發(fā)布時間：2018-05-19 12:51

  本文選題：草魚 + MHC　； 參考：《中國農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：主要組織相容性復(fù)合體(Major Histocompatability Complex I, MHC I)類分子是遞呈病毒抗原多肽,激活特異性細(xì)胞毒性T細(xì)胞(Cytotoxic Lymphocyte, CTL)免疫應(yīng)答的核心分子。MHC1類分子最早出現(xiàn)于有頜魚類,但是,魚類MHC Ⅰ類分子的結(jié)構(gòu)及其遞呈抗原多肽的機制目前仍不清楚。 本研究集成了分子免疫學(xué)和結(jié)構(gòu)生物學(xué)技術(shù),首次解析了草魚MHC Ⅰ類分子(Ctid-UBA)和源于SVCV病毒多肽的復(fù)合體(pCtid-UBA)晶體結(jié)構(gòu)。Ctid-UBA的總體結(jié)構(gòu)與已解析的其它MHC Ⅰ-多肽復(fù)合物(pMHCI)結(jié)構(gòu)大致相同,但是具有三個明顯的種屬特征。第一,pCtid-UBA的α3結(jié)構(gòu)域偏移明顯,并且結(jié)合CD8分子的關(guān)鍵殘基發(fā)生了變異,暗示魚類MHC I與CD8的互作方式與其他高等動物有所不同。第二,pCtid-UBA中重鏈與輕鏈的接觸面積最大,而該接觸面積隨著物種進化而降低。另外,在草魚中存在2類輕鏈Ctid-$2m分子,并且都能夠與重鏈和病毒多肽結(jié)合形成穩(wěn)定的復(fù)合體。第三,Ctid-UBA的多肽結(jié)合褙中已存在6個口袋(A-F),但是其氨基酸組成與已解析的pMHCI差異較大,其中D口袋結(jié)合多肽第三位殘基的側(cè)鏈,對穩(wěn)定多肽結(jié)合起到了關(guān)鍵作用。通過對結(jié)合多肽的構(gòu)象分析發(fā)現(xiàn),在水網(wǎng)的輔助下,多肽呈典型的“M”型構(gòu)象。與多肽結(jié)合至關(guān)重要的7個保守氨基酸在Ctid-UBA中就已經(jīng)存在,一致延續(xù)到哺乳動物。將pCtid-UBA與其他物種MHC I的結(jié)構(gòu)進行對比分析后發(fā)現(xiàn),它們在呈遞多肽方面采用的是相似的策略。 克隆了40條Ctid-UBA序列,并與已登錄的38條有效全長序列共同進行了多態(tài)性分析,結(jié)果可劃分為3個分支。利用Wu-kabat公式計算了Ctid-UBA al和α2區(qū)氨基酸變異率,隨后將高變異位點定位在了Ctid-UBA三級結(jié)構(gòu)。結(jié)果證實了這些高變異位點可以影響Ctid-UBA遞呈表位的偏好性。 最后,解析了斑馬魚Dare-β2m-Ⅰ和草魚Dare-β2m-Ⅱ分子的晶體結(jié)構(gòu)。Ctid-β2m-Ⅱ和Dare-β2m-Ⅰ的整體結(jié)構(gòu)與已解析的其他物種β2m相似。通過與之前解析的Ctid-β2m-Ⅰ和Dare-β2m-Ⅱ以及其他高等脊椎動物的β2m比較發(fā)現(xiàn),草魚和斑馬魚的p2m在2個p片層之間多了一個由Ile37和Lys66形成的氫鍵。并且,Ile37和Lys66在硬骨魚中是高度保守的。2個p片層之間由Cys25和Cys80形成的保守的二硫鍵,由Ile37和Lys66形成的特有氫鍵,加上由疏水性氨基酸形成的疏水盒,使得硬骨魚p2m具有比其他物種更穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。草魚的2類β2m都能夠與重鏈結(jié)合形成穩(wěn)定的復(fù)合體,且結(jié)合的方式基本相同;斑馬魚兩類β2的差異氨基酸中,只有4個分布在與重鏈結(jié)合的區(qū)域,推測它們對與重鏈的結(jié)合影響不大。 本研究首次解析了草魚MHC I類分子及草魚、斑馬魚的兩類β2m的晶體結(jié)構(gòu),有利于對魚類CTL免疫的進一步研究,也有利于認(rèn)知MHC I類分子的起源與進化。
[Abstract]:Major Histocompatability Complex I, MHC I) molecules of major histocompatibility complex are the core molecules that present antigenic polypeptide of virus and activate specific cytotoxic T cell cytotoxic T cells (CTLLs) immune response. The structure of fish MHC class I molecules and the mechanism of presenting antigenic peptides are still unclear. This study integrates molecular immunology and structural biology techniques, The crystal structure of Ctid-UBA) and its complex derived from SVCV virus polypeptide, Ctid-UBA, have been elucidated for the first time. The total structure of Ctid-UBA is similar to that of other MHC 鈪，

本文編號：1910166