發(fā)布時間：2020-12-05 13:43

　　魚卵作為一種營養(yǎng)豐富、味道鮮美的海鮮產(chǎn)品,深受大家的喜愛,尤其是鱘魚卵所制的魚子醬,價格昂貴,更是被譽為“黑色黃金”。但在國內(nèi)外,有關魚卵引起過敏的報道卻屢見不鮮。研究發(fā)現(xiàn),魚卵是一種潛在的含有過敏原的食物,其主要的過敏原為βP-c糖蛋白。大多數(shù)因魚卵過敏的病例都被歸類為I型過敏癥,由過敏原與IgE特異性結合引起。目前,與其他食物過敏原相比,魚卵中過敏性蛋白的生化特性以及結構方面的信息較少,β’-c糖蛋白的結構信息尚不明確,而糖基化承載了大量的生物學信息。因此,分析魚卵中主要過敏原β’-c糖蛋白的結構非常重要,其可為深入研究魚卵致敏機理提供理論基礎。本課題以俄羅斯鱘魚（Acipenser gueldenstaedti）魚卵為試驗材料,提取、分離、純化鱘魚卵中的β’-c糖蛋白,并對其進行結構表征。主要研究結果如下:1.鱘魚卵β’-c糖蛋白的提取及分離純化:采用氯化鈉鹽溶液提取法制備卵黃蛋白提取物,測定提取物中總蛋白和多糖的含量。再利用硫酸銨分級沉淀法對卵黃蛋白提取物進行初步粗分離,隨后采取熱處理、堿處理及超速離心的方法對卵黃蛋白進一步分離純化,并用PAS染色法鑒定糖蛋白。結果表明:氯化鈉... 

