發(fā)布時間：2020-12-18 13:17

　　雜種優(yōu)勢是生物界的一種普遍現(xiàn)象,利用雜種優(yōu)勢可以顯著地提高作物的產(chǎn)量和品質(zhì)。許多研究和生產(chǎn)實踐表明,小麥也和其他雜種作物一樣具有明顯的雜種優(yōu)勢,采用化學(xué)雜交劑誘導(dǎo)的小麥生理型雄性不育具有親本選配自由,可以直接利用常規(guī)品種等優(yōu)點來組配強優(yōu)勢組合,成為目前小麥雜種優(yōu)勢研究利用的主要途徑之一�；瘜W(xué)雜交劑SQ-1是一種新型化學(xué)殺雄劑,能夠誘導(dǎo)小麥產(chǎn)生95%-100%的雄性不育,飽和授粉結(jié)實率可達到85%以上。在生產(chǎn)上,應(yīng)用SQ-1已經(jīng)組配出一批超高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、多抗的雜交小麥新品種。然而,其誘導(dǎo)小麥雄性不育的機理尚不清楚,為了揭示小麥生理型雄性不育的分子機理,更好的為小麥雜種優(yōu)勢利用提供理論依據(jù)和技術(shù)支撐,本研究首先通過細(xì)胞學(xué)的方法對生理型雄性不育系花藥中淀粉積累以及小孢子的細(xì)胞分裂等情況進行了觀察;其次分析了生理型雄性不育系花藥活性氧和抗氧化酶變化以及氧化損傷;然后,以TaPCNA基因作為研究的主體,采用RT-PCR方法擴增小麥TaPCNA基因序列,采用實時熒光定量PCR、原核表達技術(shù)和hiTAIL-PCR方法對該基因的表達及其分子特征進行了分析;最后,利用酵母雙雜交技術(shù)篩選了TaPCNA的互作... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：140 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

擬南芥中雄配子體的發(fā)育Fig.1-1MalegametephytedevelopmentinArabidopsis(Borgetal.2009)

圖 1-2 酵母雙雜交原理示意圖Fig.1-2 The theory of the yeast two-hybrid.5.1.2 酵母雙雜交應(yīng)用酵母雙雜交系統(tǒng)能夠研究已知蛋白間的相互作用，這也是建立該系統(tǒng)的初衷。近大量研究表明，酵母雙雜交技術(shù)不僅能夠應(yīng)用于哺乳動物編碼蛋白質(zhì)相互作用還能來研究高等植物蛋白質(zhì)相互作用。酵母雙雜交系統(tǒng)采用在體內(nèi)進行實驗才研究蛋白間的相互作用，能夠模擬真核細(xì)胞內(nèi)的作用環(huán)境，便于操作，同時其操作是在核酸，不用純化大量蛋白，即使蛋白間很微弱的相互作用也能夠測定。目前，酵母雙雜要有應(yīng)用于下面 3 個方面：（1）檢測已知蛋白質(zhì)間的相互作用。酵母雙雜交系統(tǒng)最立的目的就是用來研究已知蛋白之間的相互作用，假如編碼蛋白質(zhì)的基因已經(jīng)被，利用內(nèi)切酶將這個兩個基因分別插入載體，它們的表達產(chǎn)物分別與 GAL4 DNA- GAL4 DNA-AD 結(jié)合，共同轉(zhuǎn)化含有報告基因的酵母中就能夠就行蛋白互作分析。（選文庫得到與已知蛋白質(zhì)能夠特異相互作用的未知蛋白，獲得新的基因。提取所要組織或器官的總 RNA，反轉(zhuǎn)錄成 cDNA 后，與編碼 GAL4 轉(zhuǎn)錄激活區(qū)的基因雜合構(gòu)建一個所研究材料的 cDNA 文庫，將已知蛋白的編碼基因與編碼 GAL4 的結(jié)合區(qū)

為蛋白質(zhì)相互作用的研究提供了有利的條件，但它們卻也存在一淀就必須要求破碎細(xì)胞，雙雜交技術(shù)不能夠檢測到細(xì)胞核內(nèi)的蛋它們都不能動態(tài)的研究活細(xì)胞生理條件下細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)間的相互速、實時、直接地在活細(xì)胞中判斷蛋白質(zhì)的定位和相互作用。HiFC 技術(shù)檢測 bZIP 和 Rel 家族轉(zhuǎn)錄因子的相互作用和定位。WalC 技術(shù)運用于植物蛋白質(zhì)互作的分析，驗證了轉(zhuǎn)錄因子 bZlP63 目前，BiFC 技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于植物蛋白質(zhì)相互作用研究中。D驗證了 DOF 蛋白 SAD 與 GAMYB 能夠在細(xì)胞核內(nèi)相互作用，在乳特異基因的轉(zhuǎn)錄。Han 等（2008）應(yīng)用 BiFC 技術(shù)研究了水稻白直接的相互作用。吳金燕（2010）通過 BiFC 技術(shù)研究番木 PRSV-VPg 的相互作關(guān)系。Li 等（2011）利用 BiFC 發(fā)現(xiàn)擬南芥作用并且調(diào)控次生壁的形成。楊宗燦（2011）利用 BiFC 技術(shù)研 RRTF1 和 DOS1 在體內(nèi)相互作用。Boruc 等（2010）利用 BiFC周期蛋白依賴的蛋白激酶復(fù)合物，分析了 58 個核心細(xì)胞周期蛋關(guān)系，其中 293 種以前未見報道。

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]溫光敏兩系法雜交小麥技術(shù)體系的研究與應(yīng)用[D]. 楊木軍.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006

碩士論文
[1]番木瓜eIF4E和eIFiso4E的克隆及其與PRSV-VPg互作研究[D]. 吳金燕.海南大學(xué) 2010
[2]小麥輻射損傷效應(yīng)研究與損傷修復(fù)相關(guān)基因的克隆[D]. 朱彩霞.山東師范大學(xué) 2010



本文編號：2924063