發(fā)布時間：2020-11-14 08:08

　　 本論文利用白來航純系雞作為模式動物,通過長期多代試驗,系統(tǒng)研究轉(zhuǎn)mCrylAc基因玉米的飼用安全性,重點(diǎn)分析轉(zhuǎn)基因生物材料對受試動物的生長發(fā)育、腸道健康、器官功能、繁殖性能、免疫反應(yīng)、腸道微生態(tài)等方面的影響,旨在為完善轉(zhuǎn)基因作物飼用安全性評價體系提供方法依據(jù),為制定轉(zhuǎn)基因作物飼用安全國家標(biāo)準(zhǔn)提供數(shù)據(jù)參考。第二章分析轉(zhuǎn)mCrylAc基因玉米(BT)、同源非轉(zhuǎn)基因玉米(CT)和商用非轉(zhuǎn)基因玉米(RF)以及飼糧的營養(yǎng)成分組成,利用仿生法模擬玉米原料及飼糧干物質(zhì)和能量在各個消化道中消解規(guī)律,為轉(zhuǎn)基因玉米的營養(yǎng)實質(zhì)等同性仿生評定方法的研究提供參考。試驗采用單因素完全隨機(jī)設(shè)計,使用單胃動物仿生消化系統(tǒng)模擬飼料原料和飼糧在胃腸道的消化過程,分析CT玉米、BT玉米和RF玉米以及對應(yīng)的飼糧在不同體外模擬消化階段的干物質(zhì)消化率、能量消化率和酶水解物能值的差異。結(jié)果表明：BT玉米和CT玉米以及飼糧常規(guī)概率成分含量和氨基酸組成是相似的。與CT玉米原料及飼糧相比,BT玉米原料及飼糧的干物質(zhì)和能量消化率在體外消化中沒有差異。BT玉米飼糧的酶水解物能值高于CT玉米飼糧(P=0.02, CV=1.12%),測值均處于仿生消化系統(tǒng)測試的誤差范圍內(nèi)(CV≤1.64%)。仿生消化評定方法為轉(zhuǎn)基因飼料營養(yǎng)等同性評價提供新手段。第三章研究了長期飼喂轉(zhuǎn)mCrylAc基因(BT)玉米飼糧對親代蛋雞產(chǎn)蛋性能、蛋品質(zhì)、腸道結(jié)構(gòu)和形態(tài)、組織病理學(xué)結(jié)構(gòu)、器官健康和血清生化指標(biāo)的影響。選取55周齡健康昀純系白來航產(chǎn)蛋雞72只隨機(jī)分為3個處理,每個處理8個重復(fù),每個重復(fù)3只雞,分別飼喂含61.7%的同源非轉(zhuǎn)基因玉米、轉(zhuǎn)mCrylAc基因玉米和商品非轉(zhuǎn)基因玉米。預(yù)飼期2周,試驗期12周。分析蛋雞的體重、產(chǎn)蛋性能(蛋重、產(chǎn)蛋率、產(chǎn)蛋量、日采食量、料蛋比)和蛋品質(zhì)(蛋重、蛋清重、蛋黃重、蛋殼重、蛋形指數(shù)、蛋殼厚度、蛋殼強(qiáng)度、蛋白高度、哈夫單位、蛋黃顏色和蛋白顏色)。在12周飼喂結(jié)束后,每個重復(fù)屠宰1只雞,每個處理共屠宰8只雞,測定屠宰性能和器官重量(心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、胃和卵巢),分析肝臟、脾臟、腎臟和小腸各段的組織結(jié)構(gòu)和形態(tài),并分析肝腎功能相關(guān)的血液生化指標(biāo)。