發(fā)布時間：2024-05-26 23:14

　　目的本課題通過體內(nèi)外實驗探討石斛合劑通過調(diào)控PI3K/Akt和GCGR/PKA信號通路改善肝臟胰島素抵抗,抑制糖異生的作用機(jī)制。方法1.大鼠肝組織iTRAQ蛋白組學(xué)檢測雌性Wistar大鼠40只,隨機(jī)分為正常組10只和造模組30只。正常組予普通飼料喂養(yǎng),造模組以高脂高糖飼料喂養(yǎng)6周后腹腔注射2次STZ(25 mg/kg +m2,間隔72 h)。篩選出糖尿病成模大鼠,再隨機(jī)分為3組(模型組、石斛合劑組和二甲雙胍組)。石斛合劑組以石斛合劑1號方(17.2 g/kg·d-l)和石斛合劑2號方(12.4 g/kg·d-1)灌胃,二甲雙胍組以二甲雙胍灌胃(100mg/kg·d),模型組、正常組用生理鹽水灌胃,均持續(xù)灌胃60天。各組動物均于最后一次用藥后24小時后剖腹取肝組織。利用以iTRAQ為標(biāo)記的液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù),對大鼠肝臟進(jìn)行蛋白組學(xué)檢測,定量觀察各組大鼠肝臟的蛋白質(zhì)差異表達(dá)情況,尋找組間的差異蛋白和相關(guān)信號通路,為后續(xù)研究打下基礎(chǔ)。2.動物實驗SPF級健康雌性Wistar大鼠50只,隨機(jī)選取11只為正常組,其余39只大鼠按上述方法造模和分組干預(yù),持續(xù)灌胃12周后采血取材。檢測空腹血糖、...

