轉TsVP基因棉花磷營養(yǎng)特征的研究
發(fā)布時間：2020-12-02 22:33
土壤中存在各種金屬離子如Ca2+、A13+、Fe2+,它們可與磷酸根離子形成難溶性磷酸鹽,不能直接被棉花吸收利用,土壤中有效磷的缺乏已成為影響棉花產量增加的重要因素。本工作所用TsVP基因為實驗室從鹽芥（Thellungiella salsugineo）中克隆,Ts VP基因編碼的蛋白是液泡氫離子焦磷酸酶（Vacuolar H+-PPase）,其可以通過水解胞內代謝過程產生的PPi將H+泵入植物液泡里面,從而起到維持液泡和細胞間H+梯度的作用。以轉Ts VP基因棉花T8-3、T18-3、T18-8為材料,利用沙培、水培、土培的方法,研究了轉TsVP棉花與魯棉研21號對照在低磷脅迫下的磷營養(yǎng)特征,評價轉Ts VP棉花在耐低磷育種中的應用潛質。在沙培實驗中,轉7sVP基因棉花T8-3、T18-3、T18-8及對照魯棉研21號分別播種在足磷（123.88 mg/kg）、低磷（12.38 mg/kg）和 A1-P（AIP04）、Ca-P（Ca3（P04）2）、Fe-P（FePO4 4H20）五種不同磷處理的沙子中。足磷處理為每天澆灌一次完全霍格蘭營養(yǎng)液,低磷及其他磷源處理澆灌去除磷元素的霍格蘭...
【文章來源】：山東大學山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
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【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
圖２．１植物表達載體｜ｉＣＡＭＢｌＡＩ３００－７：ｖ〖７Ｗ．ｓ？的Ｔ－ＤＮＡ區(qū)圖譜??
３．１．１轉尸基因棉花的ＰＣＲ分析??野生型對照植株未檢測出基因，轉基因棉花檢測出乃丨／／５基因擴增條??帶（６５４ｂｐ）（圖３－１Ａ）。野生型對照植株未檢測出Ａ基因，轉基因棉花檢測出此??基因擴增條帶（ＵＯＯｂｐ）（圖３－１Ｂ）。結果表明０的基因乃仲和選擇標記基因此轉??入到棉花基因組。??＼?Ｍ?Ｐ?ＷＴ?１２?３?４?５??ｉｎｏｏｉｒ??ｇ?Ｍ?Ｐ?ＷＴ?１?２?３?４?５??：〇〇ｎｂ�。�??ｌＯＯＯｂｐ??％?＾?ｍ??２５０ｂｐ?Ｉ?１１１??圖３－１轉７：ｖＫＰ棉花的ＰＣＲ檢測電泳圖??Ａ目的基因７ＳＦＰ?ＰＣＲ的電泳圖；Ｂ選擇標記基因ａｆｃ?ＰＣＲ的電泳圖；Ｍ：?ＤＬ２０００?ＤＮＡ?ｍａｒｋｅｒ：??Ｐ：質粒ＤＮＡ；?ＷＴ：野生型對照（Ｌ２１）；卜５：轉７ＳＦＰ基因棉花。??３．２轉基因棉花難溶性磷活化能力分析??３．２．１不同磷源供給下植株的生物量和根冠比??在ＳＰ條件卜，野生型冠部生物量為３．４２ｇ，轉基因株系Ｔ１８－３、Ｔ８－３、Ｔ１８－８??冠部生物量分別為３．９２ｇ、４．３２ｇ、４．１４ｇ，與野生型相比分別增加了?１４．６１％、２６．３丨％、??２１．０５％；野生型根部生物量為０．９２ｇ，轉基因株系Ｔ１８－３、Ｔ８－３、Ｔ１８－８根部生物??量分別為丨．３６ｇ、１．４６ｇ、１．４３ｇ，與野生型相比分別增加了?４７．８２％、５８．６９％、５５．４３％。??２３??
