芽孢表面展示海藻糖合酶重組枯草芽孢桿菌的構建及應用
發(fā)布時間：2020-12-03 21:05
表面展示是將異源多肽和蛋白質固定在噬菌體、細胞或芽孢表面的一種分子生物學技術,而目前已經完成了枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis的全基因組測序,并且它具有食品安全性,其產生的芽孢也具有極高的安全性,更方便于構建芽孢表面展示系統(tǒng)。海藻糖具有在極端環(huán)境下保護生物大分子生命體特征的生物學功能,目前,已實現(xiàn)海藻糖規(guī)�；a的方法為酶法,包括雙酶法和單酶法。單酶法是在海藻糖合酶（TreS）作用下,直接將麥芽糖異構為海藻糖的方法。該方法過程簡單,易于操作,引起了各國科學家的重視。針對上述內容,本文開展了以下研究工作:（1）選取了11種芽孢衣殼蛋白分別將EGFP展示在B.subtilis WB800n芽孢表面。通過Western Blot及免疫熒光分析,證明已成功將EGFP分別展示在11株重組菌的重組芽孢表面,并得到了不同衣殼蛋白所展示EGFP熒光強度大小的關系為:CotX>CotY>CotF>CotC>CotE>CotG>CotV>CotB>CotM>CotA>CotW。（2）根據(jù)測得的不同芽孢衣殼蛋白所展示綠色熒光強度的大小...
【文章來源】：齊魯工業(yè)大學山東省
【文章頁數(shù)】：91 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
芽孢衣殼蛋白表面展示示意圖
已經進行了許多研究從而了解芽孢形成的形成是通過明確定義的一系列形態(tài)階段來進行，這和電子顯微鏡來進行觀察。在這個過程中涉及了數(shù)上分別由4個DNA 結合蛋白和5個RNA 聚合酶σ因需要合成關鍵的轉錄調節(jié)蛋白 Spo0A 并通過磷酸化過一種或兩種酶就能夠發(fā)生，而是通過磷酸化的復雜質 Spo0F 的磷酸化是通過至少 5 種不同的自動激酶在遞送至 Spo0A 之前轉移至 Spo0B。Spo0F~P 和 Sp化本身必須先被一種尚不明確的信號所激活，這些外部環(huán)境例如細胞密度、營養(yǎng)饑餓和細胞周期等結 在早期母細胞發(fā)育中芽孢的形成起關鍵作用[12]。一旦孢形成過程。Spo0A~P 可以直接激活或抑制超過 12400 種基因，所有這些都是芽孢形成特異性和/或穩(wěn)定，芽孢形成的另一個關鍵正調節(jié)因子，σH是過渡階段）和芽孢形成進入所必需的。
芽孢桿菌的芽孢形態(tài)的芽孢從母細胞釋放后，通常具有球形或橢圓形，平均直徑為 1微鏡下，枯草芽孢桿菌芽孢顯示出三種主要結構：核心，芽孢皮衣殼圍繞皮層組裝，在芽孢對有機溶劑和溶菌酶的抗性中起著重中，涂層表現(xiàn)為一系列的同心層，分為兩個主要層：厚的高電子的電子密度較小的內涂層。在電子顯微鏡下，內涂層顯示出細小輕微斑點。它由多層組成（2 層~5 層之間，通常約 4 層），寬約包圍，寬度約 70~200 nm，斑點比內層顏色更深，外觀更加粗糙兩個主要的涂層外，在電子顯微鏡照片上可以看到內層和皮層之這可能是芽孢衣的一部分，并被認為是內涂層。芽孢衣殼組分主芽孢干重約 10%，占總芽孢蛋白質的 25%[14]。最近，通過釕紅染周圍的另一種結構--糖蛋白層（圖 1.3A）。這種結構與芽孢外殼的，可能代表芽孢表面的初始外芽孢[15]。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]Cloning, Expression and Identification of a New Trehalose Synthase Gene from Thermobifida fusca Genome[J]. Yu-Tuo WEI, Qi-Xia ZHU1, Zhao-Fei LUO1, Fu-Shen LU1, Fa-Zhong CHEN1, Qing-Yan WANG1, Kun HUANG,Jian-Zhong MENG, Rong WANG, and Ri-Bo HUANG*Guangxi Key Laboratory of Subtropical Bioresource Conservation and Utilization, Guangxi University, Nanning 530004, China; 1Sinozyme Biotech Co. Ltd., Nanning 530004, China. Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2004(07)
