發(fā)布時(shí)間：2020-12-05 16:26

　　目的:為了選出人參蛋白質(zhì)最佳的提取方法,并對比不同生長年份對人參蛋白質(zhì)含量的影響;研究人參蛋白質(zhì)對人乳腺癌MCF-7細(xì)胞的抗腫瘤作用及作用機(jī)制。方法:分別采用丙酮沉淀法、聚乙二醇6000沉淀法、聚乙二醇20000沉淀法、酚提取法、Trizol提取法提取人參水溶性蛋白質(zhì);并對3年、4年、5年生人參的蛋白質(zhì)含量進(jìn)行對比,采用Bradford方法測定蛋白質(zhì)含量,SDS-PAGE電泳鑒定蛋白分子量;分別采用不同濃度人參蛋白質(zhì)作用于人乳腺癌細(xì)胞MCF-7,利用CCK-8方法測定細(xì)胞增殖活性,PI染色及流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期的變化,顯微鏡下常光觀察及DAPI染色法觀察細(xì)胞的凋亡形態(tài),Annexin V/FITC雙染法進(jìn)一步檢測細(xì)胞的凋亡情況,采用QPCR及Western Blot實(shí)驗(yàn)檢測基因及蛋白水平的影響,并通過細(xì)胞劃傷愈合實(shí)驗(yàn)及Transwell趨化小室實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞遷移情況,研究人參蛋白質(zhì)的作用機(jī)制。結(jié)果:采用丙酮沉淀法提取得到的人參蛋白質(zhì)純度最高,電泳條帶最清晰完整,且通過對3、4、5年人參蛋白質(zhì)含量的對比,發(fā)現(xiàn)3年生人參的蛋白質(zhì)含量最低,5年生人參的蛋白質(zhì)含量最高;活性研究結(jié)果表明,人參蛋... 

【文章來源】：長春中醫(yī)藥大學(xué)吉林省

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

蛋白質(zhì)定量分析標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖 2 不同提取方法得到蛋白質(zhì)的提取率及純度分析AGE 電泳分析不同人參蛋白質(zhì)提取方法的影響方法提取蛋白SDS-PAGE電泳結(jié)果見圖3。由圖可見，人參5~70kDa之間，主要包括分子量大約為64kDa，29kDa，27k

圖 2 不同提取方法得到蛋白質(zhì)的提取率及純度分析3.1.3 SDS-PAGE 電泳分析不同人參蛋白質(zhì)提取方法的影響不同提取方法提取蛋白SDS-PAGE電泳結(jié)果見圖3。由圖可見，人參蛋白質(zhì)分子量主要分布在15~70kDa之間，主要包括分子量大約為64kDa，29kDa，27kDa，21kDa，18kDa，15kDa的蛋白

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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