mcrA基因的克隆及其在分析沼氣池產(chǎn)甲烷菌多樣性中的應(yīng)用研究
發(fā)布時(shí)間：2020-12-08 03:31
產(chǎn)甲烷菌是嚴(yán)格厭氧菌,利用傳統(tǒng)微生物學(xué)研究方法對(duì)其進(jìn)行研究費(fèi)時(shí)費(fèi)力,而近代發(fā)展起來(lái)的現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù),則避免了這些缺點(diǎn)和不足�，F(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)以其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)在環(huán)境微生物的研究中發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用。本實(shí)驗(yàn)改進(jìn)了沼氣池微生物總DNA的提取方法,經(jīng)過(guò)檢驗(yàn),可滿足本研究的需要。本研究通過(guò)對(duì)產(chǎn)甲烷菌特有mcrA基因的RFLP分析、mcrA基因的熒光定量分析以及16S rDNA的DGGE分析等分子生物學(xué)方法對(duì)農(nóng)村戶用沼氣池中的產(chǎn)甲烷菌群落結(jié)構(gòu)和數(shù)量進(jìn)行了研究。首先擴(kuò)增了沼氣池中產(chǎn)甲烷菌甲基輔酶M還原酶α亞基（mcrA）基因片段,建立產(chǎn)甲烷菌mcrA基因文庫(kù),對(duì)陽(yáng)性克隆用限制性內(nèi)切酶PstⅠ進(jìn)行RFLP分析,酶切后1、2、3、4號(hào)沼氣池分別得到3、4、4、2種OTU（operational taxonomic unit）,從每一類型OTU中選取1-2個(gè)單克隆測(cè)序后進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析。結(jié)果表明,農(nóng)村戶用沼氣池中存在不同的產(chǎn)甲烷菌類群,1號(hào)沼氣池中主要有Methanogenium、Methanocorpusculum和Methanosarcina;2號(hào)池中有Methanogenium、Methan...
【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市
【文章頁(yè)數(shù)】：61 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
輔酶M和甲基化合物到甲基輔酶M的轉(zhuǎn)變A:輔酶M到甲基輔酶M的轉(zhuǎn)變
從后續(xù)的實(shí)驗(yàn)分析來(lái)看可以滿足實(shí)驗(yàn)的需求，如圖3.3 所示。3.3.4 DGGE 分析回收后的 PCR 產(chǎn)物按照 3.2.4 的操作進(jìn)行 DGGE 分析，如圖 3.4 所示。圖 3.3 回收后的 16S rDNA 電泳圖Fig 3..3 Photograph of 16S rDNA after gel extractionM: 100bp DNA maker
.4 不同沼氣池中產(chǎn)甲烷菌 16S rDNA 的 DGGE 圖譜ngerprint of 16S rDNA of the methanogen in different biogapresent the samples of No.1-4 biogas digester respectively.
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]低溫條件下的甲烷生成與嗜冷產(chǎn)甲烷古菌研究進(jìn)展[J]. 袁敏,胡國(guó)全. 中國(guó)沼氣. 2009(03)
[2]3種DNA提取方法對(duì)養(yǎng)殖池塘不同生境菌群PCR-DGGE分析的影響[J]. 何夙旭,周志剛,姚斌,白東清. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報(bào). 2009(01)
[3]分子生物學(xué)技術(shù)在產(chǎn)甲烷古菌研究中的應(yīng)用[J]. 王劉陽(yáng),尹小波,胡國(guó)全. 中國(guó)沼氣. 2008(01)
[4]利用PCR-DGGE技術(shù)指導(dǎo)高溫油藏中功能微生物的分離[J]. 王君,馬挺,劉靜,劉清坤,趙玲俠,梁鳳來(lái),劉如林. 環(huán)境科學(xué). 2008(02)
[5]晉南牛瘤胃中古菌分子多樣性的研究[J]. 裴彩霞,毛勝勇,朱偉云. 微生物學(xué)報(bào). 2008(01)
