哲羅鮭胰島素樣生長因子Ⅱ原核表達、多克隆抗體的制備及組織表達分析
發(fā)布時間：2020-12-09 01:27
在魚類胚胎發(fā)育過程中,胰島素樣生長因子-II（insulin-like growth factors-II,IGF-II）起著關鍵的作用。哲羅鮭（Hucho taimen）是鮭科魚類中最大的個體,其細嫩的肉質、鮮美的味道具有很高的食用與經(jīng)濟價值,目前國內(nèi)還沒有關于哲羅鮭的IGF-II基因的研究。本研究根據(jù)Gen Bank里收錄的鮭鱒魚IGF-II基因序列設計引物P1、P2,以哲羅鮭肝臟RNA提取物為模板,利用RT-PCR方法擴增出哲羅鮭IGF-II基因開放閱讀框。首先本研究利用生物學軟件對成功克隆出的哲羅鮭IGF-II基因開放閱讀框進行了生物信息學分析,其中利用Meg Align軟件中默認的Clustal W模式對IGF-II核苷酸序列與氨基酸序列進行同源性分析。利用DNAMAN翻譯獲得IGF-II氨基酸序列,利用Protean軟件進行IGF-II蛋白分子量及等電點進行了預測,采用Clustalx 1.83軟件和MEGA 5.0軟件構建了IGF-II核酸序列系統(tǒng)進化樹。其次,本研究根據(jù)哲羅魚IGF-II基因開放閱讀框序列,利用Primer軟件設計了一對用于做熒光實時定量PCR的引物IG...
【文章來源】：上海海洋大學上海市
【文章頁數(shù)】：67 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
IGF-II基因擴增產(chǎn)物電泳圖
4-2 IGF-II 重組質粒酶切鑒定 雙酶切后的 IGF-II 重組質粒；II 重組質粒；M. DL2000 分子量標準dentification of IGF-II by dual-digestionigestion of recombinant plasmid IGF-II;nt plasmid IGF-II; M. DL2000 DNAmark信息學分析析序結果，經(jīng) Blast 與 GenBank 里MAN 分析結果顯示，哲羅鮭 IGF-；利用 Protean 軟件預測確定 IGF 9.92。與鱖魚、虹鱒的 IGF-II 結構
圖 4-3 哲羅鮭 IGF-II ORF 的 cDNA 和氨基酸序列Fig.4-3 The cDNAand deduced amino acid sequence in Hucho taimen IGF-II ORF注: 大寫字母對應下面部分為氨基酸序列，大寫字母部分為編碼區(qū)；黑字淺灰色底部分信號肽；黑字深灰色底部分表示成熟肽；白字黑色底部分表示 E 肽；*表示終止密碼子。Note: The opposites of the capital letters show the amino acids and capital letters repreding regions; Black letters and light gray background indicate the signal peptide; Black lettersrk gray background indicate the mature peptide; White letters and black background indicate tptide; * indicates the stop codon..2.2 哲羅鮭 IGF-II 同源性的分析應用 MegAlign 軟件中默認的 Clustal W 模式，將哲羅鮭 IGF-II 基因 ORF 核序列及其編碼的氨基酸序列與其他 17 個物種進行同源性分析，結果發(fā)現(xiàn)，哲的 IGF-II 與大西洋鮭的核苷酸及氨基酸同源性分別為 98.6%和 98.4%。而與金、牙鲆、鱖魚、鱸魚、點藍子魚、斑馬宮麗魚的 IGF-II 的相似度在 88%-85
本文編號：2906014
【文章來源】：上海海洋大學上海市
【文章頁數(shù)】：67 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
IGF-II基因擴增產(chǎn)物電泳圖
4-2 IGF-II 重組質粒酶切鑒定 雙酶切后的 IGF-II 重組質粒；II 重組質粒；M. DL2000 分子量標準dentification of IGF-II by dual-digestionigestion of recombinant plasmid IGF-II;nt plasmid IGF-II; M. DL2000 DNAmark信息學分析析序結果，經(jīng) Blast 與 GenBank 里MAN 分析結果顯示，哲羅鮭 IGF-；利用 Protean 軟件預測確定 IGF 9.92。與鱖魚、虹鱒的 IGF-II 結構
圖 4-3 哲羅鮭 IGF-II ORF 的 cDNA 和氨基酸序列Fig.4-3 The cDNAand deduced amino acid sequence in Hucho taimen IGF-II ORF注: 大寫字母對應下面部分為氨基酸序列，大寫字母部分為編碼區(qū)；黑字淺灰色底部分信號肽；黑字深灰色底部分表示成熟肽；白字黑色底部分表示 E 肽；*表示終止密碼子。Note: The opposites of the capital letters show the amino acids and capital letters repreding regions; Black letters and light gray background indicate the signal peptide; Black lettersrk gray background indicate the mature peptide; White letters and black background indicate tptide; * indicates the stop codon..2.2 哲羅鮭 IGF-II 同源性的分析應用 MegAlign 軟件中默認的 Clustal W 模式，將哲羅鮭 IGF-II 基因 ORF 核序列及其編碼的氨基酸序列與其他 17 個物種進行同源性分析，結果發(fā)現(xiàn)，哲的 IGF-II 與大西洋鮭的核苷酸及氨基酸同源性分別為 98.6%和 98.4%。而與金、牙鲆、鱖魚、鱸魚、點藍子魚、斑馬宮麗魚的 IGF-II 的相似度在 88%-85
本文編號：2906014
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