a国产,中文字幕久久波多野结衣AV,欧美粗大猛烈老熟妇,女人av天堂

東方蠑螈IL-8在肢體再生過程中的表達變化

發(fā)布時間:2020-11-09 20:52
   研究背景:外傷后的肢體再生一直是醫(yī)學(xué)的難點和研究熱點,免疫系統(tǒng)及其調(diào)控機制被認為在傷口愈合及再生完成的過程中發(fā)揮著關(guān)鍵的作用。有尾兩棲類動物蠑螈,具有獨特而強大的再生能力,是研究肢體再生過程中的理想模型。巨噬細胞對肢體早期再生過程至關(guān)重要,但是對啟動巨噬細胞募集至損傷部位的信號,目前還不清楚。白介素8(IL-8)是一種對巨噬細胞有強烈趨化作用的細胞因子,在炎癥反應(yīng)中起到關(guān)鍵作用,IL-8也參與細胞的遷移、血管生成、有絲分裂等生命活動。但是IL-8在傷口愈合和再生中的作用及其機制的相關(guān)研究卻很少。方法及結(jié)果:本實驗首先建立東方蠑螈斷肢再生模型,根據(jù)蠑螈轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果設(shè)計合成引物,利用PCR技術(shù)首次克隆出蠑螈IL-8基因開放閱讀框(ORF)共306bp,可編碼101個氨基酸。通過構(gòu)建原核表達載體pET32a/IL-8,成功誘導(dǎo)表達IL-8融合蛋白,其大小約為29kD。隨后將鎳柱純化得到的融合蛋白作為抗原,制備蠑螈IL-8多克隆抗體,并利用ELISA、細胞轉(zhuǎn)染、Western Blot等技術(shù)檢測抗體特異性。利用實時熒光定量PCR(QRT-PCR),切片原位雜交技術(shù)觀察蠑螈肢體再生不同時間點IL-8在核酸水平的表達變化和分布,發(fā)現(xiàn)IL-8 mRNA在肢體再生早期有明顯的上調(diào),隨著傷口愈合IL-8表達量逐漸下調(diào),直到肢體再生14dpa(day post amputation)恢復(fù)到正常水平,IL-8 mRNA表達主要集中分布在肢體截肢部位處。隨后利用IL-8多克隆抗體,觀察肢體再生不同時間點IL-8在蛋白水平的表達變化及分布,通過Western Blot結(jié)果顯示在蠑螈斷肢后,IL-8蛋白表達量持續(xù)升高,在再生3dpa時達到峰值,直至再生14dpa左右IL-8蛋白的表達逐漸恢復(fù)到正常基線水平,利用熒光免疫組織染色技術(shù)在肢體再生早期傷口處檢測到大量IL-8陽性細胞。結(jié)論:本研究證實IL-8表達在蠑螈肢體再生的早期顯著上調(diào),推測IL-8可能參與肢體再生早期過程。這為進一步揭示IL-8基因在肢體再生過程中的功能,解釋其相關(guān)作用機制提供了基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】:西北大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位年份】:2019
【中圖分類】:Q75;Q78
【部分圖文】:

蠑螈,斷肢,再生模型,肢體


菌;(4) 100mg/mL 氨芐青霉素:以 1:10 的比例溶解到 ddH2O 中,之后用 0.22μm 無菌濾膜過濾,分裝到 1.5mL 的無菌離心管中備用。2.6 試驗方法2.6.1 斷肢模型建立將體長在 6-8mm 的健康蠑螈置于 0.1%三卡因溶液中 7-10 分鐘麻醉蠑螈,使用滅菌剪刀于蠑螈體側(cè)右上方肢體的肘關(guān)節(jié)上方 1mm 處截斷(見圖 1),用鑷子向后推動附著在骨骼上的肌肉組織,用 12 厘米彈簧剪修剪突出的肌肉組織,并確保表面截肢的是扁平的(任何突出的骨頭都會妨礙傷口愈合過程并延遲再生,這也可能導(dǎo)致肢體再生過程中傷口上皮破裂和真菌感染)。將蠑螈轉(zhuǎn)移至清水中,在 25℃下飼養(yǎng),每 24 小時后更換清水。隨后分別在再生 0dpa、3dpa、7dpa、14dpa、30dpa、42dpa 對斷肢進行樣本采集,每個時間點至少取 5 個樣本。