Ａ；ｅｉ部磷含Ｍ：?Ｂ根部磷含鼠；Ｃ植株磷含量；Ｌ２Ｉ為野生型對照；ＴＩ８－３、Ｔ８－３、Ｔ１８－８為??Ｋ萬丨７＞坫閃棉花株系：實驗測定數據為五次生物學重復的平均值±標準差，“＊”表示同？處??抑策件卜轉則＊丨棉花Ｕ野生型相比檢驗差異顯著（Ｐ?＜?０．０５）；?ＤＷ：?ｄｒｙｗｅｉｇｈｔ干重；ＳＰ：??ｓｕｆｆｉｃｉｅｎｔ?ｐｈｏｓｐｈａｔｅ（１０００ｆｉｍｏｌ／ＫＨ２Ｐ〇４）足憐：ＬＰ：?ｌｏｗ?ｐｈｏｓｐｈａｔｅ（５ｆｉｍｏｌ／ＫＨ２Ｐ〇４）低隣；Ｃａ－Ｐ：??難溶性鈣磷；Ａｌ－Ｐ：難溶性鋁磷；Ｆｅ－Ｐ：難溶性鐵磷。??在ＳＰ條件下，野生型植株磷含量為Ｉ２６．４２ｍｇ，轉基因株系Ｔ１８－３、Ｔ８－３、??ＴＩ８－８植株磷含量分別為丨５４．１２、１６９．５３和１７０．１７ｍｇ，與野生型相比分別增加了??２１．９１％、３４．１０％、３４．６０％。在ＬＰ條件下，野生型植株磷含量為Ｉ２．８４ｍｇ，轉基??因株系Ｔ１８－３、Ｔ８－３、Ｔ１８－８植株磷含量分別為２２．１８、１８．１８和１８．０ｌｍｇ，轉基因??植株磷含量與野生型相比分別增加了?７２．７４％、４１．６６％、４０．２６°／。。在〇３－卩條件卜＇??野生型植株磷含量為２４．８７ｍｇ，轉基因株系Ｔ１８－３、Ｔ８－３、Ｔ１８－８植株磷含量為??５０．０９、５５．１５?和?６４．４２ｍｇ，與野生型相比增加了?１０１．４０％？１５９．０２％。在?ＡＩ－Ｐ?條??件Ｆ，野生型植株磷含量為２７．１３ｍｇ，轉基因株系Ｔ１８－３、Ｔ８－３、Ｔ１８－８植株磷含??
【參考文獻】：
期刊論文
[1]紅麻液泡膜質子泵H+-PPase（Hcvp1）基因的克隆、序列分析和表達[J]. 李輝,李德芳,陳安國,唐慧娟,李建軍,黃思齊. 華北農學報. 2017(01)
[2]剛毛檉柳液泡膜H+-PPase基因的克隆與脅迫下的表達分析[J]. 張春蕊,賈園園,王艷敏,王玉成,楊傳平,王超. 西北植物學報. 2016(05)
[3]不同油松種源光合和熒光參數對水分脅迫的響應特征[J]. 王琰,陳建文,狄曉艷. 生態(tài)學報. 2011(23)
[4]陸地棉耐鹽相關基因(GhVP)的克隆及分析[J]. 宋麗艷,葉武威,趙云雷,王俊娟,樊保香,王德龍. 棉花學報. 2010(03)
[5]液相色譜-串聯(lián)質譜分析鹽脅迫下植物激素的含量變化[J]. 盧巧梅,張?zhí)m,陳天文,盧明華,陳國南. 中國科學(B輯:化學). 2009(08)
[6]缺磷脅迫對溫州蜜柑葉片光合作用的影響[J]. 陳屏昭,陳順方,劉忠榮,周云,樊欽平. 云南農業(yè)大學學報. 2003(02)
博士論文
[1]轉betA和TsVP基因提高棉花耐鹽、抗旱性的研究[D]. 呂素蓮.山東大學 2007
本文編號：2895664
【文章來源】：山東大學山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
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【學位級別】：碩士
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圖２．１植物表達載體｜ｉＣＡＭＢｌＡＩ３００－７：ｖ〖７Ｗ．ｓ？的Ｔ－ＤＮＡ區(qū)圖譜??
３．１．１轉尸基因棉花的ＰＣＲ分析??野生型對照植株未檢測出基因，轉基因棉花檢測出乃丨／／５基因擴增條??帶（６５４ｂｐ）（圖３－１Ａ）。野生型對照植株未檢測出Ａ基因，轉基因棉花檢測出此??基因擴增條帶（ＵＯＯｂｐ）（圖３－１Ｂ）。結果表明０的基因乃仲和選擇標記基因此轉??入到棉花基因組。??＼?Ｍ?Ｐ?ＷＴ?１２?３?４?５??ｉｎｏｏｉｒ??ｇ?Ｍ?Ｐ?ＷＴ?１?２?３?４?５??：〇〇ｎｂ�。�??ｌＯＯＯｂｐ??％?＾?ｍ??２５０ｂｐ?Ｉ?１１１??圖３－１轉７：ｖＫＰ棉花的ＰＣＲ檢測電泳圖??Ａ目的基因７ＳＦＰ?ＰＣＲ的電泳圖；Ｂ選擇標記基因ａｆｃ?ＰＣＲ的電泳圖；Ｍ：?ＤＬ２０００?ＤＮＡ?ｍａｒｋｅｒ：??Ｐ：質粒ＤＮＡ；?ＷＴ：野生型對照（Ｌ２１）；卜５：轉７ＳＦＰ基因棉花。??３．２轉基因棉花難溶性磷活化能力分析??３．２．１不同磷源供給下植株的生物量和根冠比??在ＳＰ條件卜，野生型冠部生物量為３．４２ｇ，轉基因株系Ｔ１８－３、Ｔ８－３、Ｔ１８－８??冠部生物量分別為３．９２ｇ、４．３２ｇ、４．１４ｇ，與野生型相比分別增加了?１４．６１％、２６．３丨％、??２１．０５％；野生型根部生物量為０．９２ｇ，轉基因株系Ｔ１８－３、Ｔ８－３、Ｔ１８－８根部生物??量分別為丨．３６ｇ、１．４６ｇ、１．４３ｇ，與野生型相比分別增加了?４７．８２％、５８．６９％、５５．４３％。??２３??
