發(fā)布時(shí)間：2020-11-04 10:50

　　 烏拉爾甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch.)為豆科(Leguminosae sp.)甘草屬(Glycyrrhiza Linn.)多年生草本植物,主要分布在新疆、內(nèi)蒙古和甘肅等地區(qū)。作為我國(guó)的大宗藥材之一,其市場(chǎng)需求量巨大,由于近年來(lái)甘草藥材的產(chǎn)量和質(zhì)量急劇下降,因此,培育生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的甘草藥材已成為最佳解決辦法。本文旨在通過(guò)研究多種脅迫作用對(duì)烏拉爾甘草生長(zhǎng)的影響以科學(xué)地指導(dǎo)優(yōu)質(zhì)甘草的栽培生產(chǎn),同時(shí)應(yīng)用植物組織培養(yǎng)技術(shù)擴(kuò)大甘草資源,以更快、更好、更便捷的方式得到甘草的次生代謝產(chǎn)物,可為甘草在醫(yī)藥和食品等產(chǎn)業(yè)上提供更優(yōu)質(zhì)的資源。本論文第一部分研究鹽堿脅迫、干旱脅迫以及雙重脅迫對(duì)烏拉爾甘草種子發(fā)芽率、發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽指數(shù)以及幼苗的根長(zhǎng)、莖長(zhǎng)、鮮重指標(biāo)的影響,同時(shí)對(duì)各脅迫下的烏拉爾甘草幼苗進(jìn)行生理生化特性研究分析。結(jié)果顯示:烏拉爾甘草種子及幼苗對(duì)兩種鹽脅迫均有抗鹽性,其耐鹽程度為NaClNa_2CO_3,并且兩種脅迫在低濃度下顯著促進(jìn)種子萌發(fā)、幼苗生長(zhǎng)、酶活性的增加以及可溶性物質(zhì)的積累,而高濃度呈抑制狀態(tài),其最佳脅迫濃度為25mmol/L;干旱脅迫下,輕度干旱脅迫可促進(jìn)種子萌發(fā)以及幼苗生長(zhǎng),其最佳脅迫濃度為4%,此脅迫濃度下,幼苗保持高酶活性并且提高了滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量;雙重脅迫下,隨脅迫的加劇,種子萌發(fā)指標(biāo)、幼苗生長(zhǎng)狀況和生理生化特性受到抑制。輕、中度干旱以及適量鹽堿成分可增加烏拉爾甘草的抗逆性,以25+25mmol/L的NaCl+Na_2CO_3和4%PEG-6000為最適宜。第二部分利用Box-Behnken響應(yīng)面法優(yōu)化誘導(dǎo)烏拉爾甘草愈傷組織的最佳激素配比,選用2,4-D、6-BA、KT三種激素進(jìn)行組合誘導(dǎo)。結(jié)果以下胚軸為外植體的最佳激素為:6-BA 0.63 mg/L+2,4-D 1.75 mg/L+KT 2.00 mg/L,幼根:6-BA 0.22 mg/L+2,4-D 1.63mg/L+KT1.98mg/L。第三、四部分主要是在建立烏拉爾甘草愈傷組織培養(yǎng)體系中進(jìn)行誘導(dǎo)子的添加,考察愈傷組織增長(zhǎng)量以及采用HPLC方法進(jìn)行甘草苷、甘草酸的含量測(cè)定與比較。結(jié)果:3種誘導(dǎo)子對(duì)愈傷組織的影響存在較大的差異,殼聚糖最適合提高烏拉爾甘草愈傷組織鮮重、干重的增長(zhǎng),最佳濃度的增長(zhǎng)量為3.6629、0.3158g,而茉莉酸甲酯和水楊酸均不適合。定量分析結(jié)果為:殼聚糖可促進(jìn)甘草酸的積累,且在低濃度時(shí)可以提高甘草苷的含量;水楊酸雖抑制了甘草酸的積累,但對(duì)于增加甘草苷含量有促進(jìn)作用;茉莉酸甲酯可在低濃度時(shí),促進(jìn)甘草酸含量的增加,但對(duì)甘草苷的積累呈抑制狀態(tài)。由此可表明,烏拉爾甘草的次生代謝產(chǎn)物可由愈傷組織培養(yǎng)體系的建立和擴(kuò)大培養(yǎng)完成快速大量的積累。本試驗(yàn)考察了多種脅迫作用對(duì)烏拉爾甘草種子幼苗的影響,得知各脅迫下的烏拉爾甘草種子及幼苗具有一定的抗鹽堿性和抗旱性。同時(shí)也利用了響應(yīng)面法探討了最佳誘導(dǎo)烏拉爾甘草愈傷組織的激素配比。在此基礎(chǔ)上添加不同誘導(dǎo)子,提高了次生代謝產(chǎn)物的積累。為今后規(guī)范化的人工栽培技術(shù)提供可靠依據(jù),也為豐富烏拉爾甘草組織培養(yǎng)技術(shù)增添新理論依據(jù)。
【學(xué)位單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：S567.71
【部分圖文】：

