發(fā)布時(shí)間：2017-12-13 18:17

  本文關(guān)鍵詞：西藏高原紅景天遺傳多樣性與質(zhì)量分析比較

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【摘要】：紅景天在我國(guó)西藏自治區(qū)有32種,2個(gè)變種,約占全世界1/3。因其藥用價(jià)值高,紅景天屬亦于可用于保健食品的物品。因此西藏大花紅景天在臨床、保健食品、美容、化工等方面被大量作為主要原材料。對(duì)于西藏高原紅景天的關(guān)注程度極高,被譽(yù)為“高原人參”。同時(shí)經(jīng)常作為高原特產(chǎn),作為饋贈(zèng)親朋好友的佳品,更重要的是可以用于國(guó)防集訓(xùn)、高原生產(chǎn)建設(shè)、高原旅游等方面,以緩解人體對(duì)高原缺氧的不適。但由于西藏高原處于低溫、缺氧、紫外線(xiàn)強(qiáng)、晝夜溫差大的氣候下,因此,紅景天生長(zhǎng)周期緩慢,2009年被西藏自治區(qū)列為藏藥瀕危物種。如何破解需求量大,供求不足問(wèn)題,本課題從以下幾個(gè)方面進(jìn)行了相關(guān)研究。遺傳多樣性的研究：在紅景天遺傳多樣性方面,該課題首先對(duì)西藏拉薩市、山南地區(qū)、那曲地區(qū)、林芝地區(qū)、日喀則地區(qū)進(jìn)行了資源調(diào)查、樣品采集。發(fā)現(xiàn)紅景天植物分布正在逐年改變生長(zhǎng)區(qū)域,呈現(xiàn)動(dòng)態(tài)分布。自然環(huán)境對(duì)紅景天生長(zhǎng)起決定性的制約,本課題通過(guò)對(duì)西藏高原紅景天遺傳多樣性分析研究,對(duì)于今后紅景天資源分布的確定提供宏觀上的指導(dǎo),另一方面也呼吁人們加強(qiáng)對(duì)自然環(huán)境的保護(hù)。本課題對(duì)采集自林芝地區(qū)長(zhǎng)鞭紅景天(R.fastigiata)、山南地區(qū)齒葉紅景天(R.serrata H.Ohba)、日喀則地區(qū)喜馬紅景天(R.himalensis)的紅景天離體枝條在昆明的室溫條件下進(jìn)行了新梢生長(zhǎng),將采集的紅景天地上枝條樣品,取莖端部約10cm大小的莖尖,置1000ml燒杯中,加入100ml自來(lái)水培養(yǎng),新梢提取不同個(gè)體的基因組DNA,使用通用引物ITS1進(jìn)行PCR擴(kuò)增,結(jié)果四種紅景天存在較高的遺傳多樣性。同時(shí)進(jìn)行了ITS序列測(cè)序,進(jìn)行了分子鑒定,對(duì)獲得3個(gè)植株的完整片段的大花紅景天進(jìn)行分析,表明分布于該區(qū)域的大花紅景天群體中有很高的遺傳多樣性。另外,本文發(fā)現(xiàn)的多樣性位點(diǎn)為進(jìn)一步深入分析大花紅景天的遺傳多樣性提供了技術(shù)基礎(chǔ)和有效引物,也為今后設(shè)計(jì)區(qū)分大花紅景天與其它種類(lèi)的特異的PCR引物提供了基礎(chǔ)。質(zhì)量評(píng)價(jià)方面：在紅景天化學(xué)成分定性定量分析中,采用HS-GC-MS對(duì)紅景天10個(gè)樣品進(jìn)行揮發(fā)性成分分析,從中共分析鑒定了30個(gè)化合物,結(jié)果發(fā)現(xiàn)同種不同產(chǎn)地大花紅景天總離子流圖相似度在0.9以上；長(zhǎng)鞭紅景天相似度接近大花紅景天,齒葉紅景天與大花紅景天相似度差異大。采用HPLC法測(cè)定紅景天樣品中紅景天苷和沒(méi)食子酸的含量,結(jié)果發(fā)現(xiàn)同種不同產(chǎn)地紅景天苷含量差異較大,有一個(gè)樣品沒(méi)有檢測(cè)到紅景天苷；沒(méi)食子酸含量每個(gè)樣品中均檢測(cè)到,但含量高低沒(méi)有規(guī)律性。采用LC-MS/MS法對(duì)大花紅景天主要化學(xué)成分進(jìn)行分析。結(jié)果表明,不同產(chǎn)地大花紅景天藥材之間化學(xué)成分存在著差異。對(duì)不同產(chǎn)地大花紅景天中6個(gè)活性成分,建立定量分析方法,為其進(jìn)一步利用提供依據(jù)。方法：采用30%乙醇提取樣品；Diamonsil C18色譜柱(250-4.6mm)；以乙腈(A)-0.3%磷酸溶液(B)為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)275nm,柱溫25℃。結(jié)果：沒(méi)食子酸、紅景天苷、酪醇、兒茶素、沒(méi)食子酸乙酯、對(duì)香豆酸分別在0.0382μg.ml-1～ 0.382μg.ml-1 (r=0.9998)、0.301μg.ml-1～3.01μg·ml-1 (r=0.9999)、0.0198μg.ml-1～ 0.198μg·ml-1(r=0.9996)、0.0171μg.ml-1～0.171μg.ml-1 (r=0.9996)、0.0045μg.ml-1～ 0.045μg.ml-1 (r= 0.9998)、0.00638μg.ml-1～0.0638μg.ml-1 (r= 0.9994)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系,加樣回收率均符合含量測(cè)定要求。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便,快速,準(zhǔn)確,可用于同時(shí)對(duì)西藏高原大花紅景天中6個(gè)活性成分的含量測(cè)定。對(duì)青藏高原不同產(chǎn)地大花紅景天用紫外分光光度法測(cè)定多糖的含量。方法：采用硫酸-蒽酮法。檢測(cè)波長(zhǎng)617nm。結(jié)果：線(xiàn)性范圍為1.0μg·ml-1～200.0μg·ml-1 (R= 0.9999).結(jié)論：本法方便快捷、準(zhǔn)確可靠,可做為紅景天類(lèi)藥材多糖的測(cè)定方法。藥效毒性是評(píng)價(jià)藥物質(zhì)量的重要指標(biāo)之一,在紅景天藥效學(xué)和毒性比較研究中,對(duì)血栓形成及血流變的影響、耐缺氧試驗(yàn)、對(duì)老年小鼠免疫及抗氧化功能的影響、對(duì)免疫功能低下小鼠免疫功能的影響進(jìn)行了比較研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn),在改善血流變、對(duì)免疫功能的方面,長(zhǎng)鞭紅景天可以作為大花紅景天代用品；增強(qiáng)機(jī)體耐缺氧能力方面,齒葉紅景天可以作為大花紅景天替代品；三種紅景天的急性毒性研究結(jié)果,三種紅景天均屬無(wú)明顯毒性藥物或者藥物安全范圍較大藥物。
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S567.239;R29

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