【摘要】 小柴胡湯首見于《傷寒雜病論》,是治療少陽證的經(jīng)典名方。因少陽證癥狀“胸脅痞滿,默默不欲飲食,心煩喜嘔”等與現(xiàn)代醫(yī)學中的抑郁癥癥狀相似,提示小柴胡湯可能具有抗抑郁作用；臨床實踐中有運用小柴胡湯治療抑郁癥的報道。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)小柴胡湯具有增加大鼠腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量的作用,然而系統(tǒng)地對小柴胡湯抗抑郁作用的實驗研究卻鮮有報道。本文擬采用多種抑郁癥動物模型,對小柴胡湯的抗抑郁作用進行研究,并結(jié)合抑郁癥發(fā)病機制在神經(jīng)遞質(zhì)、神經(jīng)營養(yǎng)因子和雌性激素方面的新進展,采用多種藥理學手段,從行為、神經(jīng)生化、蛋白等水平對其抗抑郁作用機制進行探討。首先研究了小柴胡湯在小鼠行為絕望模型中抗抑郁作用的量效和時效關(guān)系,結(jié)果發(fā)現(xiàn)小柴胡湯臨床等效量(7g/kg)在小鼠懸尾實驗和強迫游泳實驗中均顯著縮短不動時間,1/3臨床等效量(2.3g/kg,小鼠；1.7g/kg,大鼠)的小柴胡湯均縮短強迫游泳實中不動時間,并且對自主活動無顯著影響,其中給藥2周時藥效最佳,提示小柴胡湯對大小鼠行為絕望模型均具有抗抑郁作用。為進一步確認小柴胡湯的抗抑郁作用,本文采用藥物誘發(fā)所致抑郁模型進行了研究。發(fā)現(xiàn)小柴胡湯可顯著抑制利血平誘導的小鼠體溫降低和眼瞼下垂癥狀,并可以顯著增加5-HTP誘導的小鼠甩頭次數(shù),說明小柴胡湯具有抗抑郁作用且其機制與調(diào)節(jié)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)水平尤其提高腦內(nèi)5-HT含量有關(guān)。為探討小柴胡湯抗抑郁的神經(jīng)遞質(zhì)機制,采用HPLC-ECD方法發(fā)現(xiàn)小柴胡湯顯著增加行為絕望模型小鼠和大鼠海馬、皮層和紋狀體內(nèi)的DA、5-HT及其代謝產(chǎn)物DOPAC和5HIAA的含量,并且降低DA/DOPAC和5-HT/5-HIAA的值；隨后采用腦微透析結(jié)合HPLC-FLD法檢測大鼠海馬內(nèi)氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì),發(fā)現(xiàn)小柴胡湯顯著降低大鼠海馬透析液中Glu的含量。說明小柴胡湯在行為絕望模型中體現(xiàn)的抗抑郁作用與維持腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)的穩(wěn)態(tài)有關(guān)。本文采用多種不可預見性溫和刺激(Chronic unpredictable mild stress, CUMS)制備大鼠抑郁模型,進行了小柴胡湯抗抑郁藥效的確認,并從神經(jīng)營養(yǎng)因子角度探索小柴胡湯的抗抑郁作用機制。結(jié)果發(fā)現(xiàn)小柴胡湯顯著逆轉(zhuǎn)了CUMS引起的大鼠自主活動的減少、糖水偏愛的降低和攝食量的下降,同時抑制了CUMS引起的大鼠海馬內(nèi)NeuN表達減少、逆轉(zhuǎn)了腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)和神經(jīng)生長因子(NGF)及其受體TrkB和TrkA表達的下降,并且激活了受體下游PI3K/Akt/CREB通路。說明小柴胡湯抗抑郁作用可能與調(diào)節(jié)神經(jīng)營養(yǎng)因子、激活神經(jīng)營養(yǎng)因子受體下游通路、保護神經(jīng)元功能有關(guān)。最后本文采用C57BL/6小鼠斷乳孤養(yǎng)模型對小柴胡湯的抗抑郁作用及與雌、孕激素調(diào)節(jié)的關(guān)系進行考察,發(fā)現(xiàn)小柴胡湯可顯著逆轉(zhuǎn)孤養(yǎng)引起的行為絕望狀態(tài)時間的延長,也顯著抑制孤養(yǎng)誘導的小鼠自主活動的增多和攻擊行為加劇等焦慮樣行為。并且小柴胡湯對孤養(yǎng)誘導的小鼠腦內(nèi)雌二醇和孕酮的降低具有顯著升高作用,同時顯著激活雌二醇和孕酮受體下游ERK和CREB通路的相關(guān)蛋白,說明小柴胡湯對小鼠孤養(yǎng)模型的抗抑郁作用可能與調(diào)節(jié)腦內(nèi)雌、孕激素和受體下游通路有關(guān)。綜上,本研究發(fā)現(xiàn)小柴胡湯對多種因素所致抑郁癥模型的抑郁行為均有改善作用,作用機制可能與維持各類神經(jīng)遞質(zhì)的穩(wěn)態(tài)、增強神經(jīng)營養(yǎng)、調(diào)節(jié)雌、孕激素及其下游信號通路、保護神經(jīng)元有關(guān)。本文揭示了小柴胡湯抗抑郁作用的可能機制,為進一步闡明其抗抑郁作用的靶點研究奠定了基礎(chǔ),也為研發(fā)以小柴胡湯為基礎(chǔ)的治療抑郁癥的中藥復方新藥提供了科學依據(jù)。 

