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  本文關鍵詞：黨參多糖的分析及抗腫瘤活性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《蘭州大學》 2013年

一種酸性黨參多糖CPP1b的結(jié)構(gòu)分析及抗腫瘤活性研究

楊春霞  

【摘要】：黨參(Codonopsis pilosula)是一種常用中藥。含有多糖,皂甙,倍半萜類,多酚類,甙類,生物堿類,揮發(fā)油等多種成分。黨參多糖作為黨參中重要活性成分之一,因具有廣泛的生理活性而引起了藥學和相關工作者的廣泛關注,然而均一性的黨參多糖的研究鮮有報道。本研究系統(tǒng)的研究了黨參多糖提取、分離及純化工藝及其抗腫瘤和抗氧化活性。以期對黨參多糖的進一步開發(fā)利用提供理論基礎。具體研究內(nèi)容如下： (1)黨參多糖的提取工藝研究：采用中心組合設計及響應曲面法,以粗多糖產(chǎn)率及糖含量雙指標進行優(yōu)化。結(jié)果表明,兩個指標的優(yōu)化條件有一定的的差異,而最終確定的提取工藝為：提取溫度91℃,提取時間120min,液料比9,提取次數(shù)4次。該工藝下粗多糖產(chǎn)率為為47.15%,糖含量為18.89%。 (2)黨參多糖中硒含量測定：按(1)工藝進行黨參多糖提取,黨參多糖提取液濃縮至適當提及,分取]/2體積,用80%乙醇沉淀多糖,冷凍干燥后得黨參總多糖CPP(粗糖),其余1/2提及一次用30%,50%,70%,80%的乙醇進行分級沉淀,冷凍干燥后的黨參多糖CPP1、CPP2、CPP3、CPP4。采用氫化物發(fā)生原子熒光分光度法測定了CPP1,CPP2,CPP3和CPP4中的硒含量,及不同產(chǎn)地黨參總糖中的有機硒含量。實驗結(jié)果證實黨參中的有機硒主要分布于黨參多糖中,分級沉淀的黨參多糖硒含量主要集中在分子量較小部分 (3)黨參多糖的抗氧化作用研究：系統(tǒng)研究了不同產(chǎn)地的黨參總糖及分級黨參多糖CPP1,CPP2,CPP3,CPP4對O2-、·OH及DPPH的清除作用。對比各產(chǎn)地黨參總糖對三種自由基的清除率,文黨總糖對三種自由基的清除作用均較強,其對自由基的清除能力依次為：·OH·DPPH·O2-.不同級分多糖對·OH及DPPH三種自由基的清除作用用顯強于黨參總糖。本實驗還對比研究了CPP1純化前后的抗氧化活性。結(jié)果顯示,純化后CPP1對·O2-及·OH的清除作用變強,而對DPPH的清除作用變?nèi)?說明多糖的純化過程對其抗氧化活性影響較大 (4)黨參多糖CPP1b的分離純化、結(jié)構(gòu)表征及抗腫瘤活性研究：A. CPP1b結(jié)構(gòu)表征：CPP1經(jīng)除蛋白、脫色素、透析、DE-52及Sephadex G200洗脫,得到三個純化的酸性黨參多糖(CPPla, CPPlb.CPP1c),重點研究了其中一個酸性多糖(CPPlb)的結(jié)構(gòu)。凝膠滲透色譜—多角度激光散射儀連用技術(HPGPC—MALLS)研究結(jié)果顯示其重均分子量(Mw)及均方根半徑(Rg)分別大約為1.45×105Da,29.7nm,聚分散系數(shù)Mw/Mn為1.20,在0.9%NaCl溶液中呈無規(guī)線團結(jié)構(gòu)。進一步通過甲基化分析、氣質(zhì)連用、一維及二維核磁分析,確定CPP1b的分子結(jié)構(gòu)為：主鏈由1→4連接的含乙酰氧基半乳糖醛酸(α-D-GalpA3Ac),1→6連接的含乙酰氧基和乙酰氨基的半乳糖(α-D-Galp3Ac4NAc),及1→2連接的鼠李糖(β-L-Rhap)組成,支鏈α-L-Arap連接于半乳糖2位。推斷CPP1b結(jié)構(gòu)的重復單元為：CPP1b的掃描電鏡(SEM)圖、透射電鏡(TEM)圖、原子力顯微鏡(AFM)圖進一步驗證了CPP1b的結(jié)構(gòu)。 B.CPP1b的抗腫瘤活性研究：采用噻唑藍(MTT)法研究了CPP1b在不同濃度下對人肺癌細胞A549的抑制作用,結(jié)果顯示CPP1b具有較強的抗腫瘤活性,且隨著濃度增加抑制活性增強。實驗還研究了CPP1b對甲氨蝶呤(MTX)的輔助抗腫瘤活性結(jié)果表明CPP1b對MTX的抗腫瘤活性具有明顯的協(xié)同作用。

【關鍵詞】：
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R284;R285
【目錄】：

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