發(fā)布時間：2021-03-10 03:03

　　miRNA是一類長度約為22nt的非編碼小RNA分子,其通過與靶基因互補(bǔ)配對降解靶基因mRNA或抑制翻譯的方式在動植物的生理過程中起著重要的調(diào)控功能。目前,關(guān)于miRNA的研究主要聚焦于細(xì)胞內(nèi)miRNA對自身物種的功能研究。例如,植物miRNA能調(diào)控根、莖、葉、花和果實的生長發(fā)育,動物miRNA在器官的發(fā)育方面也起著重要的調(diào)控作用。最近,有研究報道釋放型miRNA能從細(xì)胞被分泌到體液,并能在哺乳動物的體液中循環(huán)運(yùn)動,穩(wěn)定存在。這些釋放型miRNA能被脂蛋白或其它RNA結(jié)合分子運(yùn)載、或被微囊泡包裹,從而在苛刻的環(huán)境（例如RNA酶含量高的環(huán)境、pH極高或極低的環(huán)境）中也能保持較高的穩(wěn)定性。體液中的循環(huán)型miRNA能被引導(dǎo)到靶細(xì)胞以調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)水平。2011年,張辰宇等人發(fā)現(xiàn)水稻衍生的miRNA能穿過哺乳動物的胃腸道進(jìn)入小鼠的血液、肝臟和其它組織中,水稻的miR168在小鼠的肝臟組織中能通過降低低密度脂蛋白受體銜接蛋白（LDLRAP1）的水平,調(diào)節(jié)小鼠的膽固醇水平。該研究為動物攝取的食物遺傳調(diào)控以及基因工程食物提供了新的視野、也為利用小分子核酸預(yù)防或治療疾病提供了可能。然而,最近幾個關(guān)于... 

