三角帆蚌3個(gè)貝殼基質(zhì)蛋白基因的克隆及功能分析
發(fā)布時(shí)間:2020-12-07 00:39
三角帆蚌(Hypriosis cumingii)是我國(guó)特有的淡水育珠蚌,所產(chǎn)淡水珍珠產(chǎn)量約占總產(chǎn)量的80%以上。珍珠和貝殼是由碳酸鈣組成,經(jīng)生物礦化過(guò)程形成。基質(zhì)蛋白在生物礦化產(chǎn)物的形成中起了十分重要的作用。對(duì)基質(zhì)蛋白的鑒定和研究可以幫助我們更好地了解貝殼和珍珠的形成機(jī)理。本文從三角帆蚌外套膜中克隆和鑒定了3個(gè)新的基質(zhì)蛋白基因,分別是silkmaxin和hic6,hic7,分析了這3個(gè)基因?qū)φ渲榈男纬山Y(jié)構(gòu)和功能上所起的作用。從三角帆蚌外套膜中克隆得到新的基質(zhì)蛋白基因silkmaxin,hic7和hic6,silkaxin基因的cDNA序列,全長(zhǎng)1151bp,ORF為885bp,共編碼294個(gè)氨基酸包含前面15個(gè)信號(hào)肽,消除信號(hào)肽以后的理論分子量和等電點(diǎn)分別為28.39kDa,9.52,說(shuō)明此蛋白為一堿性蛋白。Hic7基因的cDNA序列全長(zhǎng)為459bp,ORF 240bp,加上前19個(gè)信號(hào)肽共編碼了79個(gè)氨基酸,消除信號(hào)肽的理論等電點(diǎn)為6.12,理論分子量為6.80kDa。Hic6基因的cDNA全長(zhǎng)為449bp,其中ORF為219bp,共編碼了73個(gè)氨基酸包含前20個(gè)信號(hào)肽,消除信號(hào)肽后...
【文章來(lái)源】:上海海洋大學(xué)上海市
【文章頁(yè)數(shù)】:75 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【文章目錄】:
摘要
Abstract
引言
第一章 貝類(lèi)生物礦化的研究進(jìn)展
1.1 生物礦化概述
1.1.1 生物礦化
1.1.2 生物礦化的分類(lèi)
1.1.3 研究生物礦化的意義
1.2 貝類(lèi)的生物礦化
1.2.1 貝殼結(jié)構(gòu)
1.2.2 貝殼角質(zhì)層形成
1.2.3 貝殼棱柱層形成
1.2.4 貝殼珍珠層的形成和生長(zhǎng)機(jī)制
1.2.5 貝殼的有機(jī)組成
1.2.6 貝殼基質(zhì)蛋白的研究
1.3 分子生物學(xué)育種
1.3.1 分子育種
1.3.2 有關(guān)珍珠顏色基因的研究
1.4 總結(jié)與展望
第二章 三角帆蚌類(lèi)絲狀基質(zhì)蛋白silkmaxin基因的克隆及其在生物礦化中的作用
2.1 材料和方法
2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
2.2 結(jié)果分析
2.2.1 cDNA克隆及序列分析
2.2.2 蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
2.2.3 組織熒光定量分析
2.2.4 silkmaxin 的原位雜交檢測(cè)
2.2.5 silkmaxin 在珍珠囊形成過(guò)程中的表達(dá)
2.2.6 RNA干擾實(shí)驗(yàn)及熒光定量分析
2.3 討論
第三章 參與珍珠形成的三角帆蚌富含半胱氨酸的貝殼基質(zhì)蛋白hic7 基因
3.1 材料和方法
3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
3.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
3.2 結(jié)果
3.2.1 cDNA克隆及序列分析
3.2.2 蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
3.2.3 組織熒光定量分析
3.2.4 原位雜交
3.2.5 在珍珠囊形成過(guò)程中的表達(dá)
3.2.6 RNA干擾
3.3 討論
第四章 三角帆蚌貝殼基質(zhì)蛋白hic6基因的克隆和功能鑒定以及對(duì)珍珠層顏色性狀的關(guān)聯(lián)性分析
4.1 材料和方法
4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
4.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
4.2 結(jié)果分析
4.2.1 基因克隆
4.2.2 蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