前言

1．抑郁癥概述
迄今為止，關(guān)于抑郁癥的病因并沒有確切的解釋，但近些年研究表明抑郁癥的發(fā)生受神經(jīng)生化、神經(jīng)再生、神經(jīng)內(nèi)分泌和社會環(huán)境、遺傳和藥物誘發(fā)諸多因素的影響。隨著現(xiàn)代社會的高速發(fā)展，競爭日益激烈，人們長時間的處于高壓力，快節(jié)奏的生活狀態(tài)下，伴隨而來的長時間處于焦慮不安中都會促使抑郁癥發(fā)病，因此，社會環(huán)境因素是抑郁癥誘發(fā)的一個不可忽略的因素，長期生活在離異家庭或者單親家庭的兒童患抑郁癥的幾率偏高，充滿家庭暴力的家庭也極其容易導致抑郁癥的發(fā)生。

2.抑郁癥的發(fā)病機制
抑郁癥的發(fā)病機制到目前為止還沒有徹底研究清楚，諸多學者提出了幾種假說，主要包括單胺類神經(jīng)遞質(zhì)假說、內(nèi)分泌假說和神經(jīng)可塑性假說等。這些假說能夠部分解釋抑郁癥的發(fā)病機制，但都有其局限性。下面對抑郁癥主要的幾種發(fā)病機制進行簡述。
近年來認為，中樞神經(jīng)系統(tǒng)的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化是抑郁癥發(fā)病的基礎(chǔ)。其中抑郁癥發(fā)病的生物學機理中，中樞單胺類神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)功能棄亂假說己經(jīng)成為最重要的假說，被大部分學者所認同。單胺類遞質(zhì)系統(tǒng)，主要包括輕色胺能神經(jīng)系統(tǒng)、多巴胺能神經(jīng)系統(tǒng)和去甲腎上腺素能神經(jīng)。單胺假說認為抑郁癥是腦中單胺能神經(jīng)元功能不足，單胺類神經(jīng)遞質(zhì)減少而多數(shù)抗抑郁藥是通過升高突觸間隙單胺遞質(zhì)的水平發(fā)揮抗抑郁作用的。其中，經(jīng)色胺系統(tǒng)功能素亂和神經(jīng)遞質(zhì)的減少是導致抑郁癥的發(fā)病機制之一。精神活動同時受多巴胺能神經(jīng)元的調(diào)節(jié)，中腦邊緣皮質(zhì)系統(tǒng)在精神活動和情緒表達中起到十分重要的作用。近些年大量的實驗證實了多巴胺假說，其中，研究在獲得性無助抑郁癥動物模型中發(fā)現(xiàn)，實驗動物的尾狀核及伏隔核的耗盡，當給予動物多巴胺受體激動劑后，耗盡的行為學狀況得到改善。
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第一章小柴胡湯在行為絕望模型和藥物誘發(fā)模型中的抗抑郁作用研究

1.1前言
藥物誘發(fā)模型是另一類對抗抑郁作用藥效進行初步蹄選的模型，其特點不僅可以在行為學上快速評價藥效，還可以在藥效評價的同時，根據(jù)選用模型的不同推斷出藥物抗抑郁作用的可能機制。這類模型包括利血平誘導小鼠體溫降低和眼瞼下垂模型、誘導的小鼠甩頭模型、阿撲嗎啡拮抗模型、小鼠育亨賓增強模型和苯丙氣戒斷模型等。多年前就己經(jīng)根據(jù)抑郁癥患者的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)耗竭的現(xiàn)象提出了抑郁發(fā)病的單胺假說，患者腦內(nèi)的輕色胺的含量降低也是公認事實。而利血平誘導小鼠體溫降低和眼險下垂模型及輕色氨酸誘導的小鼠甩頭模型是最常用的評價抗抑郁藥物單胺機制的模型。利血平是一種單胺遞質(zhì)耗竭劑，它可以耗竭突觸小泡內(nèi)的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)以及代謝物。

