發(fā)布時間：2020-02-23 03:44

【摘要】：荔枝螺為福建海域常見的食用螺類,可入藥,由于自然分布的地域性,國內(nèi)外對其生物活性物質(zhì)的研究還較少,本論文以海洋荔枝螺為研究材料,對其活性物質(zhì)的提取分離以及抗癌活性的研究進行了探討,試圖解釋其抗癌活性機制及物質(zhì)基礎(chǔ),為海洋天然產(chǎn)物的提取分離純化方法以及其抗癌活性篩選及機制研究提供參考,對海洋來源的天然藥物研究具有重要意義。本實驗以荔枝螺為研究材料,用有機溶劑浸提法對其活性成分進行提取,并用薄層色譜、硅膠柱層析以及制備型液相色譜進行分離純化,通過細胞增殖檢測、細胞凋亡壞死檢測、線粒體膜電位檢測以及PARP蛋白的剪切等手段分析細胞水平的抗癌活性,解釋其抗癌機制。經(jīng)過硅膠柱層析對荔枝螺提取物進行初步分離得到的組分EA-2用CCK-8溶液檢測證明其對乳腺癌細胞MCF-7、肝癌細胞QGY-7703的增殖具有顯著抑制作用,當藥物濃度高于40μg/ml時,兩種癌細胞存活率顯著下降(56%),EA-2對MCF-7和QGY-7703的IC50分別為28 μg/ml和46 μg/ml。EA-2使乳腺癌細胞MCF-7線粒體膜電位顯著下降,細胞形態(tài)發(fā)生凋亡式變化,凋亡細胞的數(shù)量顯著增加,同時能夠使肝癌細胞QGY-7703發(fā)生PARP蛋白剪切,加入泛Caspase抑制劑后細胞存活率增加,說明其對癌細胞的抑制作用主要是通過致凋亡的方式實現(xiàn)的。最后通過硅膠柱層析以及制備型高效液相色譜等方法對活性組分進一步分離純化,得到高純度化合物(98%),通過核磁共振、質(zhì)譜等對其進行結(jié)構(gòu)鑒定,證明其為 6-溴靛紅(6-bromoisatin)。大多數(shù)的天然藥物來源于陸生植物,因其安全、毒副作用小的特性受到人們廣泛關(guān)注,本實驗對21種植物來源的化合物進行了抗腫瘤活性篩選,并用同樣方法對其抗癌活性機制進行了初步探討。21種化合物作用于人膀胱癌細胞T24和KU-19-19,篩選出能夠抑制細胞增殖的藥物,然后通過細胞增殖、凋亡壞死、線粒體膜電位等檢測手段對其抗腫瘤活性進行進一步的分析。篩選結(jié)果顯示葫蘆素B對T24細胞具有明顯的增殖抑制作用,通過進一步的分析,葫蘆素B能夠使癌細胞形態(tài)明顯改變,經(jīng)Hoechst33342以及PI染色后可觀察到凋亡細胞數(shù)量隨藥物濃度增加。線粒體膜電位的下降也證明了葫蘆素B以致凋亡的方式實現(xiàn)了抗腫瘤作用。葫蘆素B的抗癌活性于荔枝螺抗癌活性同樣是由誘導(dǎo)癌細胞的凋亡實現(xiàn)的,可為海洋及陸地來源的天然產(chǎn)物抗癌活性機制研究提供一個初步的參考。
【學(xué)位授予單位】：福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：TQ464

【參考文獻】

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本文編號：2582067