Ａ；ｅｉ部磷含Ｍ：?Ｂ根部磷含鼠；Ｃ植株磷含量；Ｌ２Ｉ為野生型對照；ＴＩ８－３、Ｔ８－３、Ｔ１８－８為??Ｋ萬丨７＞坫閃棉花株系：實驗測定數據為五次生物學重復的平均值±標準差，“＊”表示同？處??抑策件卜轉則＊丨棉花Ｕ野生型相比檢驗差異顯著（Ｐ?＜?０．０５）；?ＤＷ：?ｄｒｙｗｅｉｇｈｔ干重；ＳＰ：??ｓｕｆｆｉｃｉｅｎｔ?ｐｈｏｓｐｈａｔｅ（１０００ｆｉｍｏｌ／ＫＨ２Ｐ〇４）足憐：ＬＰ：?ｌｏｗ?ｐｈｏｓｐｈａｔｅ（５ｆｉｍｏｌ／ＫＨ２Ｐ〇４）低隣；Ｃａ－Ｐ：??難溶性鈣磷；Ａｌ－Ｐ：難溶性鋁磷；Ｆｅ－Ｐ：難溶性鐵磷。??在ＳＰ條件下，野生型植株磷含量為Ｉ２６．４２ｍｇ，轉基因株系Ｔ１８－３、Ｔ８－３、??ＴＩ８－８植株磷含量分別為丨５４．１２、１６９．５３和１７０．１７ｍｇ，與野生型相比分別增加了??２１．９１％、３４．１０％、３４．６０％。在ＬＰ條件下，野生型植株磷含量為Ｉ２．８４ｍｇ，轉基??因株系Ｔ１８－３、Ｔ８－３、Ｔ１８－８植株磷含量分別為２２．１８、１８．１８和１８．０ｌｍｇ，轉基因??植株磷含量與野生型相比分別增加了?７２．７４％、４１．６６％、４０．２６°／。。在〇３－卩條件卜＇??野生型植株磷含量為２４．８７ｍｇ，轉基因株系Ｔ１８－３、Ｔ８－３、Ｔ１８－８植株磷含量為??５０．０９、５５．１５?和?６４．４２ｍｇ，與野生型相比增加了?１０１．４０％？１５９．０２％。在?ＡＩ－Ｐ?條??件Ｆ，野生型植株磷含量為２７．１３ｍｇ，轉基因株系Ｔ１８－３、Ｔ８－３、Ｔ１８－８植株磷含??
【參考文獻】：
期刊論文
[1]紅麻液泡膜質子泵H+-PPase（Hcvp1）基因的克隆、序列分析和表達[J]. 李輝,李德芳,陳安國,唐慧娟,李建軍,黃思齊. 華北農學報. 2017(01)
[2]剛毛檉柳液泡膜H+-PPase基因的克隆與脅迫下的表達分析[J]. 張春蕊,賈園園,王艷敏,王玉成,楊傳平,王超. 西北植物學報. 2016(05)
[3]不同油松種源光合和熒光參數對水分脅迫的響應特征[J]. 王琰,陳建文,狄曉艷. 生態(tài)學報. 2011(23)
[4]陸地棉耐鹽相關基因(GhVP)的克隆及分析[J]. 宋麗艷,葉武威,趙云雷,王俊娟,樊保香,王德龍. 棉花學報. 2010(03)
[5]液相色譜-串聯(lián)質譜分析鹽脅迫下植物激素的含量變化[J]. 盧巧梅,張?zhí)m,陳天文,盧明華,陳國南. 中國科學(B輯:化學). 2009(08)
[6]缺磷脅迫對溫州蜜柑葉片光合作用的影響[J]. 陳屏昭,陳順方,劉忠榮,周云,樊欽平. 云南農業(yè)大學學報. 2003(02)
博士論文
[1]轉betA和TsVP基因提高棉花耐鹽、抗旱性的研究[D]. 呂素蓮.山東大學 2007
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