4.2.3 組織熒光定量分析
4.2.4 原位雜交
4.2.5 在珍珠囊形成過(guò)程中基因hic6 的表達(dá)
4.2.6 RNA干擾試驗(yàn)
4.2.7 SNP位點(diǎn)篩選
4.2.8 多態(tài)性分析
4.2.9 三角帆蚌hic6 SNPs位點(diǎn)與內(nèi)殼色性狀關(guān)聯(lián)分析
4.2.10 三角帆蚌hic6基因的SNP位點(diǎn)單倍型分析
4.3 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
本文編號(hào):2902294
【文章來(lái)源】:上海海洋大學(xué)上海市
【文章頁(yè)數(shù)】:75 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
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摘要
Abstract
引言
第一章 貝類(lèi)生物礦化的研究進(jìn)展
1.1 生物礦化概述
1.1.1 生物礦化
1.1.2 生物礦化的分類(lèi)
1.1.3 研究生物礦化的意義
1.2 貝類(lèi)的生物礦化
1.2.1 貝殼結(jié)構(gòu)
1.2.2 貝殼角質(zhì)層形成
1.2.3 貝殼棱柱層形成
1.2.4 貝殼珍珠層的形成和生長(zhǎng)機(jī)制
1.2.5 貝殼的有機(jī)組成
1.2.6 貝殼基質(zhì)蛋白的研究
1.3 分子生物學(xué)育種
1.3.1 分子育種
1.3.2 有關(guān)珍珠顏色基因的研究
1.4 總結(jié)與展望
第二章 三角帆蚌類(lèi)絲狀基質(zhì)蛋白silkmaxin基因的克隆及其在生物礦化中的作用
2.1 材料和方法
2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
2.2 結(jié)果分析
2.2.1 cDNA克隆及序列分析
2.2.2 蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
2.2.3 組織熒光定量分析
2.2.4 silkmaxin 的原位雜交檢測(cè)
2.2.5 silkmaxin 在珍珠囊形成過(guò)程中的表達(dá)
2.2.6 RNA干擾實(shí)驗(yàn)及熒光定量分析
2.3 討論
第三章 參與珍珠形成的三角帆蚌富含半胱氨酸的貝殼基質(zhì)蛋白hic7 基因
3.1 材料和方法
3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
3.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
3.2 結(jié)果
3.2.1 cDNA克隆及序列分析
3.2.2 蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
3.2.3 組織熒光定量分析
3.2.4 原位雜交
3.2.5 在珍珠囊形成過(guò)程中的表達(dá)
3.2.6 RNA干擾
3.3 討論
第四章 三角帆蚌貝殼基質(zhì)蛋白hic6基因的克隆和功能鑒定以及對(duì)珍珠層顏色性狀的關(guān)聯(lián)性分析
4.1 材料和方法
4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
4.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
4.2 結(jié)果分析
4.2.1 基因克隆
4.2.2 蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
4.2.3 組織熒光定量分析
4.2.4 原位雜交
4.2.5 在珍珠囊形成過(guò)程中基因hic6 的表達(dá)
4.2.6 RNA干擾試驗(yàn)
4.2.7 SNP位點(diǎn)篩選
4.2.8 多態(tài)性分析
4.2.9 三角帆蚌hic6 SNPs位點(diǎn)與內(nèi)殼色性狀關(guān)聯(lián)分析
4.2.10 三角帆蚌hic6基因的SNP位點(diǎn)單倍型分析
4.3 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
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本文編號(hào):2902294
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