發(fā)布時間：2021-03-13 02:13

　　定量分析作物群體、組織和細(xì)胞以至亞細(xì)胞中蛋白質(zhì)表達(dá)水平,對于揭示作物生長發(fā)育過程及其逆境脅迫響應(yīng)的重要生理代謝與品質(zhì)產(chǎn)量調(diào)控規(guī)律具有十分重要的理論意義。然而,傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)定量技術(shù)方法普遍存在著蛋白分析靈敏度低、線性范圍窄、基質(zhì)干擾嚴(yán)重等諸多問題,這在很大程度上制約著從蛋白水平上對作物有關(guān)生理過程及其相關(guān)代謝機(jī)制的深入認(rèn)識。本文基于多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）質(zhì)譜分析技術(shù),結(jié)合蛋白酶解、凈化和同位素標(biāo)記等方法的應(yīng)用,建立了適用于水稻功能蛋白的絕對定量方法,并成功實現(xiàn)了水稻籽粒中Glb33蛋白的絕對定量。主要研究結(jié)果如下:1、開發(fā)了16種典型水稻葉片蛋白的MRM質(zhì)譜分析方法。以實際監(jiān)測到的16種典型水稻蛋白為研究對象,對其酶解特征肽段進(jìn)行選擇和質(zhì)譜條件優(yōu)化。結(jié)果表明,以乙腈和0.1%（v/v）甲酸水溶液為流動相結(jié)合二元梯度洗脫,16種肽段在Poroshell 120 EC-C18色譜柱上獲得良好的分離;在0.02⁵00 nM范圍內(nèi),各肽段濃度與質(zhì)譜響應(yīng)值呈良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)均大于0.99;儀器的檢出限和定量限范圍分別達(dá)到0.007⁰.5 nM和0.... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：119 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

蛋白質(zhì)組學(xué)分析策略

基于質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組學(xué)的技術(shù)路線(Kim et al.,2014)

蛋白質(zhì)標(biāo)記定量和非標(biāo)記定量方法的技術(shù)路線(Anand et al.,2016)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]基于質(zhì)譜的植物蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法[J]. 秦愛,鄭曉敏,王坤.  植物科學(xué)學(xué)報. 2018(03)
[2]基于不同提取方法的水稻葉片蛋白質(zhì)組的二維液相色譜分離及高分辨質(zhì)譜分析[J]. 柴爽爽,馬有寧,高歡歡,秦美玲,楊歡,張涵彤,何巧,林曉燕.  色譜. 2018(02)
[3]穗分化期外施24-表油菜素內(nèi)酯（EBR）促進(jìn)水稻源、庫及籽粒灌漿的生理機(jī)制[J]. 李贊堂,王士銀,姜雯宇,張帥,張少斌,徐江.  作物學(xué)報. 2018(04)
[4]iTRAQ技術(shù)及其在水稻蛋白質(zhì)組學(xué)中的應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 陳凌華,程祖鋅,許明,鄭金貴.  中國農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報. 2017(12)
[5]基于MALDI-TOF MS的串聯(lián)富集策略在磷酸化蛋白組學(xué)中的應(yīng)用[J]. 張傳靜,吳婷,任紅鑫,張玲帆,杜一平.  分析測試學(xué)報. 2017(09)
[6]基于質(zhì)譜的定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀[J]. 牟永瑩,顧培明,馬博,閆文秀,王道平,潘映紅.  生物技術(shù)通報. 2017(09)
[7]蛋白質(zhì)組學(xué)在水稻作物非生物脅迫研究中的應(yīng)用[J]. 羅光宇,肖敏敏,劉愛玲,陳信波.  分子植物育種. 2018(02)
[8]大米過敏的研究進(jìn)展[J]. 王一俠,陸路,徐姍姍,李國明,谷瑞增,蔡木易,魯軍.  食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報. 2017(04)
[9]基于凝集素的唾液糖蛋白分離、分析及應(yīng)用[J]. 孫凱博,尚志,孫妍,喬智,劉莎,樊柳蔭,曹成喜,肖華.  色譜. 2016(12)
[10]基于UPLC-Q-TOF-MS技術(shù)的牛血清白蛋白誘導(dǎo)過敏反應(yīng)的代謝組學(xué)研究[J]. 顧媛媛,張丹丹,馮程,王宇,陳大忠,王艷宏.  中國中藥雜志. 2016(21)



本文編號：3079396