發(fā)布時(shí)間：2020-03-23 05:27

【摘要】：目的:本研究通過制備腎陽虛水腫大鼠模型,觀察傳統(tǒng)經(jīng)典方劑五苓散對(duì)腎陽虛水腫大鼠水液代謝的影響,并通過免疫組化、RT-PCR、Western Blot等技術(shù)檢測(cè)AQP3的表達(dá)情況,以探討五苓散調(diào)節(jié)腎陽虛水腫大鼠水液代謝與AQP3的相關(guān)性。旨在從水通道蛋白水平揭示經(jīng)典方劑五苓散干預(yù)腎臟水液代謝的調(diào)控機(jī)制,為臨床使用五苓散治療水液代謝相關(guān)疾病提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:1、采用對(duì)大鼠臂部肌肉注射氫化可的松、尾靜脈注射鹽酸多柔比星溶液制備腎陽虛水腫大鼠模型;2、觀察大鼠行為學(xué)表現(xiàn),測(cè)量其體重、體溫、尿量和24h尿蛋白,檢測(cè)大鼠血清cAMP、cGMP含量;3、隨機(jī)選取50只造模成功的雄性大鼠,并將其隨機(jī)分為5組,即模型組(MG組)、五苓散低劑量組(WLS-L組)、五苓散中劑量組(WLS-M組)、五苓散高劑量組(WLS-H組)與呋塞米組(F組),每組10只;并隨機(jī)選取10只未造模正常大鼠作為空白組(NG組)。4、各組分別進(jìn)行等體積不同藥物灌胃干預(yù)治療7天,用代謝籠裝置收集并測(cè)定各組大鼠第(1h、2h、4h、24h)的尿液量;5、實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,對(duì)各組大鼠腹主動(dòng)脈采血,處死大鼠,摘取腎臟;6、應(yīng)用HE染色察看腎臟組織損傷情況;7、應(yīng)用免疫組化、RT-PCR、Western Blot對(duì)大鼠腎臟AQP3 mRNA及AQP3蛋白的表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)與分析。結(jié)果:1、通過對(duì)大鼠行為學(xué)觀察、體重、體溫、尿量及24h尿蛋白的檢量,結(jié)果顯示與NG組比較,腎陽虛水腫造模組的體重、體溫均明顯下降,尿量減少,24h尿蛋白含量增加;應(yīng)用ELISA法檢測(cè)大鼠血清cAMP、cGMP水平發(fā)現(xiàn),與NG組比較,腎陽虛水腫造模的各組cAMP的含量減少,cGMP含量增多,cAMP/cGMP的值顯著降低。綜上提示本實(shí)驗(yàn)造模成功,實(shí)驗(yàn)所得腎陽虛水腫模型穩(wěn)定可靠。2、通過對(duì)大鼠24h總尿液量的測(cè)量,發(fā)現(xiàn)與NG組比較,MG組大鼠24h尿量減少,變化存在顯著差異,具有極其顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01);與MG組比較,WLS-L組、WLS-H組大鼠24h尿量增加,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),而WLS-M組、F組24h尿量顯著增加,具有極其顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。3、通過對(duì)各組大鼠在給藥后相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)(1h、2h、4h)尿量測(cè)量分析,各實(shí)驗(yàn)組隨時(shí)間的增加尿量均有所增加,但各組增加的程度不一致。與NG組比較,MG在給藥后1h、2h、4h各時(shí)間點(diǎn)尿量均存在顯著性差異(p0.01);與MG組比較,WLS-L組、WLS-M組、WLS-H組、F組在給藥1h、2h、4h各時(shí)間點(diǎn)尿量有極顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。4、通過應(yīng)用HE染色、免疫組化、RT-PCR、Western Blot技術(shù)對(duì)大鼠腎臟AQP3 mRNA、AQP3蛋白進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果表明AQP3主要分布在腎臟腎集合管上皮細(xì)胞基側(cè)膜上,經(jīng)圖像軟件分析各區(qū)域密度灰值可知,與NG組比較,MG組AQP3 mRNA及AQP3蛋白的表達(dá)增多,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。與MG組比較,WLS-L組、WLS-M組、WLS-H組及F組中AQP3 mRNA及AQP3的表達(dá)均降低,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。結(jié)論:1、五苓散對(duì)腎陽虛水腫模型大鼠具有利尿作用,其利尿強(qiáng)度與藥物濃度有關(guān),五苓散中劑量組利尿功效最顯著。2、五苓散對(duì)腎陽虛水腫大鼠利尿作用與調(diào)控腎臟AQP3有關(guān),其利尿作用可能是通過下調(diào)腎臟AQP3 mRNA及AQP3表達(dá)量實(shí)現(xiàn)的。
【圖文】：

空白組大鼠體毛柔順、行動(dòng)靈活、飲食二便均正常；模型組大鼠的體毛枯疏無光澤，脫毛，抱團(tuán)少動(dòng)，體重增長(zhǎng)緩慢，自主活動(dòng) ， 肛 溫 下 降， 反 應(yīng) 遲 鈍 ， 蜷 縮 弓 背 ， 畏 寒 怕 冷 ， 食 少 納 差 ， 腹大便稀溏，小便清長(zhǎng)等腎陽虛水腫癥狀，均符合腎陽虛水腫標(biāo)準(zhǔn)大鼠體重、體溫比較從實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可以看出，與 NG 組比較，MG 組大鼠體重、體溫明差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.01），說明機(jī)體處于能量代謝下降實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表 1、圖 1、圖 2。表 1 各組大鼠 體重、體溫比較（x s，， n=10） 體重（g） 體溫（℃） 299.57±4.61 37.63±0.17 247.85±7.11**34.62±0.62**與 NG 組比較，**p<0.01

圖 2 大鼠體溫 比較注：與 NG 組比較，**p<0.01大鼠 24h 尿量及尿蛋白含量比較與 NG 組相比 ，MG 組大鼠 24h 尿量 明 顯 減少 ，24h 尿蛋 白 含 量 ， 差 異 均 具 有 統(tǒng) 計(jì) 學(xué) 意 義 （ p<0.01） 。 實(shí) 驗(yàn) 結(jié) 果 如 表 2、 圖 3表 2 各組大鼠 24h 尿量及尿 蛋白含量比較（x s， n=10） 24h 尿量（ml） 24h 尿蛋白（mg） 10.88±2.24 12.35±0.47 5.86±1.24**99.06±1.89**與 NG 組比較，**p<0.01
【學(xué)位授予單位】：黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2596262