發(fā)布時(shí)間：2018-05-20 09:25

  本文選題：鉤端螺旋體 + 氟喹諾酮　； 參考：《黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：鉤端螺旋體病是由革蘭氏陰性菌鉤端螺旋體(以下簡(jiǎn)稱(chēng)鉤體)引起的一種全球性、急性的人獸共患傳染病。感染動(dòng)物通過(guò)尿液排出致病性病原體,人和其他哺乳動(dòng)物通過(guò)傷口或者黏膜組織接觸污染的土壤和水源而發(fā)生感染。鉤體病的主要臨床癥狀表現(xiàn)為黃疸、血紅蛋白尿、流產(chǎn),多個(gè)重要臟器衰竭,甚至死亡等,嚴(yán)重危害了人和動(dòng)物的健康。已有研究表明:亞治療量的氟喹諾酮類(lèi)藥物環(huán)丙沙星能通過(guò)調(diào)節(jié)病原菌(葡萄球菌和大腸桿菌)的毒力和宿主的先天免疫來(lái)加重感染。本課題組研究發(fā)現(xiàn):亞治療量的氟喹諾酮類(lèi)藥物諾氟沙星治療鉤體病金黃地鼠導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)組提前發(fā)病和死亡;體外抑菌試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)最低抑菌濃度(MIC)以下的諾氟沙星能使鉤體的形態(tài)變長(zhǎng)。亞治療量的諾氟沙星是否也調(diào)節(jié)了鉤體的毒力,致使患病動(dòng)物感染加重呢?如果是,那么其他的氟喹諾酮類(lèi)藥物在亞治療量下是否也會(huì)有類(lèi)似的現(xiàn)象發(fā)生呢?其內(nèi)在的調(diào)控機(jī)制又是怎樣的呢?對(duì)這些關(guān)鍵問(wèn)題的科學(xué)解答,將有助于進(jìn)一步闡明鉤體的致病機(jī)制。本研究通過(guò)培養(yǎng)黃疸出血型鉤體56601株,選擇金黃地鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,構(gòu)建鉤體急性感染模型,選擇氟喹諾酮類(lèi)藥物的代表性藥物諾氟沙星和環(huán)丙沙星以不同劑量進(jìn)行治療,觀(guān)察并記錄21d動(dòng)物的存活率。應(yīng)用qPCR檢測(cè)金黃地鼠血液、肝臟、腎臟和肺臟組織中鉤體載量及細(xì)胞因子TNF-α和IL-1β的m RNA表達(dá)情況,并通過(guò)H.E.染色進(jìn)行病理組織學(xué)觀(guān)察。評(píng)價(jià)亞治療量的氟喹諾酮類(lèi)藥物對(duì)鉤體病的治療效果,并分析其潛在的作用機(jī)制。體外應(yīng)用不同濃度的諾氟沙星處理鉤體,用暗視野顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡觀(guān)察鉤體形態(tài)的變化,應(yīng)用RT-qPCR檢測(cè)鉤體毒力蛋白Kdp A、Kdp B、Lip L21、Lip L41、Lip L71、Lip L32、Fla A、FlaB、Lig A、LigB的m RNA表達(dá)情況。并將處理后的鉤體攻入金黃地鼠體內(nèi),觀(guān)察動(dòng)物的存活率。綜合評(píng)價(jià)亞治療量氟喹諾酮類(lèi)藥物治療鉤體病所存在的風(fēng)險(xiǎn),并探討其內(nèi)在機(jī)制。研究結(jié)果表明:應(yīng)用102~106鉤體56601株感染金黃地鼠能產(chǎn)生穩(wěn)定的半數(shù)致死結(jié)果,而該鉤體對(duì)金黃地鼠的絕對(duì)致死量為107。應(yīng)用亞治療量的諾氟沙星和環(huán)丙沙星治療感染鉤體的金黃地鼠導(dǎo)致其存活率顯著降低。qPCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn),亞治療量的諾氟沙星治療組體內(nèi)的鉤體載量比未治療組明顯增多。同時(shí),亞治療量的諾氟沙星明顯加重了肝臟、腎臟和肺臟的病理變化,并延遲了TNF-α和IL-1β在血液、肝臟、腎臟和肺臟中的基因表達(dá)。諾氟沙星對(duì)鉤體56601株的MIC為1~2μg/ml,當(dāng)諾氟沙星的濃度為0.25μg/ml時(shí),鉤體的形態(tài)明顯增長(zhǎng)。應(yīng)用ge Norm軟件,篩選出鉤體的內(nèi)參基因?yàn)長(zhǎng)ip L41和Lip L71,通過(guò)2-(?)方法分析鉤體毒力蛋白的表達(dá),結(jié)果0.125μg/ml和0.25μg/ml的諾氟沙星均明顯地上調(diào)鉤體毒力蛋白FlaB和LigB的基因表達(dá)量。綜上所述,本研究證實(shí)了亞治療量的氟喹諾酮類(lèi)藥物治療鉤體病時(shí)存在的風(fēng)險(xiǎn),該風(fēng)險(xiǎn)是通過(guò)亞治療量的氟喹諾酮類(lèi)藥物延遲機(jī)體的炎癥反應(yīng)和上調(diào)鉤體毒力蛋白FlaB和LigB的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。
[Abstract]:Leptospirosis is a global, acute zoonosis caused by the Gram-negative leptospirosis (hereinafter referred to as the Leptospira). Infected animals infect the pathogenic pathogens through urine, and other mammals and other mammals are infected with contaminated soil and water through wound or mucosal tissue. Leptospirosis owners Clinical symptoms are jaundice, hemoglobinuria, abortion, multiple organ failure, and even death, which seriously harm the health of humans and animals. Studies have shown that the fluoroquinolone, ciprofloxacin, can aggravate the virulence of the pathogen (Staphylococcus and Escherichia coli) and the innate immunity of the host. The study found that norfloxacin, a subtherapeutic dose of fluoroquinolone, in the treatment of leptospirosis, caused early onset and death in the experimental group of Leptospira, and in vitro bacteriostasis test found that norfloxacin under the minimum inhibitory concentration (MIC) could make the shape of the Leptospira longer. If so, will the other fluoroquinolones be similar in subtherapeutic doses? What is the internal regulation mechanism? The scientific answers to these key questions will help to further clarify the pathogenesis of the leptospira. This study is made through the cultivation of jaundice. 