[6]PCR-DGGE技術(shù)在農(nóng)村戶用沼氣發(fā)酵微生物研究中的初步應(yīng)用[J]. 師曉爽,劉德立,郎志宏,黃大昉,陸偉,李敏. 山東師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2007(02)
[7]一株近海沉積物中產(chǎn)甲烷菌的分離及鑒定[J]. 仇天雷,承磊,羅輝,張輝,吳曉磊,鄧宇. 中國(guó)沼氣. 2007(02)
[8]產(chǎn)甲烷菌的研究進(jìn)展[J]. 郝鮮俊,洪堅(jiān)平,高文俊. 貴州農(nóng)業(yè)科學(xué). 2007(01)
[9]利用FISH和DGGE對(duì)產(chǎn)甲烷顆粒污泥中微生物種群的研究[J]. 邢薇,左劍惡,孫寓姣,李建平. 環(huán)境科學(xué). 2006(11)
[10]應(yīng)用DGGE研究微生物群落時(shí)的常見問(wèn)題分析[J]. 邢德峰,任南琪. 微生物學(xué)報(bào). 2006(02)
本文編號(hào)：2904380
【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市
【文章頁(yè)數(shù)】：61 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
輔酶M和甲基化合物到甲基輔酶M的轉(zhuǎn)變A:輔酶M到甲基輔酶M的轉(zhuǎn)變
從后續(xù)的實(shí)驗(yàn)分析來(lái)看可以滿足實(shí)驗(yàn)的需求，如圖3.3 所示。3.3.4 DGGE 分析回收后的 PCR 產(chǎn)物按照 3.2.4 的操作進(jìn)行 DGGE 分析，如圖 3.4 所示。圖 3.3 回收后的 16S rDNA 電泳圖Fig 3..3 Photograph of 16S rDNA after gel extractionM: 100bp DNA maker
.4 不同沼氣池中產(chǎn)甲烷菌 16S rDNA 的 DGGE 圖譜ngerprint of 16S rDNA of the methanogen in different biogapresent the samples of No.1-4 biogas digester respectively.
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]低溫條件下的甲烷生成與嗜冷產(chǎn)甲烷古菌研究進(jìn)展[J]. 袁敏,胡國(guó)全. 中國(guó)沼氣. 2009(03)
[2]3種DNA提取方法對(duì)養(yǎng)殖池塘不同生境菌群PCR-DGGE分析的影響[J]. 何夙旭,周志剛,姚斌,白東清. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報(bào). 2009(01)
[3]分子生物學(xué)技術(shù)在產(chǎn)甲烷古菌研究中的應(yīng)用[J]. 王劉陽(yáng),尹小波,胡國(guó)全. 中國(guó)沼氣. 2008(01)
[4]利用PCR-DGGE技術(shù)指導(dǎo)高溫油藏中功能微生物的分離[J]. 王君,馬挺,劉靜,劉清坤,趙玲俠,梁鳳來(lái),劉如林. 環(huán)境科學(xué). 2008(02)
[5]晉南牛瘤胃中古菌分子多樣性的研究[J]. 裴彩霞,毛勝勇,朱偉云. 微生物學(xué)報(bào). 2008(01)
[6]PCR-DGGE技術(shù)在農(nóng)村戶用沼氣發(fā)酵微生物研究中的初步應(yīng)用[J]. 師曉爽,劉德立,郎志宏,黃大昉,陸偉,李敏. 山東師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2007(02)
[7]一株近海沉積物中產(chǎn)甲烷菌的分離及鑒定[J]. 仇天雷,承磊,羅輝,張輝,吳曉磊,鄧宇. 中國(guó)沼氣. 2007(02)
[8]產(chǎn)甲烷菌的研究進(jìn)展[J]. 郝鮮俊,洪堅(jiān)平,高文俊. 貴州農(nóng)業(yè)科學(xué). 2007(01)
[9]利用FISH和DGGE對(duì)產(chǎn)甲烷顆粒污泥中微生物種群的研究[J]. 邢薇,左劍惡,孫寓姣,李建平. 環(huán)境科學(xué). 2006(11)
[10]應(yīng)用DGGE研究微生物群落時(shí)的常見問(wèn)題分析[J]. 邢德峰,任南琪. 微生物學(xué)報(bào). 2006(02)
本文編號(hào)：2904380
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