【文章頁數(shù)】：105 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
縮略詞表
中文摘要
Abstract
前言
第一部分 基于iTRAQ技術(shù)的糖尿病大鼠肝組織的蛋白組學(xué)研究
    1 材料
        1.1 實驗動物
        1.2 實驗藥物
        1.3 主要試劑與儀器
        1.4 主要試劑配制
    2 研究方法
        2.1 動物模型制備
        2.2 動物分組和干預(yù)
        2.3 動物取材
        2.4 iTRAQ檢測肝組織蛋白質(zhì)組學(xué)
        2.5 生物信息分析
    3 結(jié)果
        3.1. 質(zhì)譜基本鑒定信息和質(zhì)量評估
        3.2 COG分類圖注釋
        3.3 GO注釋
        3.4 肝臟組織差異蛋白質(zhì)的篩選
        3.5 Pathway代謝通路注釋
    4 討論
        4.1 iTRAQ蛋白質(zhì)組學(xué)
        4.2 GO注釋
        4.3 肝臟組織差異蛋白質(zhì)
        4.4 Pathway信號通路富集分析
    5 小結(jié)
第二部分 石斛合劑改善糖尿病大鼠胰島素抵抗抑制糖異生的機(jī)制研究
    1 材料
        1.1 實驗動物
        1.2 實驗藥物
        1.3 主要試劑
        1.4 主要儀器
        1.5 主要試劑的配制
    2 研究方法
        2.1 糖尿病大鼠模型的制備
        2.2 動物分組及干預(yù)
        2.3 動物取材
        2.4 整體糖脂代謝指標(biāo)測定
        2.5 ELISA法檢測各組空腹胰島素、胰高血糖素
        2.6 肝臟組織病理學(xué)觀察
        2.7 免疫組化檢測PI3K/AKT和GCGR/PKA通路相關(guān)蛋白的表達(dá)
        2.8 RT-PCR法檢測PI3K/AKT和GCGR/PKA通路相關(guān)基因的mRNA表達(dá)情況
        2.9 Western bolt檢測各組PI3K/Akt和GCGR/PKA通路相關(guān)蛋白表達(dá)
        2.10 統(tǒng)計學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 動物一般狀況
        3.2 各組大鼠血清學(xué)指標(biāo)的變化
        3.3 各組大鼠肝組織HE染色結(jié)果
        3.4 石斛合劑對糖尿病大鼠GCGR/PKA和PI3K/AKT通路相關(guān)基因表達(dá)的影響
        3.5 石斛合劑對大鼠肝組織PI3K/AKT和GCGR/PKA通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
    4 討論
        4.1 糖尿病大鼠模型的構(gòu)建
        4.2 干預(yù)藥物石斛合劑和陽性對照藥的選擇依據(jù)
        4.3 石斛合劑對糖尿病模型大鼠糖脂代謝和肝功能的影響
        4.4 石斛合劑對糖尿病模型大鼠肝臟形態(tài)學(xué)的影響
        4.5 石斛合劑對GCGR/PKA信號通路的影響
        4.6 石斛合劑通過調(diào)控P13K/Akt信號通路影響糖異生
        4.7 石斛合劑對糖異生關(guān)鍵限速酶PEPCK和G6Pase的影響
    5 小結(jié)
第三部分 石斛合劑對胰島素抵抗肝細(xì)胞糖異生的的作用及其機(jī)制
    1 材料
        1.1 細(xì)胞
        1.2 藥物
        1.3 主要試劑和耗材
        1.4 主要儀器
        1.5 主要試劑配制
    2 研究方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)、傳代與凍存
        2.2 石斛合劑含藥血清及空白血清制備
        2.3 MTT法篩選石斛合劑含藥血清濃度
        2.4 篩選胰島素的干預(yù)濃度
        2.5 篩選建立IR肝細(xì)胞模型的造模胰島素濃度
        2.6 高胰島素誘導(dǎo)L02肝細(xì)胞胰島素抵抗模型的建立和鑒定
        2.7 實驗分組及干預(yù)
        2.8 各組肝細(xì)胞糖消耗量的變化
        2.9 Realtime PCR檢測各組的InsR、GluR、FoxO1、PEPCK和G6Pase的mRNA表達(dá)
        2.10 Western-blotting實驗檢測PI3K/AKT和GCGR/PKA通路相關(guān)蛋白的表達(dá)
        2.11 加入PI3K抑制劑后檢測PI3K/AKT通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
        2.12 統(tǒng)計學(xué)處理實驗數(shù)據(jù)
    3 結(jié)果
        3.1 MTT法確定石斛合劑含藥血清濃度
        3.2 有效胰島素干預(yù)濃度的篩選
        3.3 建立IR肝細(xì)胞模型的胰島素濃度篩選
        3.4 L02細(xì)胞IR模型的鑒定
        3.5石斛合劑含藥血清對IR肝細(xì)胞糖消耗量的影響
        3.6 石斛合劑對各組肝細(xì)胞InsR、FoxO1、PEPCK、G6Pase和GCGR的mRNA表達(dá)的影響
        3.7 石斛合劑對各組肝細(xì)胞PI3K/AKT和GCGR/PKA通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
        3.8 加入PI3K抑制劑后石斛合劑對IR肝細(xì)胞PI3K/AKT通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
    4 討論
        4.1 肝胰島素抵抗對糖尿病的影響
        4.2 IR細(xì)胞模型構(gòu)建
        4.3 石斛合劑治療糖尿病的中藥活性成分以及中藥含藥血清法的應(yīng)用
        4.4 石斛合劑對IR肝細(xì)胞的糖消耗試驗的影響
        4.5 石斛合劑通過P13K/Akt信號通路對糖異生的影響
        4.6 石斛合劑通過GCGR/PKA信號通路對糖異生的影響
        4.7 加入PI3K抑制劑后石斛合劑通過P13K/Akt信號通路對糖異生的影響
    5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述1 胰高血糖素信號通路與糖尿病肝糖異生的研宄進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述2 中藥活性成分防治糖尿病的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡歷



本文編號：3982435