研究表明：與同源非轉(zhuǎn)基因玉米相比,長期飼喂轉(zhuǎn)mCrylAc基因玉米未對純系白來航產(chǎn)蛋雞的產(chǎn)蛋性能、蛋品質(zhì)、肝腎器官結(jié)構(gòu)和功能產(chǎn)生不利影響；與同源非轉(zhuǎn)基因玉米相比,長期飼喂轉(zhuǎn)mCrylAc基因玉米未對產(chǎn)蛋雞的腸道組織結(jié)構(gòu)和功能產(chǎn)生不利影響,但發(fā)現(xiàn)的杯狀細(xì)胞數(shù)量的變化還需結(jié)合腸道微生態(tài)和長期多代試驗結(jié)果進(jìn)行綜合分析。第四章研究了長期飼喂轉(zhuǎn)mCrylAc基因(BT)玉米飼糧對親代蛋雞盲腸食糜微生物區(qū)系的影響。選取55周齡昀健康純系白來航產(chǎn)蛋雞48只隨機(jī)分為2個處理,每個處理8個重復(fù),每個重復(fù)3只雞,分別飼喂含61.7%的同源非轉(zhuǎn)基因玉米(CT)和轉(zhuǎn)mCrylAc基因玉米(BT)。預(yù)飼期2周,試驗期12周,試驗結(jié)束后,每個重復(fù)屠宰1只雞,每個處理8只雞。使用16 S rRNA基因高通量測序技術(shù)分析盲腸食糜微生物的相對豐度,同時使用Real-time PCR分析微生物相關(guān)基因的表達(dá)量。與CT玉米組相比,BT玉米盲腸微生物Ace和Chao 1豐富度、Shannon指數(shù)與覆蓋度均沒有差異。飼喂BT玉米對盲腸幾乎所有微生物相對豐度沒有影響；但BT組盲腸微生物Ruminococcaceae unclassified的相對豐度低于CT組(P=0.02),但Real-time PCR定量進(jìn)一步揭示BT組的Bifidobacterium 和 Ruminococcaceae的表達(dá)量與CT組沒有顯著差異(P=0.33)；BT組Mucispirillum_schaedleri的相對豐度顯著下降(P=0.02)。第五章研究了長期多代飼喂轉(zhuǎn)mCrylAc基因(BT)玉米飼糧對子代母雞生長和健康的影響。試驗分成3個處理,親代同源非轉(zhuǎn)基因玉米——子代同源非轉(zhuǎn)基因玉米(CT-CT)、親代轉(zhuǎn)mCry1Ac基因玉米——子代轉(zhuǎn)mCrylAc基因玉米(BT-BT)和親代商品非轉(zhuǎn)基因玉米——子代商品非轉(zhuǎn)基因玉米(RF-RF)。親代選取55周齡健康純系白來航產(chǎn)蛋雞,子代母雞試驗期從1日齡到36周齡。分析子代母雞的體重和蛋品質(zhì)(蛋重、蛋清重、蛋黃重、蛋殼重、蛋形指數(shù)、蛋殼厚度、蛋殼強(qiáng)度、蛋白高度、哈夫單位、蛋黃顏色和蛋白顏色)。在36周飼喂結(jié)束后,每個重復(fù)屠宰1只雞,每個處理共屠宰8只雞,測定屠宰性能、器官重量(心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟和卵巢),分析肝臟、脾臟、腎臟和小腸各段的組織結(jié)構(gòu)和形態(tài),并測定血液生化指標(biāo)、血常規(guī)和性激素水平。同時分離脾臟單核細(xì)胞,分析測定免疫細(xì)胞亞群。