【文章來源】：浙江工商大學浙江省

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 緒論
    1.1 魚卵的研究進展
        1.1.1 魚卵的概況
        1.1.2 魚卵的加工現(xiàn)狀
        1.1.3 鱘魚卵及副產(chǎn)品
        1.1.4 魚卵過敏原的研究狀況
    1.2 魚卵中卵黃蛋白原的研究現(xiàn)狀
        1.2.1 卵黃蛋白原簡介
        1.2.2 魚類卵黃蛋白原的結構特性
        1.2.3 魚類卵黃蛋白原的免疫功能
    1.3 糖蛋白的研究現(xiàn)狀
        1.3.1 糖蛋白簡介
        1.3.2 蛋白質(zhì)糖基化
        1.3.3 糖蛋白的質(zhì)譜研究
        1.3.4 糖蛋白研究所面臨的挑戰(zhàn)
    1.4 本研究的目的和意義
    1.5 本論文的主要研究內(nèi)容
第2章 鱘魚卵β'-c糖蛋白的提取及分離純化
    2.1 引言
    2.2 實驗材料與儀器
        2.2.1 材料與處理
        2.2.2 主要儀器和試劑
    2.3 實驗方法
        2.3.1 卵黃糖蛋白粗提物的制備
        2.3.2 卵黃糖蛋白粗提物的初步分離
        2.3.3 BCA試劑盒測定卵黃糖蛋白蛋白含量
        2.3.4 苯酚硫酸法測定卵黃糖蛋白多糖含量
        2.3.5 SDS-PAGE電泳分析
        2.3.6 熱處理分離純化卵黃糖蛋白
        2.3.7 堿處理分離純化卵黃糖蛋白
        2.3.8 超速離心法進一步純化卵黃糖蛋白
        2.3.9 PAS染色法鑒定糖蛋白
    2.4 結果與分析
        2.4.1 卵黃糖蛋白蛋白含量分析
        2.4.2 卵黃糖蛋白多糖含量分析
        2.4.3 卵黃糖蛋白初步分離結果比較
        2.4.4 熱處理與堿處理分離純化卵黃糖蛋白
        2.4.5 PAS染色法鑒定糖蛋白
        2.4.6 超速離心法進一步純化卵黃糖蛋白
    2.5 本章小結
第3章 鱘魚卵β'-c糖蛋白蛋白部分的結構表征
    3.1 引言
    3.2 實驗材料與儀器
        3.2.1 材料與處理
        3.2.2 主要實驗儀器和試劑
    3.3 實驗方法
        3.3.1 卵黃糖蛋白組分亞基分析
        3.3.2 蛋白質(zhì)膠條內(nèi)酶切
        3.3.3 液相質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS/MS）分析
        3.3.4 蛋白數(shù)據(jù)庫檢索分析
        3.3.5 鱘魚卵卵黃糖蛋白生物信息學分析
        3.3.6 氨基酸序列同源性分析
        3.3.7 圓二色（CD）光譜分析糖蛋白二級結構
    3.4 結果與分析
        3.4.1 卵黃糖蛋白組分亞基分析
        3.4.2 鱘魚卵卵黃糖蛋白鑒定結果分析
        3.4.3 鱘魚卵卵黃糖蛋白生物信息學分析
        3.4.4 鱘魚卵β'-c蛋白同源性分析
        3.4.5 圓二色（CD）光譜分析β,-c糖蛋白的二級結構
    3.5 本章小結
第4章 鱘魚卵β'-c糖蛋白糖肽及糖鏈的結構表征
    4.1 引言
    4.2 實驗材料與儀器
        4.2.1 材料與處理
        4.2.2 主要實驗儀器和試劑
    4.3 實驗方法
        4.3.1 N-型糖苷鍵的鑒定
        4.3.2 O-型糖苷鍵的鑒定
        4.3.3 糖蛋白中糖肽的制備及富集純化
        4.3.4 糖肽中N-糖鏈的釋放及分離純化
        4.3.5 糖肽中N-糖鏈的完全甲基化及分離純化
        4.3.6 ESI（+）多級質(zhì)譜分析N-糖鏈結構
n液質(zhì)聯(lián)用分析糖肽結構 ">        4.3.7 HILIC-MSⁿ液質(zhì)聯(lián)用分析糖肽結構
        4.3.8 糖鏈及糖肽的數(shù)據(jù)分析
    4.4 結果與分析
        4.4.1 N-型糖苷鍵的鑒定結果分析
        4.4.2 O-型糖苷鍵的鑒定結果分析
        4.4.3 鱘魚卵β'-c糖蛋白糖鏈的結構鑒定
        4.4.4 鱘魚卵β'-c糖蛋白糖肽的結構鑒定
    4.5 本章小結
第5章 總結
    5.1 主要研究結論
    5.2 創(chuàng)新點
    5.3 展望
參考文獻
附錄: 中英文縮略詞對照
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]蛋白質(zhì)糖基化修飾的研究進展[J]. 王曉龍,王秀然,盧天成.  基因組學與應用生物學. 2017(10)
[2]浙江南部沿岸產(chǎn)卵場春、夏季魚卵、仔稚魚種類組成與分布[J]. 周永東,金海衛(wèi),張洪亮,蔣日進,潘國良.  海洋與湖沼. 2013(03)
[3]俄羅斯鱘魚卵與西伯利亞鱘魚卵的營養(yǎng)成分比較[J]. 高露姣,夏永濤,黃艷青,師偉,莊平,張濤,宋超.  海洋漁業(yè). 2012(01)
[4]一種改進的糖蛋白染色鑒別方法的建立[J]. 張世雄,程立均.  中國生物制品學雜志. 2012(01)
[5]條紋密鱸卵黃蛋白原基因的克隆與檢測[J]. 梁岳,方展強.  水產(chǎn)學報. 2011(09)
[6]黑魚子醬加工副產(chǎn)品在中餐中的應用探析[J]. 姚春霞,張蕓.  農(nóng)產(chǎn)品加工(學刊). 2010(12)
[7]糖化酶的結構及催化機制的研究進展[J]. 朱文優(yōu),王新惠,張超.  釀酒. 2009(01)
[8]鱘魚肉營養(yǎng)成分分析及其應用技術[J]. 郝淑賢,石紅,李來好,楊賢慶,岑劍偉.  食品科學. 2008(09)
[9]三種淡水養(yǎng)殖魚魚卵的營養(yǎng)價值評價[J]. 代忠波,丁卓平,劉承初,余從田.  營養(yǎng)學報. 2007(01)
[10]高碘酸-硝酸銀染色法鑒定糖蛋白[J]. 劉翠芳,蔣繼志.  生物技術通報. 2006(S1)

博士論文
[1]基于化學衍生化的蛋白質(zhì)N-糖鏈質(zhì)譜鑒定新方法研究[D]. 佟巍.中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院 2012

碩士論文
[1]四種魚卵中卵黃糖蛋白的提取及結構鑒定[D]. 陳銀.浙江工商大學 2018
[2]雙齒圍沙蠶雌激素受體和卵黃蛋白原基因的克隆及在苯并（a）芘誘導下的表達特征[D]. 岳宗豪.大連海洋大學 2014
[3]大黃魚魚卵和魚精過敏原的性質(zhì)研究[D]. 劉妍妘.集美大學 2014



本文編號：2899541