圖 4-1 不同激素種類(lèi)與愈傷組織誘導(dǎo)系數(shù)的響應(yīng)面分析圖（下胚軸）Fig.4-1 Response surface analysis of different hormone types and callus induction rate（hypoco4.5.2 幼根誘導(dǎo)結(jié)果根據(jù)表 4-2 實(shí)驗(yàn)組結(jié)果，對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，其回歸方程的顯著性檢驗(yàn)及方見(jiàn)表 4-4。表 4-4 為二次模型中回歸系數(shù)的顯著性檢驗(yàn)，表明 2，4-D 和 KT 對(duì)愈傷組織誘性效應(yīng)顯著（P<0.05），因素 B2、C2對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)系數(shù)的曲面效應(yīng)顯著，因素 A傷組織誘導(dǎo)系數(shù)的交互影響顯著，AB、AC 、BC、A2對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)系數(shù)交互影著。對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行多次擬合回歸，以誘導(dǎo)系數(shù)（Y）為因變量，2，4-D(A)、6-BKT(C)為自變量建立回歸方程模型為：Y=+0.6250+2.25A+6.75B-1.00C-0.25AB-1.75AC+0.25BC-0.625A2-2.125B2+1.8750C2模型的回歸 F 值為 7.01，P<0.05，表明該回歸顯著，模型對(duì)試驗(yàn)實(shí)際情況擬合失擬項(xiàng)不顯著（P>0.05），相關(guān)系數(shù) R2=1.0000，校正決定系數(shù) R2adj=0.7716,表明該實(shí)際的試驗(yàn)擬合程度良好，誤差小，模型選擇合適，可以用該模型對(duì)響應(yīng)值進(jìn)行分測(cè)來(lái)確定最佳誘導(dǎo)愈傷組織的激素組合。

圖 4-2 不同激素種類(lèi)與愈傷組織誘導(dǎo)系數(shù)的響應(yīng)面分析圖（幼根）Fig.4-2 Response surface analysis of different hormone types and callus induction rate（radicle）4.6 小結(jié)利用響應(yīng)面法對(duì) 6-BA、2，4-D、KT 三種激素進(jìn)行優(yōu)化，獲得以下胚軸為外植體的導(dǎo)愈傷組織的激素濃度為 6-BA 0.63 mg/L + 2,4-D 1.75 mg/L + KT 2.00 mg/L，以幼根為植體的激素濃度為 6-BA0.22 mg/L +2,4-D 1.63mg/L+KT 1.98mg/L。預(yù)測(cè)烏拉爾甘草愈傷織誘導(dǎo)系數(shù)分別為 11.87、11.79，經(jīng)驗(yàn)證，實(shí)際烏拉爾誘導(dǎo)系數(shù)為 11，與預(yù)測(cè)值相差 00.79，驗(yàn)證了預(yù)測(cè)結(jié)果的正確性，說(shuō)明響應(yīng)面分析法得到的激素濃度真實(shí)可靠。

樣品在 24h 之內(nèi)穩(wěn)定性良好。6.4.8 加樣回收率試驗(yàn)精密稱(chēng)取同一烏拉爾甘草愈傷組織粉末樣品 0.2g，共 5 份，分別加入混合對(duì)照品溶液1、2、3、4、5mL，按照“6.4.1”方法制備待測(cè)樣品溶液，按“6.4.3”色譜條件測(cè)定峰面積，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果甘草苷、甘草酸加樣回收率分別為 97.96%、98.24%，RSD 為 2.21%、2.57%。6.4.9 樣品含量測(cè)定取添加不同誘導(dǎo)子培養(yǎng)的烏拉爾甘草愈傷組織粉末樣品，按照“6.4.1”制備待測(cè)樣品溶液，按“6.4.3”色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，記錄峰面積，測(cè)定結(jié)果見(jiàn) 6.5。6.5 結(jié)果與分析
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9 賈琦,王邠,舒永華,張如意,高從元,喬梁,龐吉海;烏拉爾甘草三萜——甘烏內(nèi)酯的化學(xué)結(jié)構(gòu)[J];藥學(xué)學(xué)報(bào);1989年05期

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本文編號(hào)：2869997