發(fā)布時間：2024-07-02 03:07

　　金針菇[Flammulina velutipes (Fr.) Sing]是我國最先進行工廠化栽培的蕈菌,從始至今不乏對其栽培技術(shù)和栽培模式的研究,對其栽培過程中的生理機制以及深入的研究還有待進一步的探索。菌絲達到生理菌齡后,經(jīng)過定期的低溫刺激,才能進行子實體的分化和生長,對其低溫刺激的分子機制研究還處于初級階段,導致深層次的研究和生產(chǎn)技術(shù)革新基礎理論滯后。鑒于金針菇不同生長發(fā)育階段的生物學特性及栽培過程中對低溫的敏感性,金針菇是可應用于大型食用真菌低溫脅迫下分子水平研究的理想材料。本研究將固體PDA加富培養(yǎng)基置于90mm培養(yǎng)皿中,經(jīng)過短期和長期低溫刺激菌絲后收集菌絲樣品,運用iTRAQ結(jié)合二維液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù),對金針菇對照菌絲、短期低溫刺激菌絲和長期低溫刺激菌絲的蛋白質(zhì)樣品進行分離、鑒定及定量分析;最后采用RT-PCR對全部差異蛋白質(zhì)基因的轉(zhuǎn)錄水平進行了分析,對基于iTRAQ結(jié)合2DLC-MS/MS鑒定出的蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)的準確性進行了驗證。主要研究結(jié)果如下：1.通過出菇實驗、細胞質(zhì)純化和細胞核純化得到了可用于實驗的優(yōu)良菌株。2.采用甲醇-醋酸銨法對菌絲樣品進行蛋白質(zhì)提取和SDS-PAG...

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１金針猜單核菌株和核配菌株制備??

的四株極性不同的初生菌絲兩兩雜交，鏡檢鎖狀聯(lián)合，對初步獲得的四級性初生菌株進??行驗證。獲得具有來源于親本不同極性的兩個細胞核，得到純化了細胞核的優(yōu)良菌株。??具體試驗流程如下圖２－１所示。??－１０－??

圖３－１不同菌絲蛋白樣品的電泳圖??注：Ｍ為ＰｒｏｔｅｉｎＭａｒｋｅｒ?（１４－１００?ｋＤａ）；泳道１為樣品１，泳道２為樣品２，泳道３為樣品３??

３．１電泳檢測結(jié)果??電泳檢測采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ進行圖示化，總蛋白提化結(jié)果經(jīng)成像系統(tǒng)成像后結(jié)果如??圖３－１。結(jié)果表明Ｈ個樣品的蛋白質(zhì)條帶較完整，條帶清晰且分離效果較好，初步判定??蛋白質(zhì)樣品存在差異。??Ｍ?Ｉ?：?３??－：．ｋＤａ＿??＇＇酒Ｅ??５ＤｋＤａ＊＿?ｊｆｅＳ....

圖３－３金針窺３個菌絲樣品蛋白質(zhì)組的表達量分布范圍分祈??．－

Ｎｏｔｅ：?Ａ?ｉｎｄｉｃａｌｉｅｄ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｌ；?Ｂｉｎｄｉｃａ化ｄ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ；?Ｃ?ｉｎｄｉｃａ１：ｅｄ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ??３．３．３鑒定蛋白質(zhì)的表達量特異性分析??表達量箱型圖顯示（圖３－４）?：３個樣品間的基線變化較大，處于核也區(qū)域的蛋白....

圖３－５金針茹不同菌竺樣品蛋白廢組的的分層聚類圖??；，

Ｆｉｇ．３－５?Ｈｉｅｒａｒｃｈｙ?ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｐｒｏｔｅｏｍｅｓ?ｉｎ?Ｆｌａｍｍｕｌｉｎａ?ｖｅｌｕｔｉｐｅｓ??Ｎｏｔｅ：?Ｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ?ａｎｄ?ｄｏｗｎ－巧邑ｕｌａｔｅｄ?ｗｅｒｅ?ｍａｒｋｅｄ?ｉｎ?ｒｅｄ?ａｎｄ?....

本文編號：3999594