研究表明：與同源非轉(zhuǎn)基因玉米相比,長期多代飼喂轉(zhuǎn)mCrylAc基因玉米未對子代母雞的體重、蛋品質(zhì)、雌性器官發(fā)育、結(jié)構(gòu)和功能、腸道組織結(jié)構(gòu)和功能、免疫指標(biāo)產(chǎn)生不利影響；長期多代飼喂轉(zhuǎn)mCrylAc基因玉米未對子代母雞的肝腎器官結(jié)構(gòu)和功能產(chǎn)生不利影響,但BT-BT組肺臟和腎臟相對重量顯著低于CT組(P0.05)；與CT-CT組相比,BT-BT組肺臟的絕對重量有降低的趨勢(P=0.098),但與RF-RF組肺臟的絕對重量沒有顯著差異(P0.10)；組織解剖時并未發(fā)現(xiàn)肺組織腫脹、充血、質(zhì)地變硬等現(xiàn)象。第六章研究了長期飼喂轉(zhuǎn)mCry1Ac基因(BT)玉米飼糧對子代公雞生長和健康的影響。試驗分成3個處理,親代同源非轉(zhuǎn)基因玉米——子代同源非轉(zhuǎn)基因玉米(CT-CT)、親代轉(zhuǎn)mCry1Ac基因玉米——子代轉(zhuǎn)mCry1Ac基因玉米(BT-BT)和親代商品非轉(zhuǎn)基因玉米——子代商品非轉(zhuǎn)基因玉米(RF-RF)。親代選取55周齡健康白來航產(chǎn)蛋雞,子代公雞試驗期從1日齡到32周齡。分析子代公雞的體重和精液品質(zhì)。在32周飼喂結(jié)束后,每個重復(fù)屠宰1只雞,每個處理共屠宰6只雞,測定屠宰性能、器官重量(睪丸、雞冠、肉髯、心臟、肝臟、脾臟、肺臟和腎臟),分析肝臟、脾臟、腎臟和小腸各段的組織結(jié)構(gòu)和形態(tài)。測定血液生化指標(biāo)、血常規(guī)和性激素水平。同時分離脾臟單核細(xì)胞,分析測定免疫細(xì)胞亞群。研究表明：與同源非轉(zhuǎn)基因玉米相比,長期多代飼喂轉(zhuǎn)mCry1Ac基因玉米未對公雞的生產(chǎn)性能、雄性器官發(fā)育和功能、腸道組織結(jié)構(gòu)和功能、肝腎器官結(jié)構(gòu)和功能、免疫指標(biāo)產(chǎn)生影響。
【學(xué)位單位】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士后
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：S816
【部分圖文】：

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院博±后出站報告?第Ｈ章轉(zhuǎn)■基因玉米在親代蛋雞的飼用安全性評價研巧??在試驗全期（１２周）ＢＴ組與ＣＴ姐蛋雞的十二指腸、空腸和回腸誠毛高度、??隱窩深度和絨毛高度／隱窩深度沒有顯著差異（Ｐ＞０．１０，表３．５）。與ＣＴ姐相比，??ＢＴ組空腸和回腸每根絨毛的杯狀細(xì)胞數(shù)量顯著増多（Ｐ＜?０．０５），但每毫米絨毛??上的杯狀細(xì)胞數(shù)量沒有顯著差異（Ｐ＞?０．１０）；?ＢＴ組十二指腸每根絨毛的杯狀細(xì)??胞數(shù)量有增多的趨勢（Ｐ?＝?０．０８），但每毫米絨毛上的杯狀細(xì)胞數(shù)量沒有顯著差異??（尸?＞０．１０）??３．３．６器官和腸道亞顯微結(jié)構(gòu)??３．３．６．１器官亞顯微結(jié)構(gòu)??