1.2實驗材料
小柴胡湯在行為絕望模型中抗抑郁作用藥效初蹄動物的蹄選將小鼠放入自主活動儀內(nèi)，記錄內(nèi)的活動次數(shù)，內(nèi)自主活動次數(shù)在次的小鼠為合格鼠進行實驗，其余小鼠副除不用。給藥劑量的選擇依據(jù)小鼠行為絕望模型進行抗抑郁作用藥效的初蹄，選取臨床等效量為中劑量，上下各取兩個三倍的劑量共五個劑量，和進行實驗。實驗分組及給藥如圖所示，小鼠共計只，每部分只。每部分小鼠隨機分為組，每組只�？瞻讓φ眨ㄍ�體積蒸館水）組、陽性對照阿米替林組、小柴胡湯，各組每天灌胃給藥次。第一部分共給藥天，其中第天進行，第天進行第二部分共給藥天，第天進行懸尾實驗，第天進行強迫游泳實驗；第三部分共給藥天，第天進行懸尾實驗，第天進行強迫游泳實驗。

第三章小柴胡湯對大鼠慢性不可預見性溫和應(yīng)激模型的保護作用及可能機制.................49
3.1前言......49
3.2實驗材料............................51
第四章小柴胡湯對小鼠孤養(yǎng)模型的保護作用及對腦內(nèi)雌二醇和孕酮的調(diào)節(jié)作用....................71
4.1前言....................71
4.2實驗材料..........................72
全文結(jié)論...................84

第四章小柴胡湯對小鼠孤養(yǎng)模型的保護作用及對腦內(nèi)雌二醇和孕酮的調(diào)節(jié)作用

4.1前言
雌性激素主要分為兩類，即雌激素和孕激素，雌激素主要代表為雌二醇，孕激素是由卵巢的黃體細胞分泌，主要以孕酮為主。臨床研宄表明，無論男性還是女性抑郁癥患者血清雌二醇水平均降低，治療前雌二醇水平與、分數(shù)呈負相關(guān)，與減分率呈正相關(guān)，即雌二醇與抑郁癥的病情嚴重程度呈負相關(guān)，與抗抑郁療效呈正相關(guān)。提示血清雌二醇水平有可能成為預測抑郁癥患者療效的一個指標。另外，是線粒體內(nèi)合成的神經(jīng)類固醇母體，可進一步代謝轉(zhuǎn)化成、等激動性神經(jīng)類固醇。文獻報道，抑郁患者腦脊液中含量低于正常人，在治療重癥抑郁患者的臨床研宄中發(fā)現(xiàn)，給予酮康挫治療的患者血清含量顯著增加，同時抑郁癥狀緩解。目前對抑郁癥患者體內(nèi)含量變化的報道并不一致，但大量研宄證實，的代謝產(chǎn)物是強效的變構(gòu)調(diào)節(jié)因子，具有明確的抗抑郁、抗焦慮作用。

4.2實驗材料
實驗前一天，把1只空白鼠作為入侵鼠放入孤養(yǎng)鼠的飼養(yǎng)籠內(nèi)，孤養(yǎng)小鼠會對“入侵鼠”進行攻擊，行為表現(xiàn)為：在籠底部襲擊空白鼠的尾巴、尖叫并撕咬。觀察內(nèi)孤養(yǎng)鼠對群養(yǎng)鼠的攻擊行為，記錄攻擊行為總時間。給藥前一天和第4周結(jié)束，即造模第10周，為避免多次進行行為學實驗使小鼠消耗體力過大而影響其他指標的檢測，每組取一半的小鼠進行懸尾實驗（另一半的小鼠進行強迫游泳實驗），具體方法見第一章。
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全文結(jié)論

小柴胡湯對行為絕望模型、藥物誘發(fā)模型、大鼠模型和小鼠孤養(yǎng)模型均具有顯著抗抑郁作用。小柴胡湯抗抑郁作用與對單胺類神經(jīng)遞質(zhì)和以及和功能的調(diào)節(jié)有關(guān)，并且與對氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的調(diào)節(jié)有關(guān)。小柴胡湯抗抑郁作用與對血清皮質(zhì)酮的調(diào)節(jié)有關(guān)，小柴胡湯抗抑郁作用與增加神經(jīng)營養(yǎng)因子的表達，促進神經(jīng)營養(yǎng)因子下游通路的活化，進而保護神經(jīng)元，增強神經(jīng)元的功能，維持神經(jīng)遞質(zhì)合成和分泌的穩(wěn)態(tài)等有關(guān)。小柴胡湯抗抑郁作用與增加腦內(nèi)雌二醇和孕酮含量，激活雌二醇及孕酮受體下游通路有關(guān)。
首次在多種抑郁動物模型上確證了小柴胡湯的抗抑郁作用、首次發(fā)現(xiàn)小柴胡湯對血清皮質(zhì)酮水平和腦內(nèi)、的含量具有調(diào)節(jié)作用、對腦內(nèi)和的表達具有增加作用并對其受體下游通路具有激活作用。首次發(fā)現(xiàn)孤養(yǎng)可以降低小鼠腦內(nèi)雌二醇、孕酮表達水平及其受體下游通路各蛋白活化水平，小柴胡湯可顯著逆轉(zhuǎn)孤養(yǎng)誘導的該兩種雌性激素及其受體活化水平.

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