發(fā)布時間：2020-11-20 02:31

　　 背景與目的:Barrett食管(BE)是指食管的一種病理現(xiàn)象,其中伴腸上皮化生者屬于食管腺癌的癌前病變。腸化相關(guān)因子CDX2在Barrett食管中表達增高,同時KLF5在Barrett食管中存在異常去乙酰化狀態(tài),本文旨在探討轉(zhuǎn)錄因子KLF5的異常去乙�；癄顟B(tài)對Barrett食管形成的影響。方法:使用qRT-PCR、western blot和免疫組化法檢測BE組織中KLF5的表達,免疫共沉淀檢測乙�；疜LF5的表達。采用qRT-PCR和western blot檢測人鱗狀上皮細胞HET-1A在酸和/或膽汁酸混合物的作用下IL-6、STAT3、KLF5、CDX2的表達。然后在酸和/或膽汁酸混合物的作用下轉(zhuǎn)染KLF5 siRNA于HET-1A細胞,western blot檢測KLF5、CDX2蛋白的表達。將STAT3過表達質(zhì)粒、STAT3-siRNA轉(zhuǎn)染人鱗狀上皮細胞HET-1A細胞,采用western blot技術(shù)檢測細胞內(nèi)STAT3蛋白、KLF5蛋白表達水平的改變。在HET-1A細胞中轉(zhuǎn)染KLF5過表達質(zhì)粒,檢測KLF5、CDX2蛋白的表達。轉(zhuǎn)染HDAC1過表達質(zhì)粒、P300過表達質(zhì)粒于HET-1A細胞,檢測乙�；疜LF5的蛋白表達水平。結(jié)果:與對照組相比,BE組織中IL-6、STAT3、KLF5、CDX2、HDAC1 mRNA和蛋白表達均升高,但是乙�；疜LF5水平降低。發(fā)現(xiàn)HET-1A細胞在酸和/或膽汁酸混合物的作用下IL-6、STAT3、KLF5、CDX2表達增高,同時組蛋白去乙酰化酶HDAC-1表達也增加。KLF5 siRNA可抑制酸和膽汁酸混合物所致的HET-1A細胞CDX2表達。Western blot結(jié)果發(fā)現(xiàn)STAT3過表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HET-1A細胞后,KLF5表達也上升;而通過siRNA沉默HET-1A細胞STAT3表達后,則能夠抑制細胞內(nèi)KLF5蛋白的表達。在HET-1A細胞中通過KLF5過表達質(zhì)粒上調(diào)KLF5,對CDX2表達無影響。在HET-1A細胞中通過轉(zhuǎn)染HDAC1過表達質(zhì)粒后,使用免疫共沉淀及western blot顯示HDAC1蛋白表達增加,同時后乙酰化的KLF5水平下降,提示HDAC1表達增高可抑制KLF5的乙�；�。然后轉(zhuǎn)染P300過表達質(zhì)粒后,在P300表達上升的同時,乙�；�的KLF5水平增加。結(jié)論:在Barrett食管中,STAT3可調(diào)控KLF5的表達,KLF5可能為IL-6/STAT3與CDX2之間的橋聯(lián)分子。KLF5表達增高及其異常去乙酰化狀態(tài)可能是其調(diào)控鱗狀上皮細胞表達CDX2的關(guān)鍵環(huán)節(jié),從而促進了Barrett食管(BE)的形成。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2020
【中圖分類】：R571
【部分圖文】：

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文192結(jié)果2.1研究表明KLF5、IL-6、STAT3、CDX2、HDAC1在BE中均高表達（1）檢測人BE組織中KLF5的表達。采用免疫組化法和qPCR檢測KLF5在BE中的表達，發(fā)現(xiàn)BE中的KLF5表達高于鄰近正常食管組織(圖1)。圖1A:免疫組化：KLF5在BE中比鄰近正常食管表達高a:BE;b:鄰近正常食管（×200）B:qPCR：KLF5在BE中表達增高Figure1A:Immunohistochemistry:KLF5isexpressedhigherinBEthanadjacentnormalesophagusa:BE;b:adjacentnormalesophagus(×200)B:qPCR:KLF5isincreasedinBE

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文20（2）采用qPCR檢測IL-6、STAT3、CDX2、HDAC1在BE中的表達，發(fā)現(xiàn)BE中的IL-6、STAT3、CDX2、HDAC1表達高于鄰近正常食管組織(圖3)。圖2qPCR檢測的熔解曲線和擴增曲線Figure2MeltingcurveandamplificationcurvedetectedbyqPCR圖3BE與鄰近正常食管中IL-6、STAT3、CDX2、HDAC1mRNA的表達Figure3ExpressionofIL-6,STAT3,CDX2,HDAC1mRNAinBEandadjacentnormalesophagus

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文20（2）采用qPCR檢測IL-6、STAT3、CDX2、HDAC1在BE中的表達，發(fā)現(xiàn)BE中的IL-6、STAT3、CDX2、HDAC1表達高于鄰近正常食管組織(圖3)。圖2qPCR檢測的熔解曲線和擴增曲線Figure2MeltingcurveandamplificationcurvedetectedbyqPCR圖3BE與鄰近正常食管中IL-6、STAT3、CDX2、HDAC1mRNA的表達Figure3ExpressionofIL-6,STAT3,CDX2,HDAC1mRNAinBEandadjacentnormalesophagus
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本文編號：2890806