發(fā)布時(shí)間：2020-03-29 11:57

【摘要】：白腐真菌具有較強(qiáng)降解木質(zhì)纖維素的能力，靈芝屬是白腐真菌中的一大類，對(duì)其分類，降解木質(zhì)纖維素高產(chǎn)菌株篩選方法和相關(guān)基因的系統(tǒng)研究，對(duì)利用靈芝降解木質(zhì)纖維素和環(huán)境應(yīng)用有著積極的推動(dòng)作用。 該研究利用靈芝中的真菌免疫調(diào)節(jié)蛋白（FIP）基因、細(xì)胞核核糖體ITS1-5.8S-ITS2序列和線粒體核糖體小亞基V4-V6區(qū)（mt SSU rDNA V4-V6）序列分析了20個(gè)靈芝菌株的遺傳多樣性；在此基礎(chǔ)上建立了從靈芝中篩選漆酶高產(chǎn)菌株的方法，利用外顯子拼接法和cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)分別克隆了靈芝菌株漆酶（Lac）和靈芝錳過氧化酶（MnP）基因序列，并將兩個(gè)基因在畢赤酵母中進(jìn)行了表達(dá)。 研究結(jié)果表明：①不同的標(biāo)記基因?qū)��?duì)靈芝區(qū)分能力不同；②靈芝00679產(chǎn)漆酶能力最強(qiáng)；克隆到的靈芝00679和靈芝50817菌株漆酶cDNA全長(zhǎng)序列分別為1566bp和1563bp，編碼521和520個(gè)氨基酸，，均屬于多銅氧化酶家族；構(gòu)建了靈芝00679漆酶基因(GlLac)表達(dá)載體pPICZαA-GlLac，并在畢赤酵母X33中進(jìn)行了有效表達(dá)；③克隆到的靈芝錳過氧化物酶cDNA序列全長(zhǎng)1337bp，編碼363個(gè)氨基酸，蛋白質(zhì)包括一個(gè)木質(zhì)素氧化酶的催化位點(diǎn)，屬于類似于植物的氧化酶超家族；構(gòu)建了靈芝MnP的酵母表達(dá)載體pAO815-GlMnP，成功轉(zhuǎn)化畢赤酵母SMD1168，表達(dá)出了有活性的靈芝錳過氧化物酶。 主要結(jié)論：使用FIP基因可區(qū)分赤芝組和紫芝組，使用細(xì)胞核核糖體ITS1-5.8S-ITS2基因序列可區(qū)分來自不同地區(qū)的赤芝，使用mt SSU rDNA V4-V6序列能將赤芝中的不同菌株進(jìn)行更好地區(qū)分。從靈芝中成功克隆到的漆酶cDNA序列編碼520個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)，屬于多銅氧化酶家族，克隆到的靈芝錳過氧化物酶全長(zhǎng)cDNA序列編碼363個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)，屬于類似于植物的氧化酶超家族，這兩個(gè)基因均能在酵母中有效表達(dá)。該研究為進(jìn)一步利用漆酶和錳過氧化物酶于環(huán)境修復(fù)和木質(zhì)素的降解奠定了基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：上海師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：X172

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2605936