電泳圖,電泳,產(chǎn)物,蠑螈


.2 PCR 獲取目的基因 IL-8本實驗通過 IL-8 基因引物設(shè)計,利用提取的再生過程中不同時間點逆轉(zhuǎn)錄得到蠑螈肢體的 cDNA,利用 PCR 進行蠑螈 IL-8 基因序列擴增糖凝膠電泳檢測(見圖 2),發(fā)現(xiàn)其在目的片段大小處有一段很清晰單 306bp,電泳結(jié)果如下圖所示。時間(dpa) OD260/OD280 濃度(μg/μL0 1.840 0.4403 1.880 0.5207 1.956 0.29914 1.953 0.32730 1.946 0.11442 1.890 0.138

產(chǎn)物純化,蠑螈


.2 PCR 獲取目的基因 IL-8本實驗通過 IL-8 基因引物設(shè)計,利用提取的再生過程中不同時間點逆轉(zhuǎn)錄得到蠑螈肢體的 cDNA,利用 PCR 進行蠑螈 IL-8 基因序列擴增糖凝膠電泳檢測(見圖 2),發(fā)現(xiàn)其在目的片段大小處有一段很清晰單 306bp,電泳結(jié)果如下圖所示。時間(dpa) OD260/OD280 濃度(μg/μL0 1.840 0.4403 1.880 0.5207 1.956 0.29914 1.953 0.32730 1.946 0.11442 1.890 0.138
【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 吳青;鄭曙明;劉發(fā)江;;東方蠑螈[J];水族世界;2006年04期

2 湯大同,劉明玉,王德慶;鎘對東方蠑螈的存活及斷肢再生的影響的初步觀察[J];環(huán)境科學(xué)與技術(shù);1994年01期

3 高云,龍丹,張婷;東方蠑螈觀察報告[J];科學(xué)課;2004年09期

4 張陽春;楊道德;;東方蠑螈的采集與養(yǎng)殖[J];大自然;1996年02期

5 孫玫;;東方蠑螈肢體異位再生的研究[J];品牌研究;2018年05期

6 黃學(xué)馨,諶同光;東方蠑螈的室內(nèi)飼養(yǎng)觀察[J];生物學(xué)教學(xué);1981年02期

7 吳云龍;;東方蠑螈[J];生物學(xué)通報;1985年01期

8 曲韻芳,耿家舉,林秀玉,張繼秀,盧偉成,蔡堡;東方蠑螈正常胚胎發(fā)育與胚后發(fā)育分期的初步觀察[J];動物學(xué)雜志;1966年04期

9 李同國,李治勛,常東洲;談?wù)劥篥F、小鯢和東方蠑螈[J];河南水產(chǎn);1999年02期

10 曲韻芳,林秀玉,郭漢身,朱豐雪,蔡堡;東方蠑螈生殖腺的季節(jié)變化[J];動物學(xué)雜志;1966年03期


相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 蘇嬌嬌;東方蠑螈IL-8在肢體再生過程中的表達變化[D];西北大學(xué);2019年

2 王帥;東方蠑螈的攀附爬行能力及其表面形態(tài)研究[D];南京航空航天大學(xué);2016年



本文編號:2876955

資料下載
論文發(fā)表

本文鏈接:http://www.wukwdryxk.cn/projectlw/swxlw/2876955.html


Copyright(c)文論論文網(wǎng)All Rights Reserved | 網(wǎng)站地圖 |

版權(quán)申明:資料由用戶a81f6***提供,本站僅收錄摘要或目錄,作者需要刪除請E-mail郵箱bigeng88@qq.com
亚洲国产中文精品盗摄| 欧美伊人久久| 亚洲一区二区三区AV激情| bbbbbxxxxx精品农村野外| 国产成人精品久久一区二区| 久久久久精品国产三级美国美女| 午夜免费69性视频爽爽爽| 欧美激情一区二区三级高清视频| 久久国产成人| 国产片| 好吊视频一区二区三区| 日韩精品免费一区二区三区97 | 中文字幕熟女人妻另类癖好| 亚洲另类精品无码专区| 欧美精品乱人伦久久久久久| 青青成线在人线免费啪| AAA级久久久精品无码片软件| 日韩v亚洲v欧美v精品综合| 国产妇女馒头高清泬20P多毛| 97精品久久天干天天天按摩| CAOPORN国产精品免费| av无码精品一区二区三区三级 | 黑人干少妇| 37p粉嫩大胆色噜噜噜| 国产精品麻豆99久久久久久| 乱vodafonewifi熟妇| 黑人97人人模人人爽人人喊| 国产精品乱码| 欧美性生交xxxxx久久久| 国产成人精品久久久| 欧美性性性性xxxxoooo| 人妻互换精品一区二区| 在线你懂的| 黑人巨大超大另类videos| 富民县| AV天堂东京热无码专区| 老师把腿翘起来我要进去了| 亚洲国产成人字幕久久| 2020国产精品永久在线| 午夜福利AV无码一区二区| 中文字幕乱码熟妇五十中出|