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海水中胃腸道感染病毒的病原性檢測及風險評價

發(fā)布時間:2024-06-29 03:24
  胃腸道感染病毒是除細菌之外的引起胃腸道疾病的主要病原體之一,通過接觸娛樂用水或食用被污染的貝類感染人體。這類病毒主要來源于人畜糞便等排泄物污染的生活污水,在各種水環(huán)境中普遍存在,并且存活時間長,感染劑量低,可以通過娛樂用水或食用海產(chǎn)品感染人類。因此,建立其快速、高效的檢測技術(shù),對于水傳播疾病的預防和控制是迫切需要的。然而目前尚沒有一種同時確定其感染性和快速定量的方法,給人體健康風險評估帶來了很大的障礙。因此,本論文從這一點出發(fā),開展了以下相關(guān)的工作。 選取具有指示作用的胃腸道感染病毒—腸道病毒(EV)和感染性最強的胃腸道感染病毒—輪狀病毒(RV)為指示微生物,實現(xiàn)以下目標:1.建立快速定量水環(huán)境中具有感染性病毒濃度的方法,同時探討不可培養(yǎng)病毒的病原性檢測方法;2.將此方法在渤海灣天津海域進行了應(yīng)用與可行性分析;3.通過探討病毒在海洋環(huán)境中的存活時間和滅活機理,對病毒感染人體的健康風險進行了實際評估。 主要研究內(nèi)容和研究成果如下: 1.分別建立了腸道病毒代表種脊髓灰質(zhì)炎病毒(PV)和RV的細胞培養(yǎng)結(jié)合實時定量PCR(ICC-qPCR)檢測方法,克服了細胞培養(yǎng)和實時定量PCR技術(shù)單獨作用時...

【文章頁數(shù)】:154 頁

【學位級別】:博士

【部分圖文】:

圖2.1Vero細胞形態(tài)(×100),(a):正常Vero細胞;(b):病變Vero細胞

圖2.1Vero細胞形態(tài)(×100),(a):正常Vero細胞;(b):病變Vero細胞

圖2.1Vero細胞形態(tài)(×100),(a):正常Vero細胞;(b):病變Vero細胞2.2.4.2空斑法測定病毒滴度致細胞病變的病毒,能夠在固態(tài)瓊脂培養(yǎng)基覆蓋下的細胞單層中形成肉可見的空斑,通過計數(shù)形成空斑的數(shù)量可準確地測定病毒滴度[96]。操作過程為1)接....


圖2.2PV1在Vero細胞上形成的空斑(稀釋106倍)

圖2.2PV1在Vero細胞上形成的空斑(稀釋106倍)

.2PV1在Vero細胞上形成的空斑(稀釋10real-timePCR方法的建立erPrimier5.0,根據(jù)脊髓灰質(zhì)炎度保守區(qū)5′UTR設(shè)計引物(PqF/PqRst功能檢測引物和探針的特異性;R設(shè)計實時定量PCR(real-timePCR)....


圖2.3脊髓灰質(zhì)炎病毒電泳圖,其中(a)為構(gòu)建質(zhì)粒的擴增片段(M:DL2000Marker;

圖2.3脊髓灰質(zhì)炎病毒電泳圖,其中(a)為構(gòu)建質(zhì)粒的擴增片段(M:DL2000Marker;

擴增產(chǎn)物經(jīng)電泳檢測,結(jié)果如圖2.3(d)所示。(a)(b)(c)(d)圖2.3脊髓灰質(zhì)炎病毒電泳圖,其中(a)為構(gòu)建質(zhì)粒的擴增片段(M:DL2000Marker;1:陰性對照;2:目的片段);(b)連接后載體引物擴增片段(M:Marker;1-5泳道為連接片段);(c....


圖2.4腸道病毒實時定量PCR標準曲線(a)和擴增曲線(b)

圖2.4腸道病毒實時定量PCR標準曲線(a)和擴增曲線(b)

斜率為-3.407(有效范圍-3.5≤斜率≤-3.0),E=95.5﹪,各項參數(shù)指標良好,并且穩(wěn)定性高,陰性對照無產(chǎn)物擴增,可以作為后續(xù)的標準曲線(圖2.4(a))。(1)靈敏度測試將標準品按10倍梯度稀釋,至終濃度為1.0×100~1.0×109拷貝數(shù)/μL,分別取1μL為模....



本文編號:3997093

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