??輳慊?蠐衩自誶狀?凹Φ拇視冒踩?云蘭堊星桑崳?與對照沮（ＣＴ）相比，ＢＴ組產(chǎn)蛋雞的肝臟、脾臟和腎臟組織中均未見明顯??的病理學(xué)變他（圖３．１）。肝臟結(jié)構(gòu)完整，肝臟細(xì)胞的界限清晰可見，未見異常；??贓臟結(jié)構(gòu)完整、邊界清晰可見，脾小結(jié)數(shù)量和直徑未見異常；腎臟皮質(zhì)部和腎小??球體積適中，囊腔結(jié)構(gòu)清晰，腎小管的上皮細(xì)胞胞漿均質(zhì)紅染，髓質(zhì)小體集合管??上皮細(xì)胞胞漿均質(zhì)。??３．３．６．２腸道亞顯微結(jié)構(gòu)??．。寬�！�鸞．??ｂ！夢瞧鮮陽隹??—減養(yǎng)Ｉ．；．幽議??圖３．２轉(zhuǎn)基因玉米對蛋雞的腸道結(jié)構(gòu)的影響（ＨＥ染色，４〇ｘ）?（Ａ）?ＣＴ組十二指??腸，（Ｂ）?ＢＴ姐十二指腸，（Ｃ）?ＲＦ組十二指腸；（Ｄ）?ＣＴ組空膩化）ＢＴ組空腸，（Ｆ）??ＲＦ組空腸；（Ｇ）?ＣＴ姐回腸，（Ｈ）?ＢＴ姐回腸，（Ｉ）?ＲＦ組回腸。??Ｆｉｇｕｒｅ?３．２?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ｏｆ?ｆｅｅｄｉｎｇ?ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ?ｃｏｍ?（ＢＴ?ｃｏｍ）?ｔｏ?ｌａｙｉｎｇ?ｈｅｎｓ?〇打?ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ??ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ?（ＨＥ?ｓｔａｉｎｉ円呂，ｏｒｉ呂ｉｎａｌ?ｍａ呂打ｉｆｉｃａｔｉｏｎ，?４〇ｘ）．?（Ａ）?Ｄｕｏｄｅｎｕｍ?ｆｒｏｍ?ｔｈｅ?ＣＴ?ｃｏｍ?ｇｒｏｕｐ，?（Ｂ）??Ｄｕｏｄｅｎｕｍ?ｆｒｏｍ?ｔｈｅ?ＢＴ?ｃｏｍ?ｇｒｏｕｐ，?（Ｃ）?Ｄｕｏｄｅｎｕｍ?ｆｒｏｍ?ｔｈｅ?ＲＦ?ｃｏｍ?ｇｒｏｕｐ；?（Ｄ）?Ｊｅｊｕｎｕｍ?ｆｒｏｍ??ｔｈｅ?ＣＴ?ｃｏｍ?呂ｒｏｕｐ

Ｆｉｇｕｉ＾ｅ?４．１?民ａｒｅｆａｃｔｉｏｎ?ｃｕｒｖｅｓ?化ｒ?ｃｅｃａｌ?ｂａＵｅｒｉａ?ｏｆ?ｈｅｎｓ?ｆｅｄ?出ｅ?ＢＴ?ｃｏｒｎ?ｄｉｅｔ??采用對序列進(jìn)行隨機(jī)抽樣的方法，Ｗ抽到的序列數(shù)與它們所能代表ＯＴＵ的數(shù)目??構(gòu)建稀釋曲線。稀釋曲線（圖４．１）顯示處理間的盲腸微生物豐富度的具有相似的水??平。曲線趨向平坦，說明測序數(shù)據(jù)量合理，更多的數(shù)據(jù)量只會產(chǎn)生少量新的ＯＴＵ，說??明樣本的測序數(shù)據(jù)量合理。??４．３．３?Ｓｈａｎｎｏｎ－Ｗｉｅｎｅｒ?曲線??利用各盲腸食糜樣品的測序量在不同測序深度時的微生物多樣性指數(shù)構(gòu)建??Ｓｈａｎｎｏｎ－Ｗｉｅｎｅｒ曲線（圖４．２）
【參考文獻(xiàn)】

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1 趙峰;米寶民;任立芹;王鈺明;張宏福;;基于單胃動物仿生消化系統(tǒng)的雞仿生消化法測定飼料酶水解物能值變異程度的研究[J];動物營養(yǎng)學(xué)報;2014年06期

本文編號：2883264