[2]一種對斑點和條帶信號進行半定量圖像分析的簡便方法[J]. 張成崗,袁守軍,鄧美玉,李林,湯仲明,賀福初. 中國體視學與圖像分析. 2001(03)
本文編號：2896544
【文章來源】：齊魯工業(yè)大學山東省
【文章頁數(shù)】：91 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
芽孢衣殼蛋白表面展示示意圖
已經進行了許多研究從而了解芽孢形成的形成是通過明確定義的一系列形態(tài)階段來進行，這和電子顯微鏡來進行觀察。在這個過程中涉及了數(shù)上分別由4個DNA 結合蛋白和5個RNA 聚合酶σ因需要合成關鍵的轉錄調節(jié)蛋白 Spo0A 并通過磷酸化過一種或兩種酶就能夠發(fā)生，而是通過磷酸化的復雜質 Spo0F 的磷酸化是通過至少 5 種不同的自動激酶在遞送至 Spo0A 之前轉移至 Spo0B。Spo0F~P 和 Sp化本身必須先被一種尚不明確的信號所激活，這些外部環(huán)境例如細胞密度、營養(yǎng)饑餓和細胞周期等結 在早期母細胞發(fā)育中芽孢的形成起關鍵作用[12]。一旦孢形成過程。Spo0A~P 可以直接激活或抑制超過 12400 種基因，所有這些都是芽孢形成特異性和/或穩(wěn)定，芽孢形成的另一個關鍵正調節(jié)因子，σH是過渡階段）和芽孢形成進入所必需的。
芽孢桿菌的芽孢形態(tài)的芽孢從母細胞釋放后，通常具有球形或橢圓形，平均直徑為 1微鏡下，枯草芽孢桿菌芽孢顯示出三種主要結構：核心，芽孢皮衣殼圍繞皮層組裝，在芽孢對有機溶劑和溶菌酶的抗性中起著重中，涂層表現(xiàn)為一系列的同心層，分為兩個主要層：厚的高電子的電子密度較小的內涂層。在電子顯微鏡下，內涂層顯示出細小輕微斑點。它由多層組成（2 層~5 層之間，通常約 4 層），寬約包圍，寬度約 70~200 nm，斑點比內層顏色更深，外觀更加粗糙兩個主要的涂層外，在電子顯微鏡照片上可以看到內層和皮層之這可能是芽孢衣的一部分，并被認為是內涂層。芽孢衣殼組分主芽孢干重約 10%，占總芽孢蛋白質的 25%[14]。最近，通過釕紅染周圍的另一種結構--糖蛋白層（圖 1.3A）。這種結構與芽孢外殼的，可能代表芽孢表面的初始外芽孢[15]。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]Cloning, Expression and Identification of a New Trehalose Synthase Gene from Thermobifida fusca Genome[J]. Yu-Tuo WEI, Qi-Xia ZHU1, Zhao-Fei LUO1, Fu-Shen LU1, Fa-Zhong CHEN1, Qing-Yan WANG1, Kun HUANG,Jian-Zhong MENG, Rong WANG, and Ri-Bo HUANG*Guangxi Key Laboratory of Subtropical Bioresource Conservation and Utilization, Guangxi University, Nanning 530004, China; 1Sinozyme Biotech Co. Ltd., Nanning 530004, China. Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2004(07)
[2]一種對斑點和條帶信號進行半定量圖像分析的簡便方法[J]. 張成崗,袁守軍,鄧美玉,李林,湯仲明,賀福初. 中國體視學與圖像分析. 2001(03)
本文編號：2896544
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