56601 strains of blood type Leptospira were selected as experimental animals, the acute infection model of Leptospira was constructed, and norfloxacin and ciprofloxacin, a representative drug of fluoroquinolones, were treated with different doses, and the survival rate of 21d animals was observed and recorded. QPCR was used to detect the leptospira in the blood, liver, kidney and lung tissues of golden hamster. The expression of M RNA of cytokine TNF- alpha and IL-1 beta, and histopathological observation by H.E. staining. The therapeutic effect of fluoroquinolone on leptospirosis was evaluated and its potential mechanism was analyzed. The Leptospira treated with different concentrations of norfloxacin was used in vitro and the dark field microscope and laser confocal microscopy were used. The changes of the leptospiral morphology were observed by microscope, and the expression of leptospiral virulence protein Kdp A, Kdp B, Lip L21, Lip L41, Lip L71 were detected by RT-qPCR. The survival rate of the animal was observed by the treated Leptospira, and the survival rate of the animals was observed. The results showed that 56601 strains of 102~106 Leptospira infected with golden hamsters could produce a stable half lethal result, while the Leptospira's absolute lethal dose of norfloxacin and ciprofloxacin in the golden hamster had a significant reduction in the survival rate of the golden hamster. The low.QPCR test found that the load of the Leptospira was significantly increased in the group of norfloxacin treated group than that in the untreated group. At the same time, norfloxacin significantly increased the pathological changes in the liver, kidney and lungs, and delayed the gene expression of TNF- A and IL-1 beta in the blood, liver, kidney and lungs. Norfloxacin was 56601. The MIC of the plant was 1~2 g/ml. When the concentration of norfloxacin was 0.25 g/ml, the morphology of the Leptospira was obviously increased. Using GE Norm software, the genes of the Leptospira were selected to be Lip L41 and Lip L71. The expression of the Leptospira virulence protein was analyzed by 2- (?) method. The results showed that the 0.125 micron g/ml and 0.25 micron norfloxacin were all obviously up regulation of the Leptospira virulence protein. In summary, the present study confirms the risk of subleptospirosis in the treatment of subtherapeutic fluoroquinolones. The risk is to delay the inflammatory response by subtherapeutic fluoroquinolones and to increase the expression of FlaB and LigB of the leptospiral virulence protein.
【學(xué)位授予單位】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：S855

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本文編號(hào)：1914067