皮膚刺激性試驗(yàn)表明:單次給藥后,ASI-NEs、ASI-NBGs對正常皮膚和破損皮膚均無刺激性;多次給藥后,ASI-NBGs對正常皮膚無刺激性,ASI-NEs對正常皮膚有輕度刺激性,ASI-NEs、ASI-NBGs對破損皮膚均有輕度刺激性,個(gè)別表現(xiàn)出具有勉強(qiáng)可見的紅斑,且一天后可完全自行消退。2.HE染色和CLSM研究表明ASI-NEs和ASI-NBGs的透皮機(jī)制主要是通過作用于皮膚角質(zhì)層微觀結(jié)構(gòu)并借助皮膚附屬器途徑,使藥物透過皮膚發(fā)揮治療作用。小結(jié):ASI-NEs和ASI-NBGs的透皮機(jī)制主要是通過作用于皮膚角質(zhì)層微觀結(jié)構(gòu)并借助皮膚附屬器途徑,使藥物透過皮膚發(fā)揮治療作用。ASI-NBGs是一種安全的皮膚局部用制劑,但應(yīng)避免用于破損皮膚。結(jié)論:本研究成功制備了ASI-NEs和ASI-NBGs,制備工藝簡單,重現(xiàn)性好。ASI-NEs和ASI-NBGs具有良好的透皮特性和較高的生物利用度。ASI-NBGs是一種安全的皮膚局部用制劑,但應(yīng)避免用于破損皮膚。
【學(xué)位單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R94
【部分圖文】：
side）是從傘形科植物積萜類化合物[1,2]，研究表、抗腫瘤、抗纖維化、神等作用[2,3]。目前臨床上主瘩和硬皮病等，且大量的痕療效確切[4]。于成纖維細(xì)胞、膠原蛋白F）和細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)（Sm胞）等多方面的作用機(jī)制降低 TGF-β1mRNA 表達(dá)達(dá)明顯減少，達(dá)到促進(jìn)Ⅰ型 Smad 通路，抑制瘢痕的磷酸化 Smad2 的含量，增。
圖 1 積雪草苷在不同油相中的平衡溶解度Fig. 1 Solubility of asiaticoside in different oils草苷在表面活性劑、助表面活性劑中的平衡溶ility of asiaticoside in different surfactants and co s
202 積雪草苷在表面活性劑、助表面活性劑中的平衡溶解度olubility of asiaticoside in different surfactants and co surfa圖 3 積雪草苷紫外掃描圖Fig. 3 The UV spectrum of asiaticoside
【參考文獻(xiàn)】
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本文編號(hào)：
2893831
