發(fā)布時間：2024-06-29 20:21

　　免疫系統(tǒng)包括先天免疫和適應性免疫,無脊椎動物只有先天免疫。雖然在屬于無脊椎動物的模式生物果蠅中,有關先天免疫研究的比較清楚,但是在海洋無脊椎動物中的研究有待投入更多的精力。本文以海洋無脊椎動物,日本囊對蝦為研究對象,對其模式識別和免疫相關信號途徑進行了研究。發(fā)現(xiàn)L型凝集素可能做為一種調(diào)理素輔助血細胞進行吞噬作用；Toll和IMD信號通路參與抗革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的免疫應答,并且發(fā)現(xiàn)同一個抗菌肽可以受這兩條信號通路的調(diào)控。 (1)日本囊對蝦的一種L型凝集素促進血細胞對病原菌的吞噬作用能力 L型凝集素(L-Type Lectin, LTLs)含有糖類識別結(jié)構(gòu)域,與來源于豆科植物種子的凝集素在結(jié)構(gòu)上的折疊方式相似。這是一類I型跨膜蛋白,在動物中LTLs主要參與了蛋白的分泌過程,與糖蛋白的篩選、轉(zhuǎn)運和靶向運輸有關。最近有研究表明LTLs可能參與了脊椎動物的免疫應答,但在無脊椎動物先天免疫中的功能尚未見報道。我們從日本囊對蝦(Marsupenaeus japonicus)中發(fā)現(xiàn)了一種L型凝集素并命名為MjLTL1,它含有一個信號肽、一個L型凝集素結(jié)構(gòu)域和一個跨膜結(jié)構(gòu)域。在鰻弧菌感染的對蝦血...

【文章頁數(shù)】：124 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
目錄
摘要
Abstract
符號說明
第一章 綜述 無脊椎動物的先天免疫
    一、無脊椎動物的先天免疫系統(tǒng)
        1. 物理防御
        2. 細胞免疫
        3. 體液免疫
    二、無脊椎動物的免疫相關信號通路
        1. Toll信號途徑
        2. IMD信號途徑
        3. JAK/STAT信號途徑
        4. JNK信號途徑
        5. 信號通路之間存在協(xié)作
    三、L型凝集素
        1. L型凝集素的發(fā)現(xiàn)
        2. L型凝集素的結(jié)構(gòu)
        3. L型凝集素的功能
    四、本研究的目的意義和技術路線
第二章 日本對蝦L型凝集素提高血細胞對病原菌的吞噬能力
    一、前言
    二、材料與方法
        1. 試劑、儀器、載體和菌株
        2. 對蝦的免疫刺激和總RNA的提取
        3. MjLTL1 and MjADAM的cDNA克隆
        4. MjLTL1和MjADAM系統(tǒng)發(fā)育分析
        5. 實時定量PCR(qRT--PCR)分析MjLTL1和MjADAM的組織分布
        6. 蝦體感染弧菌后的MjLTL1和MjADAM時空表達模式
        7. rMjLTL1和PET30A在大腸桿菌中重組表達與純化
        8. MjLTL1多克隆抗體的制備和western blot檢測
        9. 細菌凝集實驗
        10. 細菌結(jié)合實驗
        11. 糖結(jié)合實驗
        12. 細菌清除實驗
        13. RNA干擾(RNAi)實驗
        14 鰻弧菌的熒光標記和吞噬實驗
    三、結(jié)果
        1. MjLTL1全長cDNA克隆和MjLTL1、MjADAM進化樹的構(gòu)建
        2. MjLTL1和MjADAM在弧菌感染的蝦體中表達上調(diào)
        3. 重組表達的MjLTL1具有凝集細菌的能力
        4. rMjLTL1能夠結(jié)合不同的細菌和多種多糖
        5. MjLTL1能夠促進弧菌的清除
        6. 注射rMjLTL1提高了血細胞對弧菌的吞噬效率,干擾掉MjLTL1或者MjADAM使對蝦血細胞吞噬細菌的效率降低
    四、討論
第三章 Toll和IMD信號通路調(diào)控抗菌肽表達的機制研究
    一、前言
    二、材料與方法
        1. 試劑、儀器、載體和菌株
        2. 細菌的感染和總RNA的提取
        3. MjDorsal、MjRelish、MjMyD88和MjIMD進化樹的構(gòu)建和同源比對
        4. MjDorsal、MjRelish、MjMyD88和MjIMD的組織分布和表達模式
        5. 對蝦受S.aureus和V. anguillarum感染后抗菌肽的表達模式
        6. RNA干擾實驗
    三、結(jié)果與分析
        1. 序列信息分析
        2. MjDorsal、MjRelish、MjMyD88和MjIMD的組織分布和表達模式
        3. 抗菌肽的在對蝦感染V. anguillarum和S.aureus后的表達模式
        4. RNA干擾實驗
    四、討論
創(chuàng)新點總結(jié)
    1. L型凝集素
    2. Toll和IMD信號通路
參考文獻
致謝
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本文編號：3997872