【文章來源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：220 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 microRNA的概述
        1.1.1 microRNA的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 microRNA的生物合成和作用機(jī)制
        1.1.3 miRNA在植物中的生物學(xué)功能
    1.2 外源miRNA的跨界調(diào)節(jié)研究現(xiàn)狀
        1.2.1 外源miRNA能進(jìn)行跨界調(diào)節(jié)
        1.2.2 外源miRNA不能進(jìn)行跨界轉(zhuǎn)運(yùn)
第二章 引言
    2.1 研究背景
    2.2 研究目的和意義
    2.3 主要研究內(nèi)容
    2.4 技術(shù)路線
第三章 利用高通量測序技術(shù)鑒定川桑的保守miRNA和新miRNA
    3.1 材料和方法
        3.1.1 植物材料和小RNA文庫的構(gòu)建
        3.1.2 小RNA生物信息學(xué)分析
        3.1.3 新miRNA的預(yù)測
        3.1.4 采用qRT-PCR檢測川桑miRNA和靶基因的表達(dá)量
        3.1.5 miRNA靶基因的預(yù)測
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 桑樹3個組織的小RNA分析
        3.2.2 桑樹保守miRNA的鑒定
        3.2.3 桑樹新miRNA的鑒定
        3.2.4 桑樹組織傾向性miRNA的鑒定
        3.2.5 利用RT-PCR檢測川桑miRNA及其靶基因的表達(dá)水平
        3.2.6 miRNA靶基因的預(yù)測
        3.2.7 利用熒光定量PCR檢測靶基因的表達(dá)模式
    3.3 小結(jié)與討論
第四章 栽培桑miRNA的鑒定及其與野生桑miRNA的比較分析
    4.1 材料和方法
        4.1.1 材料
        4.1.2 兩個栽培桑品系總RNA的提取和小RNA文庫的構(gòu)建
        4.1.3 小RNA的生物信息學(xué)分析和保守miRNA的鑒定
        4.1.4 新miRNA的預(yù)測
        4.1.5 miRNA的靶基因預(yù)測
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 栽培桑和野生桑葉片小RNA序列分析
        4.2.2 栽培桑和野生桑保守miRNA的比較分析
        4.2.3 栽培桑和野生桑新miRNA的比較分析
        4.2.4 差異表達(dá)miRNA對應(yīng)靶基因的分析
        4.2.5 栽培桑和野生桑差異表達(dá)的miRNA靶基因的GO和KEGG分析
    4.3 小結(jié)與討論
第五章 家蠶血淋巴小RNA種類的鑒定和分析
    5.1 材料和方法
        5.1.1 家蠶幼蟲血淋巴的收集
        5.1.2 家蠶幼蟲血淋巴小RNA的提取
        5.1.3 家蠶幼蟲血淋巴小RNA文庫的構(gòu)建
        5.1.4 家蠶幼蟲血淋巴小RNA的生物信息學(xué)分析
        5.1.5 家蠶幼蟲血淋巴已知miRNA和新miRNA的鑒定
        5.1.6 家蠶幼蟲血淋巴tRNA衍生片段（tsRNA）的分類鑒定
        5.1.7 家蠶幼蟲血淋巴中表達(dá)量最高且屬于3種氨基酸的tsRNA的位置分析
        5.1.8 存在家蠶幼蟲血淋巴中桑樹源miRNA的鑒定
    5.2 結(jié)果與分析
        5.2.1 家蠶幼蟲血淋巴小RNA種類和長度分析
        5.2.2 家蠶幼蟲血淋巴tsRNA歸類鑒定
        5.2.3 家蠶幼蟲血淋巴已知miRNA的鑒定
        5.2.4 家蠶幼蟲血淋巴新miRNA的鑒定
        5.2.5 家蠶幼蟲血淋巴中植物源miRNA的鑒定
    5.3 小結(jié)與討論
第六章 家蠶體內(nèi)桑樹miRNA的鑒定及miR166b的功能研究
    6.1 材料和方法
        6.1.1 家蠶天然血淋巴、多種組織的收集
        6.1.2 喂食人工合成miR166b的家蠶組織的收集
        6.1.3 RNA提取,反轉(zhuǎn)錄,T-A克隆和Sanger測序
        6.1.4 微滴數(shù)字化PCR（ddPCR）檢測人工合成的miR166b在家蠶攝食前后的拷貝數(shù)
        6.1.5 轉(zhuǎn)錄組測序材料的準(zhǔn)備
        6.1.6 喂食人工合成miR166b前后的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析
        6.1.7 miR166b在30個差異表達(dá)基因和家蠶全長cDNA中的靶位點(diǎn)預(yù)測
        6.1.8 miR166b的候選靶基因和喂食人工合成miR166c或167e的6個差異基因RT-PCR檢測
        6.1.9 喂食人工合成miR166b之后的表型調(diào)查
    6.2 結(jié)果與分析
        6.2.1 利用T-A克隆和Sanger測序驗證桑樹源的miRNA存在家蠶的血淋巴中
        6.2.2 桑樹源的miRNA存在家蠶的多個組織中
        6.2.3 人工合成的miR166b能進(jìn)入家蠶體內(nèi)
        6.2.4 miR166b候選靶基因的表達(dá)水平不被人工合成miR166b所抑制
        6.2.5 家蠶喂食人工合成miR166b后的轉(zhuǎn)錄組分析
        6.2.6 喂食人工合成miR166b后的家蠶表型調(diào)查
    6.3 小結(jié)與討論
綜合與結(jié)論
論文創(chuàng)新點(diǎn)
附錄
參考文獻(xiàn)
在讀期間發(fā)表論文及參加課題
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Plant MicroRNAs and Development[J]. Gang Wu.  Journal of Genetics and Genomics. 2013(05)
[2]小分子RNA在植物葉發(fā)育中的調(diào)控作用[J]. 孫宇哲,查玉龍,翁曉燕,朱睦元,韓凝.  中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報. 2012(08)



本文編號：3073943